Способ определения реактогенности живых чумных вакцин Советский патент 1992 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к способам определения реактогенности живых бактериальных вакцин против особо опасных инфекций,

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

На гистологических срезах регионарных лимфатических узлов иммуйизированных животных с целью установления степени ответной реакции лимфоидной ткани и повышения уровня объективности оценки реактогенности вакцинных штаммов микроскопически ирследую т регионарные лимфатические узлы, а дифференциацию функцирнально-морфологического состояния осуществляют по увеличению площади светлых центров лимфоидных фолликулов в сравнении с контролем иммунизированных эталонным вакцинным штаммом чумного микроба ЕВ.

Независимо от примененных доз через 1 сут после иммунизации морских свинок

культурой реактогенного штамма чумного микроба К-2 (Кызылкумский 2) площадь светлых центров фолликулов регионарных лимфатических узлов увеличивается в 1,6-1,7 раза в сравнении с площадью светлых центров фолликулов регионарных лимфатических узлов морских свинок, иммунизированных культурой эталонного вакционного штамма чумного микроба ЕВ. Более значительное увеличение площади (светлых центров) через 3-5 сут после иммунизации морских свинок культурой реактогенного штамма К-2 (Кызылкумский 2), в 2,2-2,5 раза в сравнении с площадью светлых центров фолликулов регионарных лимфатических ,узлов морских свинок, иммунизированных культурой эталонного штамма связано со свойствами инвазивности, приживаемости, размножаемости и распространяемости микробов, преобладающими у микробов штамма К-2.

Выбор для оценки реактогенности чумных вакционных штаммов -светлых центров лимфоидных фолликулов регионарных лимфатических узлов обусловлен тем, что светлые центры являются лабильными структурами лимфоидной ткани на различные токсические воздействия и в них происходит активное размножение лим цитов мод влиянием антигена. Поэтому оценка реактогенности вакционных чумных штаммов по увеличению площади светлых центров фолликулов регионарных лимфатических узлов прзволяет судить о новых свойствах заявляемых отличий. Опытной группе морских свинок вводят подкожно в верхнюю половину бедра двухсуточную агаровую культуру второй генерации реактогенного штамма К-2 в дозах 100 микробных клеток 10 млн. м.к. и 2 млрд. м.к. по ОСО мутности 42-28-59-85. Контрольную группу морских свирок иммунизируют двухсуточной агаровой культурой второй генерации эталонного вакционного штймма .чумного микроба ЕВ. Морских свинок забивают по 3 на каждую дозу через 1. 3, 5, 7, 8 и 10 сут, вскрывают и регистрируют видимые изменения в органах. Регионарные лимфатические узлы фиксируют в 10%-ном водном растворе формалина, заключают в парафин, готовят среды 5 мкм; окрашивают их гематоксилином и эозином. В срезах регионарных лимфатических узлов иммунизированных животных с помощью окулярной линейки проводят измерение диаметров светлых центров лимфоидных фолликулов при увеличении окуляра W, объектива Э микроскопа МБИ-3 с бинокулярной насадкой АУ-12 кратностью насадки 1,5 определяют площадь светлых центров по формуле эллиптичности структур где 7Г 3,14; dinaKc максимальный диаметр светлого центра ; Ьмин - минимальный диаметр светло1 0 центра : К - линейное увеличение обьектива. Полученные результаты обрабатывают математически и получают независимо от дозы среднюю величину площади светлого центра. Пример 1. Опытной группе морских свинок вводили подкожно в верхнюю пол.овину бедра двухсуточную агаровую культуру второй генерации реактогенного штамма i yMHoro микроба К-2 в дозах 100 микробных клеток 10 млн. мк. и 2 млрд. м.к, по ОСО мутности 42-28-59-85 (по3 животных на каждую дозу). Контрольной группе морских свинок вводили двухсуточную агаровую культуру второй генерации эталонного вакцинного штамма чумного микроба ЕВ,в тех же дозах, что опытной группе морских свинок. Животных забивали через 1 сут после иммунизации, вскрывали и регистрировали видимые изменения в органах. Регионарные лимфатические узлыфиксировали в 10%-ном водном растворе формалина, заключали в парафин иготовили гистрлогические срезы толщиной 5 мкм. окрашивали их гематоксилином и эозином, проводили измерение диаметров светлых центров лимфоидных фолликулов с помощью окулярной линейки при увеличении окуляра микроскопа МБИ-3- Ю , объектива с кратностью бинокулярной насадки АУ12 1,5. Цену деления окулярной линейки определяли с помощью обьект-микрометра на указанном микроскопе. Площадь светлых центров фолликулов в срезах регионарных лимфатических узлов определяли.по формуле эллиптичности структур где л 3,14; ймакс - максимальный диаметр светлого центра, dwMH минимальный диаметр светлого центра ; К - линейное увеличение объектива. Полученные результаты обрабатывали математически и получали среднюю величину площади светлого центра фолликулов регионарных лимфатических узлов, составляющую в опытной группе 177 ±26мкм ив контроле - 107 ± 14 мкм. Определяли кратность увеличения площади светлых центров фолликулов регионарных лимфатических узлов у животных, иммунизированных реактогенным штаммом чумного микроба К-2 по отношению к площади светлых центров фолликулов регионарных лимфатических узлов в контроле у животных, иммунизированных эталонным вакционным штаммом чумного микроба ЕВ. Кратность составляла 1,6-1,7 раза. Прим ер 2. Опытной группе морских свинок вводили подкожно в верхнюю половину бедра двухсуточную агаровую культуру второй генерации реактогенного штамма чумного микроба К-2 в дозах 100 микробных клеток 10 млн. м.к. и 2 млрд. м. к. по ОСО мутности 42-28-59-85 (по 3 животных на каждую дозу). Контрольной группе морских свинок вводили двухсуточную агаровую культуру второй генерации эталонного вакцинного штамма чумного микроба ЕВ в тех же дозах, что опытной группе морских свинок. Животных забивали через 3 сут после иммуиизации, вскрывали и регистрировали видимые изменения в органах.

Регионарные лимфатические узлы фиксировали в 10%-ном водном растворе формалина, заключали в парафин и готовили гистологические срезы толщиной 5 мкм, окрашивали их гематоксилином и эозином, проводили измерение диаметров светлых центров лимфоидных фолликулов с помощью окулярной линейки при увеличении окуляра микроскопа 10, объектива 9, с кратностью бинокулярной насадки АУ12, 1 Б. Цену деления окулярной линейки определяли с помощью объект-микрометра на указанном микроскопе. Площадь светлых центров фолликулов в срезах регионарных лимфатических узлов определяли по формуле эллиптичности структур s -dMaKC-dMHH д .з,,4

4 К

dwaKc - максимальный диаметр светлого центра, dnHH минимальный диаметр свет лого центра. К- линейное увеличение объектива, Полученные результаты обрабатывали математически и получали среднюю величину площади светлого центра фолликулов регионарных лимфатических узлов в опытной группе, составляющую 238 ± 36 мкм и в

контроле - 103, ± 13 мкм . Определяли кратность увеличения площади светлых центров фолликулов регионарных лимфатических узлов у животных, иммунизированных реактогенным штаммом чумного микроба К-2 по отношению к площади светлых центров фолликулов регионарных лимфатических узлов в контроле у животных, иммунизированных эталонным вакцинным

штаммом чумно1;о микроба ЕВ. Кратность составляла 2,2-2,4 раза.

Способ позволяет значительно повысить точность определения peaктогеннести бактерий.

Формулаизобретения

Способ определения реактогенности живых чумных вакцин путем вакцинации с последующим микроскопическим исследованием лимфоидной ткани в сравнении с

эталонным вакцинным штаммом, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, исследуют лимфатическую ткань регионарных лимфатических узлов, в которых определяют площадь светлых

центров и при увеличении площади в 1,6-2,5 раза на 1-7 сутки по отношению к эталонному штамму определяют вакцину как реактогенную.

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии. Целью изобретения является повышение точности способа. Цель достигается тем, что после вакцинации у животных исследуют лимфатическую ткань регионарных лимфатических узлов, в которой осуществляют площадь "светлых центров". По увеличению площади светлых центров в 1,6-2,5 раза на 1-7-е сутки по отношению к зталонному штамму определяют вакцину как реактогенную. Способ значительно повышает точность лабораторного метода.