Способ моделирования постнекротического цирроза печени Советский патент 1991 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может найти применение в научно-исследовательских лабораториях при создании модели цирроза печени.

Целью изобретения является повышение воспроизводимости при сокращении сроков моделирования

Способ осуществляется следующим образом.

Животному натощак с интервалом в 6-7 дней двукратно внутрибрюшинно вводится гелиотрии в дозе соответственно 5 и 3 мг на 100 г массы тела крысы и 50-30 мг/кг массы тела собаки На 14-15-е дни после первичной затравки животному в условиях острого опыта (наркоз, лапоротомия) в воротную вену печени в течение 1 мин вводится тромбо- вар в дозе 1-2 мг на 100 г массы тела крысы в 1,5-2,5 мл физиологического раствора, и 10-20 мг/кг массы тела собаки в 15-25 мл

физиологического раствора Животные содержатся на стандартном лабораторном вскармливании. Забой животных и биопсию печени осуществляют в сроки 6, 8, 12 15 недель со дня первого введения гелиотрина Пример Собака Белка, самка беспородная, массой 9 кг 25 VII 89 г - внут- рибрюшиннс введено 450 мг гелиотрина Через 3 ч после введения наблюдалась рвота К концу первых суток открылся понос, продолжавшийся 2 сут Животное вялое безучастное от пищи отказывается пьет воду Улучшение состояния отмечено на 4-е сутки Потеря в массе 1,5 кг

02 v/lil 89 - масса собаки 7 5 кг, повтор ное введение (внутрибрюшинно) гелиотри на в дозе 225 мг животное перенесло легче Также наблюдался понос продолжавшийся 1 сут С конца оетьи-- суток собака ест и пьет лучше, бопее активна

м о о сл

XI

х|

09.VIII.89 - масса 7 кг. Под эфирным наркозом с управляемой вентиляцией легких (РО-2) произведена срединная лапаро- томия. Печень увеличена, темно-бурового цвета, селезенка не увеличена, Канюлиро- вана брыжжечная вена, давление 80 мм вод.ст., сделана мезентерикопортография, на которой хорошо проконтрастированы внутрипеченочные ветви воротной вены, признаков блокады нет. Катетер продвинут до воротной вены в 15 мл теплового физиологического раствора во внутрипеченочное русло введено 70 мгтромбовара. После введения тромбовара давление в воротной вене повысилось до 120 мм вод.ст., катетер удален. Произведена краевая биопсия печени (0,,5 см). Внутрибрюшинно введено 100 тыс. ед. пенициллина, брюшная стенка послойно ушита наглухо, йод. Лапаротомию животное перенесло без осложнений, в течение 2 дней наблюдался жидкий стул, потеря в массе 1 кг. Кормление стандартное лабораторное.

26.VIII.89 - (33 дня). Под эфирно-кислородным наркозом с управляемой вентиляцией легких (РО-2) произведена срединная лапаротомия с иссечением старого рубца. Печень увеличена, плотная, края закруглены, по нижней поверхности определяются небольшие узелки (0,5x9,5 см). Печень спаяна с желудком тонкой кишкой. Селезенка увеличена до малого таза, средней плотности. Канюлирована ветвь верхней мезенте- риальной вены, давление 90 мм вод.ст. На мезентерикопортограмме характерная картина внутрипеченочной блокады портального кровообращения с умеренным коллатеральным сбросом портальной крови в гастро-эзофагиальную зону. Произведена краевая биопсия печени (0,5% 0,5 см), де- нервация общей печеночной артерии с перевязкой левой желудочной артерии, резекция 1/2 селезенки. Гемостаз, послойно швы на рану, йод.

Морфология печени. Глиссонова капсула резко утолщена, разросшаяся, местами отечная и разрыхлена. Портальные тракты резко расширены, междольковые артерии и вены с зияющим просветом, кровенапол- нены, эндотелий набухший, слущен в просвет. Балочная структура полностью отсутствует. Гепатоциты в состоянии полной дистрофии с пикнотическими ядрами, Синусоиды спавшиеся. Выявляются очаги жировой дистрофии. Местами отмечается формирование ложных долек.

Вывод: хронический активный гепатите переходом в цирроз.

П р и м е р 2. Крыса белая, беспородная, самец, масса тела 185 г. 14.VII.89 - внутрибрюшинно введено 9,5 мг гелиотрина. В течение суток животное остается вялым, оборонительная реакция отсутствует, плохо ест. Активность восстанавливается с вторых

суток, но сохраняется малоподвижность, часто пьет воду, бледнеет радужная оболочка глаз. На 5-е сутки животное активно ест, не отличается от контрольных. Потеря в массе Юг.

0 21.VII.89 - внутрибрюшинное введение второй дозы гелиотрина 6 мг. Животное стало вялым, шерсть тусклая, оборонительная реакция на выражена. Активно ест на третьи сутки.

5 27.VH.89 - масса крысы 170 г, животное агрессивное. Под эфирным наркозом произведена срединная лапаротомия. Печень увеличена, плотновата, края закруглены, селезенка не увеличена. Пунктирована во0 ротная вена (давление 145мм вод.ст.) в 2 мл теплового физраствора введено 3,2 мгтромбовара. После введения давление в воротной вене повысилось до 200 мм вод.ст., гемостаз, брюшная стенка ушита наглухо,

5 йод. Послеоперационное течение гладкое, животное активно ест с 3-го дня, агрессивно. Операционные швы чистые, заживление первичное. Кормление стандартное лабораторное.

012.Х.89 -(12-я неделя наблюдения). Под

эфирным рауш-наркозом произведена лапаротомия. В брюшной полости выпот до 4-5 мл Печень темно-бурого цвета, плотная, бугристая, спаяна с диафрагмой, же5 лудком, петлями кишки. Селезенка увеличена (3,1 г против 0,75 г контроля), плотная, окутана сальником. Мезентериаль- ные сосуды набухшие, извиты. Воротная вена канюлирована, давление 195 мм вод. ст.

0 Биопсия печени.

Патоморфология печени. Общая структура печени изменена за счет образования ложных долек различной величины. Между дольками кольцевидное разрастание соеди5 нительно-тканных клеток в различных стадиях зрелости. Некоторые дольки окружены обширными кровоизлияниями. Печеночные клетки с эозинофильным уплотнением протоплазмы, границы их не определяются. Ядра полиморфны, встречаются огромные

0 гиперхромные ядра в виде клякс, Большое количество клеток в состоянии некроза с распавшимся ядром на глыбки хроматина. Единичные крупные с нечеткими контурами ядра гепатоцитов в состоянии вакуолиза5 ции. Встречаются желчные тромбы в капиллярах.

Вывод: гепатодистрофия с множественным некрозом печеночных клеток. Диструк- ция паранхимы. Анулярное разрастание

соединительной ткани и образование ложных долей (сформированный микромодулярный цирроз печени).

ПримерЗ. Собака Рыжик, самец, беспородная, массой 12 кг.

25.VII.89 - внутрибрюшинно введено 600 мг гелиотрина. В течение 2 ч отмечалась рвота. К концу дня - понос с примесью крови. Собака вялая, забилась в угол, от пищи отказывается, воду пьет. Состояние улучшилось на третьи сутки. Потеря в массе 1,5 кг.

2,VIII.89 - внутрибрюшинно введена вторая доза гелиотрина (330 мг). Животное проявляет некоторую агрессивность, но малоподвижно, рвоты нет. К концу дня отмечен двукратно жидкий стул без примеси крови. Активность восстановилась на 3-й сутки, ест хорошо.

10.VIII.89 г. - масса 10 кг. Под эфирно- кислородным наркозом с уравляемой вентиляцией легких (РО-2) произведена срединная лапаротомия. Печень увеличена, плотновата, края острые, селезенка не увеличена. Канюлирована ветвь верхней брыжеечной вены, давление 75 мм вод.ст., введено 10 мл верографина. На мезентери- копортограмме хорошо контрастированы разветвления воротной вены, видна капиллярная фаза заполнения, признаков блокады вортального кровообращения нет. Катетер продвинут до воротной вены, в 20 мл теплого физраствора во внутрипеченоч- ное русло воротной вены введено 100 мг тромбовара. После введения тромбовара давление в воротной вене составило 155 мм вод.ст. Внутрибрюшинно введено 100 тыс. ед. пенициллина, брюшная стенка послойно ушита наглухо, йод. После операции наблюдался жидкий стул в течение дня. Рана зажила первичным натяжением, собака быстро активизировалась. Уже с третьего дня хорошо ест, не агрессивна. Питание стандартное, лабораторное.

17.Х.89 -(11-я неделя наблюдения). Под эфирно-кислородным наркозом послойно вскрыта брюшная полость по средней линии с иссечением старого рубца. Печень увеличена, плотная, мелкобугристая, спаяна с левой почкой, тонкой кишкой и желудком. Вены желудка расширены, извиты, брыжеечные лимфоузлы резко увеличены. Произведена краевая биопсия правой доли печени с захватом небольшого узелка. Канюлирована ветвь верхней мезентериаль- ной вены, давление 105 мм вод.ст., введено 10 мл верографина, сделан снимок. На ме- зентерикопортограмме плохо контрастированы внутрипеченочные ветви правых долей печени, но и слева видны расширенные обрубки ветвей воротной вены. Отдельные коллатерали в желудочно-пище- водное сплетение.

Патоморфология биоптата печени. Структура печени изменена благодаря раз5 растанию соединительно-тканных тяжей, перетягивающих паренхиму и образующих ложные дольки различной величины. Имеются дольки с двумя центральными венами или с одной смещенной к периферии. Гепа0 тоциты дискомплексированы, не складываются в балки и трабекулы. Цитоплазма их с очагами грубой зернистой дистрофии, а в единичных гепатоцитах резко вакуолизиро- вана. Ядра резко полиморфны, имеется

5 большое количество крупных гиперхромных ядер с отчетливым ядрышком. Попадаются фигуры деления ядер и небольшие очаги с безъядерными некробиотическими и некро- тизированными клетками. Кровенаполне0 ние сосудов слабое.

Вывод: сформулированный микромодулярный цирроз печени. Кольцевидное разрастание соединительной ткани с образованием ложных долек, Белковая дис5 трофия печеночных клеток,- полиморфизм ядер, некробиоз и некроз клеток.

Воспроизводимость способа моделирования цирроза печени изучена на 100 белых

0 беспородных крысах самцах массой 160- 200 г и 28 беспородных собаках (11 самок, 17 самцов) массой 9-17 кг. При оценке эффективности способа не учтены 3 крысы и 1 собака, погибшие от передозирования нар5 котического вещества. Из 97 крыс, получивших двукратно гелиотрин (суммарная доза 8 мг на 100 г м.т.) и однократно тромбовар (2 мг/100 г массы тела), погибли 19 животных (19,6%). Из 27 собак, затравленных двукрат0 и© гелиотрином (суммарная доза 80 мг/кг массы тела) и однократно получивших тромбовар (10 мг/кг массы тела), погибли 7 животных (25,9%). Забой животных или операционную биопсию печени производи5 ли в сроки 6, 8, 12, 15 недель со дня первичной затравки гелиотрином. Формирование цирроза печени начиналось уже с 6-й недели заболевания, когда в 27,7-50% случаев из числа обследованных животных началь0 ные признаки цирротической трансформации, а к исходу 12-й недели во всех сериях опытов наблюдалась морфологическая картина сформированного микромодулярного цирроза печени. Общая воспроизводимость

5 способа с учетом животных, погибших в период затравки, составила 61,9% у крыс и 59,2% у собак. Из числа животных, доведенных до окончания экспериментов, 95-100% случаев получен сфо| минованный цирроз печени.

Ранняя искусственная блокада внутри-Формула изобретения печеночного (синусоидального) русла портального кровообращения с помощьюСпособ моделирования постнекротиче- сосудосклерозирующего препарата тромбо-ского цирроза печени, включающий введе- вара на стадии развития острого гепатита,5 ние гелиотрина экспериментальному вызванного гепатотоксичным агентом (ге-животному, отличающийся тем, что, с лиотрином), ведет к значительному сокра-целью повышения воспроизводимости при щению сроков моделирования циррозасокращении сроков моделирования, гелио- печени (1,5-3 против 6-12 мес по известно-трин вводят двукратно внутрибрюшинно с му способу), увеличению его воспроизводи-10 интервалом 6-7 дней в субтоксических домости (59,2-61,9 против 15-45% в аналоге) изах, а затем через 14-15 дней во внутрипе- соблюдению основных этапов развития изу-ченочное русло воротной вены вводят чаемого процесса; острый гепатит, его хрони-тромбсвар в дозе 10-20 мг/кг массы живо- зация и цирротическая трансформация.тного.

Изобретение относится к экспериме- тальной медицине и может найти применение в научно-исследовательских лабораториях при создании модели цирроза печени. Цель изобретения - повышение воспроизводимости при сокращении сроков моделирования Животному натощак с интервалами в 6-7 дней двукратно внутри- боюшинно вводят гелйотрин Доза гелио- трина 6-3 мг/100 г массы тела крысы и 50-30 мг/кг массы тела собаки На 14-15 дни после первичной затравки животному под эфирным наркозом производят лапэро- томию Затем в воротную вену печени в течение 1 мин вводят сосудосклерозирующии препарат - тромбовар Дозы 1-2 мг на 100 г массы тела крысы в 1,5-2 5 мл физиологического раствора, 10-20 мг/кг массы тела собаки в 15-25 мл физиологического раствора Забой животных и биопсию печени осуществляют через 6, 8, 12 15 недель со дня первого введения гелиотрина Сроки модепирования сокращаются с 6-12 до 1,5- 3 мес, а воспроизводимость повышается с 15-45 до 59 2-61,9% сл С