Штамм гриба ТRIсноDеRма LIGNоRUм для производства триходермина Советский патент 1992 года по МПК A01N63/04 C12N1/14 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для производства биопрепарата триходермина, который применяется против фитопатогенных грибов и представляет собой новый штамм для получения триходермина.

Целью изобретения является получение нового более продуктивного штамма гриба, обладающего более широким спектром дейг ствия.

Штамм Trichoderma lignorum T-13-82 получен из штамма Trichoderma lignorum ТК-13 путем многократных пассажей через почву с последующим отбором колоний по признаку антибиотической, ферментативной активностей и продуктивности при выращивании на твердых средах. Штамм хранится в коллекции Белорусского научно- исследовательского института защиты растений за № 9. Депонирован в коллекции ВНИИ сельскохозяйственной микробиологии под NJ 37.

Штамм имеет следующую характеристику.

Морфолого-культуральные признаки.

При выращивании штамма при 26°С на среде Чапека колония распростертая зеленого цвета. Дерновники довольно крупные, вначале белые, на 3-4-е сутки зеленые. Обратная сторона колонии бесцветная.

vi О СЛ Ю

На среде сусло-агаре (рН 5,0-6,0), Колония распростертая темно-зеленого цвета. Дерновники крупные, вначале белые, на 3- 4-е сутки зеленые, позднее темно-зеленые, бархатистые. Обратная сторона колонии имеет светло-зеленый цвет.

Конидиеносцы в виде боковых ответвлений гиф воздушного мицелия (77,0x2,5 мк). Фиалиды бутыловидныё, расположены мутовками по 2-3 или одиночно (6,4x1,4 мк). Конидии верхушечные, овальные (3,1x2,6 мк) собраны в сферические головки.

Физиолого-биохимические признаки.

Штамм растет при температуре 4-30°С, рН среды 3,2-7,2, оптимальная температура 24-26°С, рН 5,5-6,5.

Отношение к источнику углерода.

Хорошо усваивает глюкозу, сахарозу, ксилозу, лактозу. Удовлетворительно - сор- бит и дульцит. Соли органических кислот (щавелевокислый натрий и лимоннокислый натрий) оказывают ингибирующее влияние на рост гриба в культуре.

Отношение к источнику азота.

Хорошо усваивает пептон, аспарагин, а также аминокислоты Д-лейцин. Д-валин, фосфорно-кислый аммоний, сернокислый аммоний, хлористый аммоний, удовлетворительно - азотнокислый натрий и азотно- кислый калий.

Крахмал и клетчатку гидролизует, желатину разжижает, молоко пептонизирует. Нитраты восстанавливает в нитриты.

Антагонистические свойства.

Антагонистическую активность штамма по отношению к фитопатогенным грибам определяли на 4%-ном сусло-агаре при рН 6,0 и температуре 26°С в течение 15 дней.

Штамм Т13-82 обладает антагонистической активностью по отношению к Alternaria Brassicae (Berk) Sace., Alternarla radicina M.D. et. E., Botrytls clnerea Pers, образуя при совместном выращивании на 3-4-е сутки зоны ингибирования, соответственно равные 46,3-47,3-52,5, у известного штамма Б-10-17,5 мм.

По отношению к Fusarium oxysperum schl., Fusarium moniliform scheld имеет место полное нарастание колоний триходер- мы на колонии фитопатогенов.

Штамм Т13-82 обладает антагонистической активностью по отношению к Bacillus subtilis, зона ингибирования соответствует 14,3 мм, у штаммов Б-10 и М-10 отсутствует, а у штамма ТК-13 - 2,6 мм. Данную активность определяли на мясо-пептонном агаре при 26°С в течение 7-8 дней.

Ферментативная (целлюлолитическая) активность штамма соответствует d

3,4, в то время как Б-10 - 1,5.

Штамм маркерных признаков не имеет.

Штамм хранят на агаровых косяках при температуре +3-4°С.

Штамм пересевают один раз в 3 мес.

Получение биопрепарата триходермина на основе штамма Trichoderma llgnorum Т-13-82.

Для получения триходермина маточную культуру гриба выращивают в бутылях по 0,5 л на стерильных отходах ячменя три- хограммного производства. Затем в пластмассовые контейнеры, содержащие простерилизованные в автоклаве отходы ячменя, вносят маточную культуру из расчета 0,1 кг на 10 кг среды (производственная культура). Производственную и маточную культуру триходермы выращивают при температуре 24-26°С и увлажнении 60% в течение 3-4 сут. Получают препарат с содержанием 36 500 млрд спор с 1 кг среды, продуктивность известных штаммов 15 200-30 400.

Препарат представляет крупно-дисперсную массу темно-зеленого цвета, содержащую споры гриба, обрывки мицелия и остатки питательной среды.

Полученный препарат применяют либо в свежем виде, либо высушивают при 30- 35°С до влажности 10%. Препарат хранят в течение года при 6-8°С.

Использование препарата в производственных условиях.

Пример 1. Триходермин испытан в производственных условиях в борьбе с корневыми гнилями огурцов (закрытый грунт). Его вносили в почву (лунки) перед высадкой рассады на постоянное место из расчета 5 г свежеприготовленного (сырого) препарата под одно растение. Результаты приведены в табл.1.

На основании многолетных экспериментов установлено, что прибавка урожая огурца при применении триходермина, изготовленного на основе штамма Т 13-82, составляет в сравнении со штаммом Б-10 2,9 кг/м , а в сравнении со штаммом ТК- 13 -0,8 кг/м2.

П р и м е р 2. Проведены испытания предложенного штамма и дана сравнительная оценка его эффективности по отношению к известным штаммам в борьбе с болезнями огурца и томата. Результаты представлены в табл.2 и 3 соответственно.

Данные свидетельствуют о том, что внесение штамма Т 13-82 в форме биопрепарата в почву позволяет снизить пораженность огурца корневыми гнилями на 30,4%. серой гнилью на 85% и обеспечить прибавку урожая 29,3% (табл.2).

Применение триходермина штамма Т 13-82 в борьбе с болезнями томатов способствует снижению пораженности растений корневыми и серой гнилями соответственно на 25,0-40,5% (табл.3).

В результате исследований установлено, что применение штамма Т 13-82 в форме биопрепарата эффективно не только для профилактики и защиты растений от болезней, но и как фактор, стимулирующий рост

0

5

и развитие растений. За счет стимулирующего эффекта штамма получено дополнительно 33 ц/га огурцов.

Таким образом, штамм Т 13-82 обладает более широким спектром действия, т.к. обладает антагонистической активностью не только по отношению к фитопа- тогенным грибам, но и по отношению к Bacillus subtilis, а также позволяет получить на 0,7 кг/м2 больше урожая огурцов по сравнению с триходермином на основе штамма ВКПМ-262.

Формула изобретения Штамм гриба Trichoderma lignorum ВНИСХМ Мг 37 для производства триходермина.

Таблица 1

Изобретение относится к микробиологической промышленности, может быть использовано для производства биопрепарата триходермина против фитопато- генных грибов и представляет собой новый штамм для получения триходермина. Целью изобретения является получение нового более продуктивного штамма, обладающего более широким спектром действия. Штамм Trichoderma lignorum T13-82 депонирован в коллекции ВНИИ сельскохозяйственной микробиологии, код № 37. Штамм обладает антагонистической активностью по отношению к фитопатогенным грибам Alternaria Brassicae (Berk) Sace, Alternaria radicina M.D. et E.Botrytis cinerea Pers. Зона ингиби- рования на 3-4 сутки соответственно равна 46,3-47,3-52,5 мм, грибы вида Fusarium oxysporum Schl, Fusarium moniliforme scheld полностью подавляет, а зона ингиби- рования Bacillus subtilis на 7-8 сутки равна 14,3 мм. Урожай огурцов повышается примерно на 29% по сравнению с контролем, 3 табл. Ё

Таблица 2

20

Таблица 3