Способ определения тироксина в слюне Советский патент 1992 года по МПК G01N33/534 

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано в клинике и научно-исследовательских лабораториях.

Целью изобретения является упрощение способа и расширение его универсальности за счет использования любой тест-системы для определения пироксина.

Для этого в способе определения тироксина в слюне, включающем обработку пробы и ее радиоиммунологический анализ, слюну обрабатывают путем сублимационной сушки до остаточной влажности 0,4-0,6%.

Способ осуществляют следующим образом. ..- :;,. :

Слюну объемом не менее 4 мл помещают во флаконы и подвергают сублимационной сушке при (-25) - (30°С) до остаточной влажности 0,4-0,6%. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл воды. Определение ТА проводят при помощи стандартного набора реактивов для определения тироксина в крови. Рассчитывают по формуле

гтл-УИМ

VI V

где Тз - содержание тироксина, найденное из калибровочного графика; ...

V2 - объем, в котором растворен сухой остаток после сублимации; V

Vi - объем исследуемой слюны.

Применяемая лиофильная сушка позволяет сократить время подготовки к определению до 8-10 ч по сравнению с 10 неделями в прототипе. Кроме того, определение тироксина в сконцентрированной слюне становится доступным с использованием стандартных наборов.

Сушка проводится до остаточной влажности 0.4-0.6 %..

Аппаратура для сублимационой сушки не позволяет провести упаривание до требуемого объема пробы с точностью, необходимой для радиоиммунологического анализа. Поэтому образец высушивается до сухого остатка.

СА

С

В биологических жидкостях тироксин не устойчив, образцы могут храниться не более 2 недель при -20°С.

Проведенные исследования показывают, что в данном способе продол- жительность хранения проб может быть существенно увеличена и сравнима с таковой для коммерческих препаратов тироксина (L-тироксин З г срок хранения), не требуя для сохранности низких температур. Эти факторы позволяют производить накопление материала при массовых обследованиях в полевых и экспедиционных условиях, где нет специализированных изотопных лабораторий.

П р и м е р. 6 мл слюны, собранной из устья выводного протока околоушной железы с помощью специального устройства по- мещали в стеклянные флаконы объемом 45 k100 мл, которые устанавливали в камеры .сублимационной сушки KS - 6 для плазмы крови. Сублимационную сушку проводили в Вакууме в интервале температур (-25) - (30)°С до остаточной влажности 0,5 мас.%. Сухой остаток растворяли в 0,5 мл воды.

Определение тироксина проводили с применением набора РИО-Т - ПГ института биоорганической химии АН БССР следующим образом. . .

Из растворенного в воде сухого остатка отбирали по 0,25 мл и вносили в аналитические пробирки, входящие в комплект набора РИО-Т4 - ПГ. Приливали по 0,5 мл раствора антисыворотки, туда же добавляли 0,1 мл раствора 1251-тироксина и оставляли на 1 ч при комнатной температуре. После этого в пробирки приливали 0,1 мл раствора полиэтиленгликоля и тщательно перемешивали. Пробирки помещали в центрифугу с горизонтальным ротором и центрифугиро- вали в течение 15 мин при ускорении 15000- 2000. Надосадочную жидкость сливали в пробирку и помещали в гамма-счетчик для измерения количества импульсов в каждой пробирке в течение 1 мин. По калибровоч- ному графику определяли концентрациюти- роксина.

Определение тироскина в слюне проводили у здоровых людей и больных гиперти- реоэом. Параллельно определяли известным способом.

Результаты приведены в табл. 1.

Из табл. 1 видно, что в обоих способах значения содержания тироксина в слюне согласуются, являясь величинами одного порядка.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет определить тироксин в слюне с такой же точностью, как и известный, но при этом он намного проще, что требует меньше затрат труда и времени. Так, в прототипе на приготовление антигена и иммунизацию кроликов требуется 8-10 недель. Процесс же сублимации в данном способе длится 8-10 ч.

В табл. 2 представлена зависимость открытия тироксина из слюны от остаточной влажности.

Из табл. 2 видно, что процент открытия гормона максимальный при остаточной влажности 0,3- 0,6 % , но при 0,3 % влажности ухудшается растворимость осадка, поэтому в качестве оптимального выбран ди- апазон 0,4-0,6% влажности.

При остаточной влажности выше 0,6% наблюдается уменьшение открытия гормона из слюны, что снижает точность определения.

Положительный эффект изобретения достигается за счет использования сублимационной сушки для сокращения времени анализа и удлинения срока хранения материала, в известном способе это не достижимо. В прототипе создается новая тест-система, требующая на ее изготовление длительного времени, слюна для исследования не поддается длительному хранению, а должна использоваться сразу после забора.

Форр мула изобретения Способ определения тироксина в слюне путем добавления специфической антисыворотки к исследуемой пробе с последующей регистрацией реакции антиген-антитело по включению радиоактивной метки, отличающийся тем, что, с целью, упрощения способа и расширения его универсальности за счет использования любой тест-системы для определения тироксина, исследуемый материал подвергают сублимационной сушке до остаточной влажности 0,4-0,6%.

Таблица 1

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано в клинической лаборатории. Целью изобретения является упрощение способа и расширение его универсальности за счет использования любой тест-системы доя определения тироксина. Слюну подвергают сублимационной сушке при (-25) - (Зр)С до остаточной влажности 0,5%. Сухой остаток растворяют в воде и проводят радириммунрлогический анализ с использованием стандартного набора для определения тироксина в крови.

Та блица 2