Способ получения антигена для серологической диагностики бруцеллеза Советский патент 1992 года по МПК A61K39/10 G01N33/531 

пригодные для выявления хронических и латентных форм инфекции.

Целью изобретения является повышение чувствительности антигена.

Пример. Основой для приготовления антигена служат вакцинный штамм 19 и бруцеллезный фаг Тб.

Бактериальную массу для получения антигена выращивают на рекомендуемых для бруцелл плотных питательных средах.

Размножение фага Тбпроводят в бактериальных клетках штамма 19 в обычной для бруцелл жидкой питательной среде.

Бруцеллезный фаг адсорбируют на клетках бруцелл из расчета 10-100 фаговых корпускул на Т микробную клетку в течение 22-24 ч при температуре 2-4°С. Затем взвесь бактерий с адсорбированным фагом цент рифугируют при 5000-бООЬ об/мин в течение 30 мин и сливают надосадочную жидкость. Из бруцелл, находящихся в осадке , готовят 100 млрд. взвесь на 0,5%-ном карболизированном физиологическом растворе. Для определения активности и установления рабочих титров в реакции агглютинации, связывания комплемента (РСК) или других серологических реакциях, данную взвесь титруют по общепринятым методикам.

Роз-бенгал антиген готовят путем окрашивания 100 млрд. суспензии бруцелл, с адсорбированным фагом краской роз-бенгал. Окрашенную суспензию разводят лимоннофосфатным буфером (рН 3,6), приготовленным на 5 %-ном растворе хлористого натрия.

При испытании полученного бруцеллез,ного антигена, содержащего фаг, установлено следующее.

Результаты исследования сывороток крови животных, реагирующих со стандартным антигеном в реакции агглютинации (РА) и роз-бенгал пробы (РБП) или одновременно в РА, РБП и РСК, полностью совпадают с результатами при использовании бруцеллезного антигена с адсорбированным фагом.

Сыворотки крови, негативно реагирующие со стандартным антигеном в РА и РБП и положительно в РСК/РДСК, дают положительные результаты с предлагаемым антигеном как в РА и РБП, так и в РСК/РДСК.

Таким образом, использование антигена, содержащего специфический фаг, позволит усовершенствовать диагностику бруцеллеза .и будет способствовать более полному выявлению животных, больных хронической и латентной формами инфекции, у которых могут отсутствовать или содержаться в незначительном количестве антибруцеллезные антитела. В то же время антифаговые антитела обязательно присутствуют у хронически и латентно больных, которые будут взаимодействовать с данным антигеном.

Применение комплексного диагностикума позволит уменьшить количество серологических тестов и будет способствовать более полному выявлению животных, больных бруцеллезом.

Ф о р м у л а и 3 о б р е т е н и я . Способ получения антигена для серологической диагностики бруцеллеза, включающий выращивание штамма Brucella abortus 19 на плот| ой питательной среде, смыв выросшей культуры 0,5%-нымфенолизированным физиологическим раствором, инактивацию бактериальных клеток нагреванием, окрашивание роз-бенгалом с последующим ресуспендированием в буферном растворе и стандартизацией целевого продукта, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения чувствительности, перед окрашиванием на инактивированные бактериальные клетки адсорбируют бруцеллезный фаг ТБ в количестве 10-100 част, на 1 клетку.

Изобретение относится к биотехнологии и мс^кет быть использовано при приготовлении препаратов для диагностики бруцеллеза. Цель изобретения - повышение чувствительности антигена. Основой для приготовления антигена служит вакцинный штамм 19 и бруцеллезный фаг "Тб". Бруцел-лезный фаг адсорбируют на бруцеллах из расчета 10-100 фаговых корпускул на 1 микробную клетку в течение 22-24 ч при 2-4°С. Затем взвесь бактерий с адсорбированным фагом центрифугируют. Из осадка готовят 100 млрд, взвесь на 0,5%-ном карболизиро- ванном физиологическом растворе и окрашивают краской роз-бенгал. Окрашенную суспензию бруцелл разводят лимонно-фос- фатной смесью (рН 3,6), изготовленной на 5%-ном растворе хлористого натрия. Полученный антиген способен вступать в реакцию с антибруцеллезными м антифаговыми антителами, что приведет к повышению его чувствительности. Кроме того, антиген, содержащий фаг, способен выявлять животных, больных острой или хронической формами бруцеллеза при использовании только реакции агглютинации и роз-бенгал пробы.Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано при приготовлении препаратов для диагностики бруцеллеза.Известен способ получения бруцеллез- • ного антигена^ заключающийся в том, что выросшую культуру штамма 19 смывают стерильным 0,5%-ным фенолизированным физиологиче- с1?йм раствором (рН 7,0-7,2), Полученную суспензию инактивируют при температуре 80°С в течение 60 мин. стабилизируют при i2-4°C в течение 10 дней и определяют активность.Недостатком данного способа является то, что получаемый антиген обладает невысокой чувствительностью.Известен также способ получения бруцеллезного цветного антигена для роз-бен-гал пробы, заключающийся в том, что чистую культуру штамма 19 смывают стерильным 0,5%-ныМ фенолизированным физиологическим раствором, инактивируют при температуре 80°С. Суспензию инакти- вированных клеток окрашивают 1%-ным водным раствором краски бенгальской розовой и ресуспендируют в буферном разбавителе, включающем едкий натр, феноли- зированный физиологический раствор и мо- . лом ную кислоту.Однако этим способом получ;ают антигены с невысокой чувствительностью, реагирующие, в основном, только с агглютининами, не вступающие в реакцию с комп- лементсвязывающими антителами и неfcСлЗсл ю чэ&