Среда для изготовления постоянных микропрепаратов из биологических объектов Советский патент 1992 года по МПК G01N1/28 

Изобретение относится к методам микроскопической техники и может быть использовано при подготовке образцов биологических объектов для цветовой микроскопии.

Цель изобретения - улучшение просветляющей способности и увеличение прочности препаратов,

Для этого в состав среды, содержащей просветляющее и мацерирующее вещество -хлоралгидрат, вводят в качестве пластификатора -триэтаноламин и в качестве формообразующей основы поливинилпирролидон при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Хлоралгидрат50-65

Поливинилпирролидон15-25

Триэтаноламин5-7

ВодаОстальное

Среда стриэтаноламином предназначена для заключения неокрашенных объектов и окрашенных гематолсилином.

В табл.1 представлены примеры составов среды с триэтаноламином (составы 1,2 - граничные, 3 - оптимальные значения компонентов).

Пример 1. Неокрашенные препараты членистоногих.

Куриных клещей (Dermanyssus gallinarum), хранящихся в 70°-ном спирте, непосредственно из фиксатора переносили в капле заключающей среды на предметном стекле. Монтировали препараты по 5 экземпляров клещей на каждом стекле.

Результаты испытания заключающей среды с триэтаноламином на препаратах куриных клещей представлены в табл.2.

Пример 2. Препараты нематод, окрашенных гематоксилином.

Паразитических нематод Metastrongylus apri, собранных из легких свиней, фиксировали в жидкости Карнуа и окрашивали гематоксилином по Караччи. После промывки червей в течение 1 ч в воде их на 1 ч помещали в 70°-ный спирт и затем заключали в среды.

VI

и

О

ю

4

Результаты применения заключающихся сред для окрашенных гематоксилином нематод представлены в табл.3.

Пример 3. Препараты растительных тканей, окрашенных гематоксилином.

Кусочки листа бегонии обрабатывали и заключали в препараты так же, как и в примере 2.

Результаты применения заключающих сред к окрашенным препаратам листа бегонии представлены в табл.4.

Пример 4. Препараты хромосом нематод.

У живых нематод Metastrongulus apri в физиологическом растворе препарировали гонады и подвергали их деист вию гипотонического раствора нитрата натрия в течение 10 мин при 37°С. Гонады фиксировали в метанол-уксусной (3:1) смеси и окрашивали ацетогематоксилином в течение 4 ч. Окрашенные половые трубки промывали 10-20 мин в 50%-ной уксусной кислоте, маленькие их кусочки, длиной около 1 мм помещали в

каплю заключающей среды на предметном стекле, накрывали покровным стеклом и раздавливали.

Результаты применения заключающих сред к препаратам хромосом, окрашенным ацетогематоксилином представлены в табл.5.

Формула изобретения Среда для изготовления постоянных микропрепаратов из биологических обьек- тов.вклющающая хлоралгидрат, воду, формообразующую основу и пластификатор, отличающаяся тем, что, с целью улучшения просветляющей способности и увеличения прочности препаратов, в качестве формообразующей основы используют поливинил- пирролидон, а в качестве пластификатора используют триэтаноламин при следующем соотношении компонентов, мас.%: Хлоралгидрат50-60

Иоливинилпирролидон15-25

Триэтаноламин5-7

ВодаОстальное

Изобретение относится к методам микроскопической техники и может быть использовано при подготовке образцов биологических объектов для световой микроскопии. Целью изобретения является улучшение просветляющей способности и увеличение прочности препаратов. Для этого в состав среды вводят тризтаноламин при следующем соотношении компонентов, мае. % : хлоралгидрат50-65; поливинилпир- ролидон 15-25; триэтаноламин 5-7; вода - остальное. 5 табл.

Среда

Визуальная .оценка качества препаратов -

Хитиновые структуры просматриваются 5-7 дней 2-3 ч очень отчетливо. Мягкие ткани совершенно не видны. Форма тела и мелкие структуры хитинового скелета без изменений

Хитиновые структуры хорошо просматри- t сут J-I,5 сут ааются. Видны контуры внутренних органов и слабо проступающие мягкие ткани, несколько снижена отчетливость мелких структур хитинового скелета. Многие экземпляры клещей немного сморщены.

Хитиновые структуры просматриваются 2-3 дня 10-12 ч отчетливо. Мягкие ткани не видны. Форма тела без изменений.

То жеТо же То же

ь Хитиновые структуры просматриваются 7-9 дней 1 сут отчетливо. Мягкие ткани едва раз- личимы. Форма тела без изменений.

Таблица 1

Т а б л

.й.а.

Время просветленияпрепаратов

сть

зе

Отчетливая, ясная синяя окраска 5-7 дней 2-3 ч ядер, железистых включений и др. бэзофильных структур на чистой, прозрачной фоне. Кожно-мускульный мешок и внутренние органы не деформированы.

Окрашенные структуры видны недоста- I сут 1 сут

точно отчетливо из-за мутного фона.

Тело нематод сморщено.

Окрашенные структуры видны отчетли- 2-3 дня i-S ч

во на чистом, прозрачном фоне. Кожно-мускульный мешок и внутренние

органы не деформированы.

Окраска полностью разрушена.

То же

Среда

Визуальная оценка качества препаратов

4(1)

4(2) 4(3)

3

идкость

ФораБерлезе

Отчетливо видны интенсивно окрашенные в синий цвет ядра паренхимы и проводящих сосудов на чистом прозрачном фоне. Форма клеток и ядер не нарушена Тоже То же Окраска разрушается

Окраска разрушается

Время затвердевания препаратов

Время просветления препаратов

0,5-1 ч 5-6 ч 1-2 ч

Жидкость

ФораБерлезе

То же