Способ подготовки бактериальных клеток при постановке серологических реакций Советский патент 1991 года по МПК G01N33/556 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к серологической идентификации бактериальных культур.

Целью изобретения является устранение неспецифической агглютинации.

Пример 1. Культуру стрептококка засевают в бульон Коникова рН 7,6 и инкубируют при 37°С в течение 24 ч. После этого культуру центрифугируют, отделяют микробную массу и разводят ее физраствором до концентрации 30 млрд кл/мл. В полученную взвесь добавляют 1 %-ный раствор химопси- на из расчета 0,15 мл этого раствора на 1 мл взвеси. Обработанную и контрольную взвеси инкубируют при 37°С в течение 1 ч при периодическом встряхивании. Взвеси контролируют на наличие спонтанной агглютинации визуально по 4-крестовой системе. В контрольной взвеси наблюдается резко выраженная спонтанная агглютинация (4+), обработанная взвесь гомогенна, спонтанная агглютинация не наблюдается.

Идентификацию группы стрептококка в обработанной пробе проводят в реакции ко- агглютинации с коагглютинационными препаратами «ерогрупп стрептококка А, В, С. Реакция коагглютинации с препаратом се- рогруппы А резко положительная (4+). а с препаратами ceporpynn В и С отрицательная (-). Следовательно, стрептококк относится к серогруппе А.

Пример 2. Культуру стрептококка выращивают как в примере 1, а затем разводят физраствором до концентрации 40 млрд кл./мл. Одну часть культуральной взвеси обрабатывают химопсином (0,2 мл 1%-ного раствора химопсина на 1 мл взвеси), а другую оставляют в качестве контроля.

О

ю со ел

СП

со

Взвеси инкубируют в течение 1 ч при 37°С и контролируют как в примере 1.

При этом опытный образец дает положительную реакцию коагглютинации с препаратом группы С (4+) и отрицательные реакции (-) с препаратами серогрупп А и В, тогда как контрольный образец дает положительные реакции с препаратами серо- группы С (4+) и А (3+) при отрицательной реакции с препаратом серогруппы В (-). Сле- довательно, выделенный стрептококк относится к серогруппе С, что удается установить только в результате обработки микробных клеток химопсином, устранившим перекрестную реакцию с препаратом серогруппы А.

Пример 3. Культуру стрептококка подращивают и обрабатывают как в примере 1. При визуальном контроле отмечают отсутствие спонтанной агглютинации в опытном и контрольном образцах. Поэтому в них определяют групповую принадлежность.

В данном примере образец, обработанный химопсином, дает резко положитель- ную реакцию коагглютинации с препаратом группы В при отрицательных реакциях с препаратами серогрупл А и С. Контрольный образец резко положительно (4+) реагирует с препаратом серогруппы В и слабоположи- тельно (2+) с препаратом серогруппы С при отрицательной реакции с препаратом серогруппы А.

В таблице представлен сравнительный анализ результатов использования различ- ных ферментов (трипсин, химотрипсин, панкреатин), применяемых для повышения специфичности серологических реакций по сравнению с химопсином.

Пример 4. Культуру менингококка Nelsseria meningitldis B-202, засевают в сывороточный бульон рН 7,6 и инкубируют при 37°С в течение 18 ч. После этого культуру центрифугируют, отделяют микробную массу и разводят ее физраствором до концентрации 10 млрд кл./мл. В полученную взвесь добавляют 1%-ный раствор химопсина из расчета 0,15 мл этого раствора на 1 мл взвеси. Обработанную и контрольную взвеси инкубируют при 37°С в течение 1 ч при периодическом встряхивании, Взвеси контролируют на наличие спонтанной агглютинации по 4-крестовой системе. В контрольной взвеси наблюдается резко выраженная спонтанная агглютинация (4+). Обработанная взвесь гомогенна, спонтанная агглютинация не наблюдается.

Далее проводят идентификацию менингококка в обработанной химопсином пробе в реакции агглютинации на стекле с груп- поспецифическими сыворотками А, В, С, D, X, Y. Положительная реакция (4+) наступает с сывороткой серогруппы В, с другими сыворотками реакция отрицательная (-). В реакции агглютинации с необработанной культурой наблюдается спонтанная агглю- тин ация.

Таким образом, обработка химопсином бактериальных клеток устраняет неспецифическую агглютинацию (спонтанную и перекрестную) в серологических реакциях.

Формула изобретения

Способ подготовки бактериальных клеток при постановке серологических реакций, включающий инкубирование бактериальных клеток с раствором фермента и последующее их отделение, отличающийся тем, что, с целью устранения неспецифической агглютинации, в качестве фермента используют химопсин.

Изобретение относится к микробиологии, в частности к серологической идентификации бактериальных культур. Целью изобретения является устранение неспецифической агглютинации. Поставленная цель достигается тем, что бактериальные клетки перед постановкой реакции обрабатывают химопсином. Эта обработка способствует повышению специфичности серологических реакций за счет устранения спонтанной и перекрестной агглютинации. 1 табл.