Способ получения иммуноглобулинов Советский патент 1992 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится к иммунобиологии и может быть использовано для изучения иммунной системы крупного рогатого скота, а также в биопромышленности при изготовлении реагентов, используемых в скотоводстве для генетической паспортизации и контроля воспроизводства племенных животных.

Цель изобретения - повышение титра и увеличение выхода иммуноглобулинов.

Поставленная цель достигается тем, что аллоиммунизацию крупного рогатого скота проводят смесью эритроцитарных антигенов, связанных с корпускулярным препаратом, полученным из пекарских дрожжей - Нитра 1.

Для приготовления препарата Нитра-1 один килограмм пекарских дрожжей (Sacharomyces cevevlslae) (200 г сухого вещества) размешивают в 3 л дистиллированной воды. С помощью раствора гидроокиси натрия доводят рН суспензии до 6,2. Полученную смесь нагревают в ферментере до 73°С и в нем же быстро охлаждают до 10°С. После этого температуру суспензии доводят до 53°С и при этой температуре ее выдерживают в течение 24 ч для протекания аутоли- за. Полученную смесь центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20-25 мин. Поверхностную жидкость центрифугата (суперна- тана) удаляют, а к осадку (седименту) добавляют 820 мл 6%-ной гидроокиси натрия и после центрифугирования в течение 20 мин при 3000 об/мин добавляют 750 мл 10% фосфорной кислоты и еще раз центрифугируют также 20 мин при 3000 об/мин. Центрифугат промывают дистиллированной водой до достижения рН 6,5. В результате

3

VI

00

VJ

получают корпускулярный препарат, состоящий из клеточных фрагментов дрожжей (препарат Нитра-1). Препарат используют в качестве иммуностимулятора.

Для аллоиммунизации крупного рогато- го скота препарат Нитра-1 с помощью физи- ологического раствора доводят до концентрации 2.5%. К 10 мл крови, взятой у животного-донора, добавляют 5 мл 2,5%- ного препарата Нитра-1, встряхивают и вы- держивают в течение 30 мин при комнатной температуре. После этого смесь инъецируют животным - реципиентам три раза с недельным интересом внутримышечно.

Для приготовления иммуноглобулино- вой сыворотки у реципиентов отбирают в нужном количестве кровь, из нее выделяют сыворотку, определяют титр сыворотки. Полученная сыворотка содержит преимущественно иммуноглобулины типа М. кото- рая используется для получения из нее реагентов.

Пример. Опыт проводят на откормочных быках, а также на монозиготных двойнях крупного рогатого скота, полученных после деления эмбриона и последующей пересадки половинок в Биоцентре НИИЖ г. Нитра.

Иммунный ответ на инъекцию смеси, связанный с препаратом эритроцитарных антигенов (10 мл крови + 5 мл 2,5%-ной корпускулярной суспензии клеточных фрагментов дрожжей), исследуют на 10 быках черно-пестрой и красно-пестрой пород весом 450 кг. Смесь инъецируют внутримы- шечно три раза в течение трех недель. Контрольных быков (10 гол.) иммунизируют 10 мл крови без добавки препарата. Остальные условия одинаковы.

Анализ сывороток на содержание имму- ноглобулинов проводят через 0,3 и 4 недели в процессе иммунизации, а также спустя 2 недели после прекращения иммунизации (табл.1-3). Осмотр участков тела, в которых делается внутримышечные инъекции, не вы- являют какие-либо побочные явления. От животных получают сыворотки в количестве 0.8 л от каждого. Абсорбционными и гемо- литическими тестами из них выделяют 12 моноспецифических реагентов.

Влияние иммуностимулятора Нитра-1 на уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови быков представлено в табл.1

Титры гемолитических поликлональных антител у контрольных быков даны в табл.2

Титры гемолитических поликлональных антител у быков при иммунизации с использованием адъюванта даны в табл.3.

Затем указанный иммуностимулятор испытывают на двойнях - двух быках черно- пестрого скота, полученных путем деления эмбриона и последующей пересадки двум реципиентам. Иммуногенетический анализ подтвердил идентичность происхождения данных монозиготных близнецов № 1 и Nfc 2.

Монозиготы близнецы представляют ценность, так как уровень иммунного ответа, как количественный признак имеет низкую наследуемость (порядка 0,1-0,2), а поэтому одна пара монозигот может заменить примерно 20-25 голов обычных животных.

Быков-близнецов инъецируют первому только этироциты, а второму эритроциты в смеси с адъювантом (10 мл + 5 мл 5%-ного адъюванта). В результате после второй иммунизации (спустя 7 дней) близнец, получивший инъекцию с иммуностимулятором вырабатывает антитела в титре 1:32, а у контрольного быка отмечают начальную слабую реакцию только в неразведенной сыворотке.

Таким образом, указанный препарат Нитра-1 повышает уровень иммунного ответа и может быть использован при промышленном производстве реагентов. Данный способ позволяет путем повышения титра антител в сыворотках крови крупного рогатого скота снизить себестоимость выпуска реагентов 1,5-2 раза, повысить продуктивности животных.

Формула изобретения Способ получения иммуноглобулинов для определения групп крови крупного рогатого, скота, включающий иммунизацию животных иммуностимулятором и получение аллоиммун- ныхсывороток,отличающийся тем,что, с целью повышения титра и увеличения выхода иммуноглобулинов, иммунизацию животных производят смесью эритроцитарных антигенов, сенсибилизированных с корпускулярным препаратом пекарских дрожжей Sacharomyces cevevlslae.

Т а б л и ц а 1

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для изучения иммунной системы КРС, а также в биопромышленности при изготовлении реагентов, используемых в скотоводстве для генетической паспортизации и контроля воспроизводства племенных животных. Цель изобретения - повышение титра и увеличение выхода иммуноглобулинов. Животных КРС иммунизируют смесью эритроцитар- ных антигенов, связанных с препаратом, состоя щих из клеточных фрагментов пекарских дрожжей. Sacharomyces cevevlslae). Данный способ позволяет повысить титр антител в сыворотках крови КРС, снизить себестоимость выпуска реагентов в 1,5-2 раза. 3 табл. Ё

,01

Таблица2

Таблица3