Способ определения сенсибилизации организма Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано при обследовании различных групп населения, в частности при массовых профилактических осмотрах.

Цель изобретения - повышение точности исследования.

Способ осуществляют следующим образом.

Готовят гелевые блоки из 1-2%-ного раствора агара или агарозы с добавлением среды 199 и сыворотки крови крупного рогатого скота. Толщина слоя геля 1-3 мм. В нем проделывают лунки диаметром 2-5 мм. Сыворотку крови обследуемого человека прогревают 30-40 мин при 56-58°С, после чего она может храниться в течение длительного времени. Из гепаринизированной крови морских свинок выделяют лейковз- весь, трижды отмывают клетки питательной средой, По 0,05-0,1 мл лейковэвеси морских свинок помещают в две пробирки. В

одну добавляют исследуемую сыворотку крови человека, в другую (контроль) - равный объем среды 199. По 2-5 мкл из каждой пробирки помещают в лунки гелевого блока. Затем эти блоки во влажной камере инкубируют при 37°С в течение 18-24 ч, после чего лейкоциты фиксируют, удаляют гель, окрашивают зоны миграции лейкоцитов и определяют индекс миграции (ИМ) по формуле

, ок

где So - площадь зоны миграции лейкоцитов в опыте;

SK - площадь зоны миграции лейкоцитов в контроле.

При величине ИМ в пределах 0,8-1,0 констатируют отсутствие сенсибилизации, при величине ИМ в пределах 0,5-0,79 диагносцируют наличие умеренной сенсибилизации и при величине менее 0,5 - наличие сильной сенсибилизации,

Пример 1. Беременная Б., 25 лет, история родов № 243, поступила в клинику с диагнозом: беременность - 37-38 недель, сужение таза I степени, нефропатия I степени. В момент поступления АД 130/90, 140/80 (исходное АД до поступления беременности 110/70, 120/80), постозность нижних конечностей, белок в моче в виде следов. Результаты исследования в РТМЛ сенсибилизации к плацентарному антигену - 0,88, почечному - 0,75, печеночному - 0,81.

При исследовании сыворотки крови предлагаемым способом ,70, что указывает на наличие умеренной сенсибилизации организма.

П р и м е р 2. Беременная 3., 33-х лет, история родов N 126, поступила в клинику с диагнозом: беременность I - 36-37 недель, нефропатия 111 степени, возрастная первородящая. В момент поступления АД 170/110, 180/100. Выраженные отеки нижних конечностей и передней брюшной стенки, белок в моче 1,15 г/л. Результаты исследования в РТМЛ сенсибилизации к плацентарному антигену - 0,65, почечному - 0,49, печеночному - 0,49.

При исследовании сыворотки крови предлагаемым способом ,27, что позволяет диагносцировать наличие сильной сенсибилизации организма.

П р и м е р 3. Обследование во время профилактического осмотра сотрудницы КБ завода Красный химик С-ой, 27 лет, хроническими заболеваниями не страдает, жалоб нет, диагноз: здорова.

При исследовании сыворотки крови предлагаемым способом ,87, что указывает на отсутствие сенсибилизации организма.

Точность результатов исследований в предлагаемом способе определяли в серии опытов. Объектом исследования были сыворотки крови женщин с нормальным течением беременности и беременных с токсикозом I-II степени второй половины беременности, поступивших в родильный дом N° 1 г.Донецка, а также сыворотки крови сотрудников Ленинградского завода Красный химик, подвергавшихся воздействию профессиональных вредностей, в частности связанных с производством марганца и кобальта (стаж работы более 5 лет), и ИГР этого предприятия, не связанных с производственными вредностями, не состоящих на диспансерном чете по поводу какого-либо заболевания и на момент обследования клинически здоровых (контрольная группа).

При нормальном течении беременности (отсутствие клиники осложнений) у 11 женщин (73,3%) с помощью предлагаемого способа выявлялась умеренная сенсибилизация (,5-0,8) и только у четырех беременных (26,7%) определялась сильная сенсибилизация (ИМ 0,5). При исследовании

специфической сенсибилизации у женщин с ИМ 0,5 к антигенам плаценты, печени и почек в РТМЛ отмечалась сенсибилизация к исследуемым антигенам (ИМ 0,8).

Полученные результаты позволяют сде0 лать вывод о возможности использования предлагаемого способа для диагностики осложнений беременности доклинической стадии. Умеренная сенсибилизация у женщин с нормальным течением беременности,

5 выявляемая предлагаемым способом, объясняется тем, что беременность сопровождается сенсибилизацией организма женщины изоантигенами плода.

У беременных с клиникой токсикоза

0 сильная сенсибилизация определялась, в 72,7% случаев, а у остальных женщин - в пределах умеренной. При исследовании в РТМЛ сенсибилизация к антигенам плаценты, печени и почек у всех этих женщин отме5 чалась умеренная и сильная сенсибилизация к исследуемым антигенам.

Обследование рабочих, связанных с профессиональными вредностями, позволило выявить сильную степень сенсибили0 зации организма у 56% и умеренную 44% рабочих, связанных с производством марганца, среди рабочих, связанных с производством кобальта, сильная сенсибилизация организма выявлена в 3,7% случаев,

5 умеренная в 7,4%.

При исследовании контрольной группы сенсибилизация не выявлялась ни в одном случае, что свидетельствует о специфичности метода (до 100%) и его пригодности для

0 определения сенсибилизации одновременно к нескольким антигенам или неизвестному (неизвестным) антигенам.

При использовании предлагаемого способа по сравнению с прототипом повышает5 ся точность исследований, в частности если способ-прототип позволяет выявлять сенсибилизацию лишь в 85% случаев, то предлагаемый способ позволяет выявлять сенсибилизированных лиц с точностью до

0 100%, кроме того, предлагаемый способ позволяет не только выявлять сенсибилизацию организма, но и определять уровень сенсибилизации (умеренная, сильная), что значительно расширяет возможность его

5 использования в практике.

Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я Способ определения сенсибилизации организма, включающий забор крови, выделение сыворотки с последующей ее инкубацией, отличающийся тем, что, с целью

повышения точности способа, сывороткуего значении 0,5-0,79 определяют умеренинкубируют с лейкоцитами морской свинки,ную сенсибилизацию организма, при значеставят реакцию торможения миграции лей-нии ниже 0,5 - выраженную сенсибилизэкоцитов, вычисляют индекс миграции и прицию.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано при обследовании различных групп населения, в частности при массовых профилактических осмотрах. Целью изобретения является повышение точности исследования. Поставленная цель достигается тем, что сыворотку крови человека инкубируют с лейкоцитами морской свинки, определяют индекс миграции лейкоцитов в РТМЛ и при его значениях в пределах 0,8- 1,0 диагносцируют отсутствие сенсибилиза- ции, 0,5-0,79 - наличие умеренной сенсибилизации, менее 0,5 - наличие сильной сенсибилизации организма.