Способ получения рибонуклеиновой кислоты Советский патент 1992 года по МПК C07H21/02 

Изобретение относится к медицинской и микробиологической промышленности и может быть использовано для получения рибонуклеиновой кислоты (РНК) из сухой плазмолизованной биомассы микроорганизмов, в частности из кормовых дрожжей (Б В К).

Цель изобретения - удешевление способа получения РНК и расширение сырьевой базы.

Для выделения РНК к 20,0 г сухого белково-витаминного концентрата (БВК) добавляют 0,2 л предварительно нагретого до 40-50°С 0,5-6,0%-раствора NaCI (см.табл.1) и термостатируют в течение 40-50 мин при 40-50°С (см.табл.2,3), доведя предварительно с помощью 5 М раствора NaOH pH суспензии до 7,0-7,2. После термостатирования охлаждают суспензию проточной водопроводной водой до комнатной температуры, доводят 5 М раствором NaOH pH до 8,9-9,1

и оставляют при перемешивании при комнатной температуре на 50-60 мин.

Затем центрифугированием при 3500 об/мин в течение 30 мин и охлаждении при 0-5°С из экстракта осаждают клеточный шлам, рН супернатанта доводят серной кислотой (см,табл.4) до 0,5-1,5.

Образовавшийся осадок РНК отделяют центрифугированием при 8000 об/мин в течение 20 мин при комнатной температуре, а затем ресуспендируют в 40 мл изопропило- вого спирта (см.табл.5) и перемешивают в течение 30 мин. Отмытую таким образом РНК осаждают центрифугированием при 8000 об/мин в течение 20 мин при комнатной температуре и высушивают в вакуумном сушильном шкафу при 30-35°С и при давлении 2-5 мм рт.ст.

Полученный препарат анализируют на содержание фосфора по Спирину, азота по Кьельдалю, влаги по ГОСТ 14870-69,

В результате проведенных процедур выделения и очистки РНК из БВК, полученный препарат соответствует требованиям и нормам ТУ 6-09-10-1048-75.

Из 20,0 г БВК получено 0,83 г РНК с чистотой 84% при выходе 80 мас.%.

Пример 1. К 100,0 г БВК добавляют 1 л нагретого до 50°С 3,0%-ного раствора NaCl. Экстракцию ведут при рН 7,0 при постоянном перемешивании при 50°С в течение 30 мин, затем суспензию охлаждают до комнатной температуры проточной водопроводной водой, рН доводят 5 М раствором iSJaOH до 9,0 и продолжают экстракцию еще в течение 60 мин,

По окончании описанной процедуры отделяют клеточный шлам центрифугированием при 3500 об/мин и охлаждении до 0°С. Прозрачный супернатант - экстракт нуклеиновых кислот доводят 5 М раствором H2SCM до рН 1,0, Осадок отделяют центрифугированием при 8000 об/мин, после чего ресуспендируют его в 200 мл изоп ропилово- го спирта, который удаляют центрифугированием при 8000 об/мин, затем осадок высушивают при комнатной температуре и вакууме. Выход РНК около 60% от теоретического с содержанием основного продукта 88%.

Пример 2. К 20,0 г БВК добавляют 0,2 л предварительно нагретого до 50°С 3,0%- ного раствора №С и далее как а примере 1 до осаждения РНК из экстракта серной кислотой.

В 16 центрифужных пробирок отбирают по 2 мл экстракта и осаждают РНК различными кислотами при рН 0,25-4,50. осадок отмывают аналогично примеру 1. Выходы РНК представлены в табл,4,

Пример 3. В 9 центрифужных стаканов помещают по 5 г БВК.и 0,025 л дистиллированной воды и оставляют при комнатной температуре на 30 мин. Экстракцию проводят десятикратными объемами растворов NaCl различных концентраций {0- 29,3%) аналогично примеру 1. Выходы РНК представлены в табл.1.

П р и м е р .4. 20,0 г БВК суспендируют в 0,2 л предварительно нагретого до 50°С

3,0%-ного раствора NaCl и далее по примеру .1 до получения прозрачного супернатан- та - экстракта нуклеиновых кислот. Супернатант делят на 3 равные объема и проводят осаждение РНК аналогично примеру 1. Осадок отмывают в первом варианте этиловым спиртом, во втором - изопропило- вым спиртом, в третьем - дистиллированной водой. Отмытую РНК высушивают под вакуумом при комнатной температуре. Результаты представлены в табл.5.

Формула изобретения Способ получения рибонуклеиновой кислоты, включающий экстракцию РНК из «сходного сырья раствором хлористого натрия, сначала при рН 7,0, затем при рН 9,0, удаление клеточного шлама, осаждение РНК минеральной кислотой, отделение осадка, промывка его спиртом и высушивание конечного продукта, отличающий- с я тем, что, с целью удешевления способа

и расширения сырьевой базы, в качестве исходного сырья используют сухой белково- вмтаминный концентрат, экстракцию осуществляют 0,5-6,0%-ным раствором хлористого натрия сначала при 40-50°С в

течение 40-50 мин, затем при комнатной температуре в течение 50-60 мин, осаждение РНК осуществляют раствором серной кислоты при рН 0,5-1,5, а промывку проводят изопропиловым спиртом.

Г а б л :: ц а

Использование: медицинская и микробиологическая промышленность, для пол2 учения рибонуклеиновой кислоты из сухой плазмолизованной биомассы микроорганизмов из кормовых дрожжей. К 20,0 г сухого белково-витаминного концентрата добавляют 0,2 л Предварительно нагретого до 40-5С°С 0,5-6,0%-ного раствора NaCI и термостатируют в течение 40-50 мин при 40-50°С, доведя предварительно с помощью 5 М раствора NaOH pH суспензии до 7,0-7,2. После термостатирования охлаждают суспензию проточной водопроводной водой до комнатной температуры, доводят 5 М раствором NaOH pH до 8,9-9,1 и оставляют при перемешивании при комнатной температуре на 50-60 мин. 5 табл,

Примечание. Экстракцию РНК проводят сначала при рН 7 и50 ° С в течение 30 мин.з затем при рН 9 и комнатной температуре в течение 40 мин.

Та6лица2

Примечание. Экстракцию РНК проводят с помощью 3%- ноге раствора хлористого натрия сначала при рН 7в течение 40 мин , а затем при рН 9 в течение 50 мин.

Примечание. Экстракцию РНК проводят с помощью 3% -ного раствора хлористого натрия сначала при рН Ти 50 С, а затем при рН 9 и комнатной температуре.

ТаблицаЗ

Примечание. Экстракцию РНК проводит аналогично {см. табл. 1) с помощью раствора хлористого натрмя,

Вид спирта

Этиловый спирт Изопрспмловый спирт Ј3 промывка

Примечание. Экстракцию РНК проводят аналогично ( см. табл.1,4 ),осаждение с помощью серной кислоты рН 1.0.

а б л и ц а 4

Т а б л л ц а 5

Содержание РНК , %

70,0 . 82,0

58,0