СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЫВОРОТКИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПАСТЕРЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ (ВАРИАНТЫ) Российский патент 2007 года по МПК A61K35/16 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано при производстве сыворотки для лечения пастереллеза животных.

Известен способ получения сыворотки для лечения пастерелеза животных путем получения антигена, гипериммунизации антигеном продуцентов, определением иммуногенных свойств крови продуцента, взятие крови у продуцента с последующим отделением и консервированием целевого продукта (Ветеринарные препараты: Справочник. Под ред. Д.Ф.Осидзе, М.: Колос, 1981 г. с.248-251).

Недостатками известного способа являются длительность получения сыворотки против пастереллеза животных и низкое качество за счет дополнительной нагрузки на иммунную систему продуцентов, что снижает специфическую активность сыворотки.

Задачей заявленного технического решения является повышение качества целевого продукта за счет увеличения ее специфичности, превентивной активности, снижения реактогенности, а также ускорение способа.

Предложена группа изобретений, объединенная единым изобретательским замыслом с достижением единого технического результата.

Поставленная задача решается в способе получения сыворотки для лечения пастереллеза животных путем получения антигена, гипериммунизации этим антигеном продуцентов, определением иммуногенных свойств крови продуцента, взятие крови у продуцента с последующим отделением и консервированием целевого продукта тем, что в сыворотке крови продуцента определяют уровень титров антител к поверхностным растворимым антигенам пастерелл в реакции пассивной гемагглютинации, а взятие крови у продуцента для получения сыворотки для лечения пастереллеза свиней осуществляют при значении титров антител к поверхностным растворимым антигенам Р. multocida серологических вариантов А, В, D 1:400-1:800.

Поставленная задача решается также в способе получения сыворотки для лечения пастереллеза животных путем получения антигена, гипериммунизации этим антигеном продуцентов, определением иммуногенных свойств крови продуцента, взятие крови у продуцента с последующим отделением и консервированием целевого продукта тем, что в сыворотке крови продуцента определяют уровень титров антител к поверхностным растворимым антигенам пастерелл в реакции пассивной гемагглютинации, а взятие крови у продуцента для получения сыворотки для лечения пастереллеза крупного рогатого скота осуществляют при значении титров антител к поверхностным растворимым антигенам для Р. multocida серологических вариантов A, B, D как 1:32-400, 1:256-800, 1:128-800 соответственно и Р. haemolytica биотипа А-1 - 1:128-256.

Известны штаммы пастерелл, используемые для способа получения вакцины против пастереллеза животных, основанные на технологии выращивания пастерелл (Р. multocida сероварианты A, B, D штаммы №№1231, 681, Т-80) (Патент РФ №2246316, Бюл. №5, опубл. 20.02.2005, МКИ⁷ А61К 39/02).

В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие режимы получения сыворотки для лечения пастереллеза животных аналогичные заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию «новизна».

Все режимы способа осуществимы в лабораторных и промышленных условиях, направлены на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».

Однако существующие гипериммунные лечебные сыворотки против пастереллеза животных, получаемые в процессе гипериммунизации животных на корпускулярные атигены пастерелл фактически, производят без учета протективной характеристики компонентов клетки возбудителей, функционально относящихся к факторам патогенности: протективных, поверхностных, растворимых антигенов пастерелл и антител к ним, без определения уровня их специфической активности в процессе гипериммунизации животных, а также степени накопления и сохранения активности в результате их концентрирования при получении готового препарата. Процесс получения лечебных гипериммунных противопастереллезных сывороток проводится в неконтролируемом по факторам патогенности режиме.

В задачу создания изобретения входило разработать высокочувствительный способ количественного и качественного контроля всех этапов технологического процесса промышленного производства лечебных сывороток против пастереллеза животных с учетом факторов патогенности. Нами впервые установлено, что иммунизацию животных-продуцентов следует прекращать на стадии максимального количества антител к поверхностным антигенам 3-х серовариантов Р. multocida A, B, D и Р. haemolytica, биотип А-1 в сыворотке крови. Величина уровня титров антител к капсульным (поверхностным растворимым) антигенам пастерелл в готовом препарате должна составлять 1:400-1:800, а для Р. haemolytica, биотип А-1 1:128-256. Нами впервые установлено, что по достижении определенного количества вводимого антигена в процессе иммунизации животных-продуцентов дальнейшего увеличения титров антител к поверхностному растворимому антигену пастерелл не происходило. Впервые предложен способ получения гипериммунных лечебных сывороток против пастереллеза животных, в котором вместо определения критерия определения титров антител к корпускулярному антигену пастерелл по физико-химическим и биологическим показателям максимальный уровень производства антител определяют по уровню накопления антител, полученных на поверхностные растворимые антигены в реакции пассивной гемагглютинации в сыворотках крови, что позволяет получить неочевидный положительный эффект - повышение качества целевого продукта и ускорения способа, т.е. предложение соответствует критериям «новизна» и «изобретательский уровень».

Способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Получают сыворотку против пастеррелеза свиней.

С целью выявления уровня накопления титров антител к поверхностным растворимым антигенам Р. multocida 3-х серовариантов A, B, D в сыворотке крови продуцента в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) определяют активность гипериммунных лечебных сывороток в процессе гипериммунизации свиней-продуцентов поливалентным инактивированным корпускулярным антигеном, содержащим как соматические, так и полисахаридные поверхностные растворимые антигены штаммов №№1231, 681, Т-80 Р. multocida серовариантов A, B, D соответственно. Грундиммунизацию свиней проводили двукратно подкожно с интервалом 21 день, гипериммунизацию 8-кратными внутримышечными инъекциями в возрастающих дозах с интервалом 2-3 дня при общей дозе очищенного от культуральной жидкости пастереллезного антигена в количестве 650 млрд.м. т. Через 7 дней после этого у свиней брали кровь, получали сыворотку и определяли ее активность в РПГА с помощью диагностикумов, эритроцитарных к поверхностным антигенам пастерелл. Средние титры антител к капсульным антигенам пастерелл в полученной сыворотке крови в РПГА составили к Р. multocida сероварианта А - 1:400, В - 1:800, D - 1:400.

При получении сыворотки против пастеррелеза свиней согласно известному способу (Ветеринарные препараты: Справочник, под ред. Д.Ф.Осидзе, М.: Колос, 1981 г. с.248-251) средние титры антител к капсульным антигенам пастерелл в полученной сыворотке крови в РПГА составили к Р. multocida сероварианта А - 1:128, В - 1:256, D - 1:128.

Пример 2.

Получают сыворотку против пастеррелеза свиней согласно известному способу (Ветеринарные препараты: Справочник. Под ред. Д.Ф.Осидзе, М.: Колос, 1981 г. с.248-251).

С целью выявления уровня накопления титров антител к поверхностным растворимым антигенам Р. multocida 3-х серовариантов A, B, D в сыворотке крови продуцента в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) определяют активность гипериммунных лечебных сывороток в процессе гипериммунизации свиней-продуцентов поливалентным инактивированным корпускулярным антигеном, содержащим как соматические, так и полисахаридные поверхностные растворимые антигены штаммов №№1231, 681, Т-80 Р. multocida серовариантов A, B, D и Р. haemolytica биотипа А-1 соответственно. Грундиммунизацию свиней проводили двукратно подкожно с интервалом 21 день, гипериммунизацию 10-кратными внутримышечными инъекциями в возрастающих дозах с интервалом 2-3 дня при общей дозе очищенного от культуральной жидкости пастереллезного антигена в количестве 1000 млрд.м. т. Через 10 дней после этого у свиней брали кровь, получали сыворотку и определяли ее активность в РПГА с помощью диагностикумов, эритроцитарных к поверхностным антигенам пастерелл. Средние титры антител к капсульным антигенам пастерелл в полученной сыворотке крови в РПГА составили к Р. multocida сероварианта А - 1:400, B - 1:800, D - 1:400.

Таким образом, увеличение числа инъекций до 10 и количества пастереллезного антигена до 1000 млрд.м. т. не приводило к дальнейшему повышению уровня титра антител к поверхностному антигену пастерелл.

При получении сыворотки против пастеррелеза свиней согласно известному способу (Ветеринарные препараты: Справочник. Под ред. Д.Ф.Осидзе, М.: Колос, 1981 г. с.248-251) средние титры антител к капсульным антигенам пастерелл в полученной сыворотке крови в РПГА составили к Р. multocida сероварианта А - 1:128, В - 1:256, D - 1:128.

Пример 3.

Получают сыворотку против пастеррелеза свиней согласно известному способу (Ветеринарные препараты: Справочник, под ред. Д.Ф.Осидзе, М.: Колос, 1981 г. с.248-251).

С целью выявления уровня накопления титров антител к поверхностным растворимым антигенам Р. multocida 3-х серовариантов A, B, D в сыворотке крови продуцента в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) определяют активность гипериммунных лечебных сывороток в процессе гипериммунизации свиней-продуцентов поливалентным инактивированным корпускулярным антигеном, содержащим как соматические, так и полисахаридные поверхностные растворимые антигены штаммов №№1231, 681, Т-80 Р. multocida серовариантов A, B, D соответственно. Грундиммунизацию свиней проводили двукратно подкожно с интервалом 21 день, гипериммунизацию 7-кратными внутримышечными инъекциями в возрастающих дозах с интервалом 2-3 дня при общей дозе очищенного от культуральной жидкости пастереллезного антигена в количестве 520 млрд.м.т. Через 9 дней после этого у свиней брали кровь, получали сыворотку и определяли ее активность в РПГА с помощью диагностикумов, эритроцитарных к поверхностным антигенам пастерелл. Средние титры антител к капсульным антигенам пастерелл в полученной сыворотке крови в РПГА составили к Р. multocida сероварианта А - 1:200, В - 1:400, D - 1:200.

При получении сыворотки против пастеррелеза свиней согласно известному способу (Ветеринарные препараты: Справочник. Под ред. Д.Ф.Осидзе, М.: Колос, 1981 г. с.248-251) средние титры антител к капсульным антигенам пастерелл в полученной сыворотке крови в РПГА составили к Р. multocida сероварианта А - 1:64, В - 1:128, D - 1:64.

Пример 4.

Получают сыворотку против пастеррелеза крупного рогатого скота (КРС).

С целью выявления уровня накопления титров антител к поверхностным растворимым антигенам Р. multocida 3-х серовариантов A, B, D в сыворотке крови продуцента в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) определяют активность гипериммунных лечебных сывороток в процессе гипериммунизации крупного рогатого скота - продуцента поливалентным инактивированным корпускулярным антигеном, содержащим как соматические, так и полисахаридные поверхностные растворимые антигены штаммов №№1231, 681, Т-80 Р. multocida серовариантов A, B, D и Р. haemolytica биотипа А-1 соответственно. Грундиммунизацию волов-продуцентов проводили двукратно подкожно с интервалом 21 день, гипериммунизацию 6-кратными внутримышечными инъекциями в возрастающих дозах с интервалом 2-3 дня при общей дозе очищенного от культуральной жидкости пастереллезного антигена в количестве 950 млрд.м. т. Через 8 дней после этого у свиней брали кровь, получали сыворотку и определяли ее активность в РПГА с помощью диагностикумов, эритроцитарных к поверхностным антигенам пастерелл. Средние титры антител к капсульным антигенам пастерелл в полученной сыворотке крови в РПГА составили к Р. multocida серологических вариантов A, B, D как 1:32, 1:256, 1:128 соответственно и Р. haemolytica биотипа А-1 - 1:128.

При получении сыворотки против пастеррелеза КРС согласно известному способу (Ветеринарные препараты: Справочник. Под ред. Д.Ф.Осидзе, М.: Колос, 1981 г. с.248-251) средние титры антител к капсульным антигенам пастерелл в полученной сыворотке крови в РПГА составили к Р. multocida сероварианта А - 1:32, В - 1:64, D - 1:32 соответственно и Р. haemolytica биотипа А-1 - 1:256.

Пример 5.

Получают сыворотку против пастеррелеза крупного рогатого скота.

С целью выявления уровня накопления титров антител к поверхностным растворимым антигенам Р. multocida 3-х серовариантов A, B, D в сыворотке крови продуцента в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) определяют активность гипериммунных лечебных сывороток в процессе гипериммунизации крупного рогатого скота - продуцента поливалентным инактивированным корпускулярным антигеном, содержащим как соматические, так и полисахаридные поверхностные растворимые антигены штаммов №№1231, 681, Т-80 Р. multocida серовариантов A, B, D и Р. haemolytica биотипа А-1 соответственно. Грундиммунизацию волов-продуцентов проводили двукратно подкожно с интервалом 21 день, гипериммунизацию 8-кратными внутримышечными инъекциями в возрастающих дозах с интервалом 2-3 дня при общей дозе очищенного от культуральной жидкости пастереллезного антигена в количестве 1800 млрд.м. т. Через 8 дней после этого у свиней брали кровь, получали сыворотку и определяли ее активность в РПГА с помощью диагностикумов, эритроцитарных к поверхностным антигенам пастерелл. Средние титры антител к капсульным антигенам пастерелл в полученной сыворотке крови в РПГА составили к Р. multocida серологических вариантов A, B, D как 1:400, 1:800, 1:800 соответственно и Р. haemolytica биотипа А-1 - 1:256.

При получении сыворотки против пастеррелеза КРС согласно известному способу (Ветеринарные препараты: Справочник. Под ред. Д.Ф.Осидзе, М.: Колос, 1981 г. с.248-251) средние титры антител к капсульным антигенам пастерелл в полученной сыворотке крови в РПГА составили к Р. multocida сероварианта А - 1:16, В - 1:64, D - 1:16 соответственно и Р. haemolytica биотипа А-1 - 1:64.

Как показали результаты экспериментальных исследований, согласно примерам 1-3 предлагаемый способ позволяет в 2-4 раза повысить качество целевого продукта, а также ускорить в 1,2-1,4 раза процесс получения сыворотки для лечения пастереллеза животных.

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ включает получение антигена, гипериммунизацию этим антигеном продуцентов, определение иммуногенных свойств крови продуцента и взятие крови у продуцента с последующим отделением и консервированием целевого продукта. При этом в сыворотке крови продуцента определяют уровень титров антител к поверхностным растворимым антигенам пастерелл в реакции пассивной гемагглютинации. Взятие крови у продуцента для получения сыворотки для лечения пастереллеза свиней осуществляют при значении титров антител к поверхностным растворимым антигенам Р. multocida серологических вариантов А, В, D как 1:200-400, 1:400-800, 1:400-800 соответственно. А взятие крови у продуцента для получения сыворотки для лечения пастереллеза крупного рогатого скота осуществляют при значении титров антител к поверхностным растворимым антигенам значении для Р. multocida серологических вариантов А, В, D как 1:32-400, 1:256-800, 1:128-800 соответственно и Р. haemolytica биотипа А-1 - 1:128-256. Способ позволяет повысить специфичность и активность полученной сыворотки. 2 с.п. ф-лы.

1. Способ получения сыворотки для лечения пастереллеза животных путем получения антигена, гипериммунизации этим антигеном продуцентов, определением иммуногенных свойств крови продуцента, взятие крови у продуцента с последующим отделением и консервированием целевого продукта, отличающийся тем, что в сыворотке крови продуцента определяют уровень титров антител к поверхностным растворимым антигенам пастерелл в реакции пассивной гемагглютинации, а взятие крови у продуцента для получения сыворотки для лечения пастереллеза свиней осуществляют при значении титров антител к поверхностным растворимым антигенам Р. multocida серологических вариантов А, В, D как 1:200-400, 1:400-800, 1:400-800, соответственно.2. Способ получения сыворотки для лечения пастереллеза животных путем получения антигена, гипериммунизации этим антигеном продуцентов, определением иммуногенных свойств крови продуцента, взятие крови у продуцента с последующим отделением и консервированием целевого продукта, отличающийся тем, что в сыворотке крови продуцента определяют уровень титров антител к поверхностным растворимым антигенам пастерелл в реакции пассивной гемагглютинации, а взятие крови у продуцента для получения сыворотки для лечения пастереллеза крупного рогатого скота осуществляют при значении титров антител к поверхностным растворимым антигенам значении для P. multocida серологических вариантов А, В, D как 1:32-400, 1:256-800, 1:128-800, соответственно и Р. haemolytica биотипа А-1 - 1:128-256.