Среда для изготовления постоянных микропрепаратов из биологических объектов Советский патент 1992 года по МПК G01N1/28 

Изобретение относится к методам микроскопической техники и может быть использовано при подготовке образцов биологических объектов для световой микроскопии.

Цель изобретения - улучшение просветляющей способности и увеличение прочности препаратов.

Для этого в состав среды, содержащей просветляющее и мацерирующее вещество - хлоралгидрат, пластификатор-глицерин и воду, в качестве формообразующей основы вводят поливинилпирролидон при следующем соотношении компонентов, мас.%: Хлоралгидрат50-65

Поливинилпирролидон15-25Глицерин 5-7 Вода Остальное Примеры конкретного выполнения среды представлены в табл.1.

Для приготовления среды указанные компоненты смешивают в любой последовательности и оставляют на 24 ч до полного их растворения и исчезновения пузырьков. Готовая среда хранится неограниченно долгое время в закрытой склянке из темного стекла. При загустении в нее добавляется вода или 70°-ный спирт.

Пример 1. Неокрашенные препараты членистоногих.

Куриных клещей (Dermanyssus gallinac), хранящихся в 70°-ном спирте, непосредственно из фиксатора переносят в каплю заключающей среды, приготовленной по прописям, приведенным в таблице, Монтируют микропрепараты по 5 экземпляров клещей на каждом стекле.

Результаты испытаний заключающей среды на препаратах из куриного клеща представлены в табл.2.

Пример 2. Препараты нематод, окрашенных кармином.

Паразитических нематод Metastrongylus apri из легких свиней фиксируют в жидкости Карнуа и окрашивают в течение суток ацетосл

с

VI

ю сл о о

W

кармином. Из красителя червей переносят на 10 мин в 50%-ную уксусную кислоту, после чего их заключают в микропрепараты с различными средами (так же, как в примере

1).

Результаты испытания заключающих сред на окрашенных кармином препаратах нематод представлены в табл.3.

Время затвердевания препаратов такое же, как и в примере 1.

Пример 3. Препараты растительных тканей, окрашенных кармином.

Кусочек листа бегонии фиксируют жидкостью Карнуа и окрашивают в течение суток ацетокармином. Маленькие, около 1 мм3 окрашенные кусочки отмывают в 50%- ной уксусной кислоте в течение 10 мин и заде- лывают в микропрепараты, используя указанные в примере 1 среды.

Результаты испытания заключающих сред на окрашенных кармином препаратах листа бегонии представлены в табл. 4.

Пример 4. Препараты растительных тканей, окрашенных гематоксилином.

Кусочки листа бегонии фиксируют как в примере 3 и окрашивают гематоксилином Ка- раччи. Окрашенные кусочки промывают в воде в течение 1 ч и заделывают в препараты, как в примере 3.

Результаты: в средах 1-3 и в жидкости Фора-Берлезе окраска полностью разрушилась. В среде 4 на препаратах отчетливо видны окрашенные в синий цвет ядра на чистом прозрачном фоне. Форма клеток и ядер не нарушена.

П р и м е р 5. Препараты хромосом нематод.

У живых нематод Metastrongylus apri в физиологическом растворе препаруют гонады и подвергают их действию гипертонического раствора цитрата натрия в течение 10 мин при 37°С. Гонады фиксируют в метанол- уксусной (3:1) смеси окрашивают ацетокармином в течение суток. Окрашенные половые трубки промывают 5-10 мин в 50%- ной уксусной кислоте, маленькие их кусочки длиной около 1 мм помещают в каплю, заключающей среды, накрывают покровным стеклом и раздавливают.

Результаты испытания заключающих сред на препаратах хромосом, окрашенных кармином, представлены в табл.5.

Во всех случаях время просветления составляет не более 5 мин, благодаря чему препараты можно исследовать практически сразу после их изготовления.

Формула изобретения

Среда для изготовления постоянных микропрепаратов из биологических объектов, включающая хлоралгидрат, глицерин, воду и формообразующую основу, отличающаяся тем, что, с целью повышения просветляющей способности и увеличения прочности препаратов, в качестве формообразующей основы используют поливинил- пирролидон при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Хлоралгидрат50-60;

Поливинилпирролидон15-25;

Глицерин5-7;

ВодаОстальное.

Таблица 1

Изобретение относится к методам микроскопической техники и может быть использовано при подготовке образцов биологических объектов для световой микроскопии. Целью изобретения является улучшение просветляющей способности и увеличение прочности препаратов. Для этого в состав сверху в качестве формообразующей основы вводят поливинилпирролидон при следующих соотношениях, мае. % хлоралгидрат 50-60; поливинилпирролидон 15-25; глицерин 5-7; вода - остальное. 5 табл.

15

18616

18

15 Быстро проникает в ткани, хооошо просветляет и слабо деформирует объект. Плохо и долго затвердевает. (5-7 дней)

Быстро (за 1 сут) и,прочно затвердевает. Плохо проникает в ткани. Деформирует, тонкие структуры.

Достаточно прочно затвердевает (за 2-3 пня). Умеренно быстро проникает в ткани, хорошо сохраняет структу- ры объекта.

16 То же

Кармином

То же

Гематои- силином

Среда

Визуальная оценка качества препаратов

Жидкость ФораБерле е

Хитиновые структуры просматриваются очень отчетливо. Мягкие ткани совершенно не видны. Форма тела и мелкие структуры хитинового скелета без изменений

Хитиновые структуры хорошо просматриваются. Видны контуры внутренних органов и слабо проступающие мягкие ткани, несколько снижающие отчетливость мелких структур хитинового скелета. Многие экземпляры клещей немного сморщены.

Хитиновые структуры просматриваются отчетливо. Мягкие ткани не видны. Форма тела без изменений.

Хитиновые структуры просматриваются отчетливо. Мягкие ткани - едва заметно. ФОрма тела без изменений.

Среда

Визуальная оценка качества препаратов

ть

е

Отчетливо видны электривно окрашенные 1-2 ч красные ядра на чистом прозрачном фоне. Кожно-мускульный мешок и внутренние органы не деформируются

Окрашенные структуры (ядра) видны 1 сут недостаточно отчетливо из-за мутного фона. Тело у всех нематод сморщивается.

Окрашенные структуры видны отчетливо -5 ч на чистом прозрачном фоне. Кожно- мускульный мешок и внутренние органы не деформируются.

Окраска полностью пропадает

Окрашенные структуры видны нечетко 1 сут из-за мутного фона. Большинство нематод сморщенные.

Время зат- Время прос- вердевания ветления препаратов j препаратов

5-7 дней 2-3 ч

1 сут

1-1,5 сут

2-3 дня 10-12 ч

7-9 дней 1 сут

Таблица 3

Время просветления объектов

Среда Визуальная оценка качества препаратов Время просветления Iпрепаратов

„.e-eJeeee™««..i ee««™ e«.« ™ e™«™« « ™ ™ ™ - -

1Отчетливо видны интенсивно окрашен- 0,5-1 ч ные в красный цвет ядра паренхимы

и проводящих сосудов на чистом, совершенно прозрачном фоне. Форма клеток и ядер не нарушена.

2То же5-6 и

3То же1-2 ч

Среда

Визуальная оценка качества препаратов

1 2

4

Жидкость

ФораБерлезе

Хороший разброс хромосом. Структуры хромосом четкие. Фон прозрачный. Плохой разброс хромосом. Все хромосомы слипшиеся. Структура хромосом

плохо различима. Фон прозрачный.

Недостаточный разброс хромосом. Многие хромосомы налегают друг на друга. Структуры хромосом четкие. Фон прозрачный.

Окраска разрушена.

Недостаточный разброс хромосом. Большинство хромосом налегают друг на друга. Структура хромосом просматривается плохо. Фон немного мутный.

Таблица 4

Таблица 5