Способ хроматографического анализа биологически активных веществ Советский патент 1991 года по МПК G01N30/90 

Изобретение относится к анализу биологически активных веществ, в частности к хроматографическому анализу наркотиков в тонком слое сорбента, и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях для определения микроколичества сложных многокомпонентных смесей с целью достоверного подтверждения позитивных результатов.

Цель изобретения - повышение селективности и достоверности результатов хро- матографического анализа биологически активных веществ, преимущественно наркотиков, при их определении в бдиологиче- ских жидкостях.

Способ осуществляют следующим образом.

Пробы анализируемых веществ наносят на хроматографическую пластину с готовым слоем силикагеля и на пластину со слоем модифицированного силикагеля, элюируют смесью органических растворителей в камере с насыщением, пластины осматривают в УФ-свете, обрабатывают цветореагентом и идентифицируют анализируемые вещества по значениям Rf, причем для пластин с немодифицированным силикагелем используют неполярные системы растворителей, а для пластин с модифицированным силикагелем - полярные системы этанол-вода при объемном соотношении компонентов

Оч

О

со ел со

Ю

(70-80):(20-30), содержащие 1.0-1.5М хлорида натрия (при определении гашиша или 0,1-0,3% диэтилэмина при определении алкалоидов группы опия и метадона).

Пример 1. На линию старта (1,5 см от края) пластины Силуфол УФ-254(силика- гель) наносят 10 мкл спиртового стандартного раствора каннабиноидов (гашиш), пробы анализируемых веществ, и проводят элюирование восходящим методом в системе петролейный эфир (40-70°С) - диэтило- вый эфир в соотношении компонентов 80:20. По окончании элюирования (фронт элюента не доходит до края пластины 1 см) пластину извлекают из камеры, сушат на воздухе 5 мин и после высушивания опрыскивают 0,5%-ным водным раствором прочного синего Б, На пластине наблюдаются красные, оранжевые и фиолетовые пятна на светло-коричневом фоне. Величины значений Rf разделяемых компонентов гашиша приведены в табл. 1. Затем на стеклянную или типа Силуфол пластину с модифицированным силикагелем (к силикагелю привиты алкилсилильные группы Са) наносят по 10 мкл стандартного раствора каннабинои- дов, проб тех же анализируемых веществ образцов и пластину помещают в камеру, содержащую 1М раствор хлорида натрия в смеси этанол-вода (80:20).

После хроматографического разделения пластину извлекают из камеры, сушат на воздухе в течение 20 мин и опрыскивают 0,5%-ным раствором прочного синего 5. На пластине наблюдаются красные, оранжевые и фиолетовые пятна на светло-коричневом фоне (табл. 1).

Изменение порядка выхода А9-тетра- гидроканнабинола, обладающего психотропными свойствами, позволяет идентифицировать его с большей достоверностью.

П р и м е р 2. На линию старта пластины типа Силуфол УФ-254 (силикагель) наносят по 10 мкл одновременно стандартные хло- рофомные растворы алкалоидов группы опия (морфин, кодеин), исследуемые пробы м хроматографируют в системе этилацетат - метанол - аммиак (90:10:5), После хроматографического разделения пластину извлекают из камеры, сушат на воздухе и затем просматривают в УФ-свете, измеряют величину Rf пятен и проявляют реактивом Марки. Затем на стеклянную или типа Силуфол пластину с привитой алкилсилильной фазой С2 наносят одновременно по 10 мкл хлороформных стандартных растворов морфина и кодеина и тех же самых исследуемых проб. Хроматографируют в системе этанол - вода

(70:30), содержащей 0,1 % об. диэтиламина. После хроматографирования пластину вынимают из камеры, сушат на воздухе 20 мин и просматривают в УФ-свете, фиксируя значения Rf,n проявляют реактивом Марки. Данные по разделению анализируемых алкалоидов опия представлены в табл. 2.

Пример 3. На линию старта пластины типа Силуфол (силикагель) наносят хлороформные растворы метадона, исследуемые пробы и хроматографируют в системе толуол - ацетон - этанол - аммиак (45:45:7,5:7,5). После разделения пластину извлекают из камеры, сушат на воздухе, просматривают в

УФ-свете, измеряют величины Rf пятен и проявляют 5%-ным раствором ванадата аммония. Затем на стеклянную или типа Силу- фол пластину с привитой фазой Cz наносят по 10 мкл хлороформных стандартных растворов метадона и пробтех же самых исследуемых веществ. Хроматографируют в системе этанол - вода (70:30), содержащей 0,3% диэтиламина. После хроматографирования пластину вынимают из камеры, сушат

на воздухе в течение 20 мин, просматривают в УФ-свете, фиксируя значения Rf, и про- являют 5%-ным раствором ванадата аммония.

Результаты ас ализа представлены в

табл. 3.

Формула изобретения

1.Способ хроматографического анализа биологически активных веществ, включающий разделение проб анализируемых веществ на хроматографической пластине с силикагелем и на хроматографической пластине с абращеннофазовым сорбентом, обработку хроматограмм цветореагентом и

идентификацию веществ по их величинам хроматографической подвижности, отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности результатов анализа при определении наркотиков в биопробах, разделение пробы вещества на пластине с обращеннофазовым сорбентом проводят с применением в качестве подвижной фазы полярной смеси растворителей этанол-вода с добавкой органического основания или неорганической соли при содержании этанола в смеси 70-80 об,%, а идентификацию осуществляют путем сравнения величин хроматографической подвижности анализируемого вещества на пластинах обоих тилов.

2.Способ по п. 1,отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности определения основных компонентов гашиша, в качестве добавки используют хлорид натрия с концентрацией 1.0-1.5М в смеси.

3. Способ по п. 1,отличающийся тем, что с целью повышения достоверности определения алкалоидов группы опия и метадона, в качестве добавки используют диэтиламин.

4. Способ поп, 1,отличающийся тем, что в качестве обращеннофазового сорбента используют силикагель с привитой фазой С2Таблица 1

Изобретение касается жидкостной хроматографии и может быть использовано в медицине и фармацевтике для проведения качественного и количественного анализов сложных смесей биологически активных природных соединений, применяемых в качестве лекарственных средств, преимущественно наркотиков. Цель изобретения - повышение достоверности определения наркотических веществ в биологических жидкостях при проведении химико-токсикологической экспертизы. Для этого хро- матографирование обрабатываемой анализируемой смеси проводят на пластинах с силикагелем и с модифицированным силикагелем и применяют в качестве подвижной фазы для пластин с модифицированным еиликагелем 1,0-1,5 М раствор хлорида натрия в смеси CaHsOH-HaO при объемном соотношении компонентов 80:20 (определение гашиша) и 0,1-0,3%-ный раствор диэти- ламина в смеси C2HsOH-H20 при объемном соотношении компонентов 70:30 (определение алкалоидов группы опия и метадона). 3 з.п.ф-лы, 3 табл. СО с

Таблица 2

Таблица 3