Способ выбора серий препарата нормального иммуноглобулина для лечения острой гнойной инфекции Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, точнее к клинической иммунологии и хирургии, и предназначено для выбора серий нор- мального иммуноглобулина больным с острой гнойной инфекцией.

Известен способ выбора серий препарата нормального иммуноглобулина для лечения острой гнойной инфекции, заключающийся в определении протективныхантител в опытах пассивной защиты мышей. Способ включает иммунизирование подопытных животных внутрибрюшинно различными сериями иммуноглобулина (40 животных на .

одну дозу препарата), заражение иммунизированных животных внутрибрюшинно через 2 ч после иммунизации четырьмя дозами живой суточной культуры бактерий (10 подопытных животных на одну дозу), заражение аналогичным способом четырьмя меньшими дозами неиммунизированных животных, контроль (5 животных на дозу), учет гибели животных в течение 6-7 дней, расчет дозы живой суточной культуры бактерий, вызывающей 50% летальность у животных (ЛДбо), определение коэффициента эффективности различных серий иммуногL

r-.fi . f

. -- f XA

1727073

Изобретение относится к медицине, точнее к клинической иммунологии и хирургии, и предназначено для выбора серий нормального иммуноглобулине для лечения больных с острой гнойной инфекцией. Цель изобретения - повышение точности.выбора за счет подбора нормального иммуноглобулина к возбудителю гнойной инфекции конкретного больного. Для этого выделяют патогенный аутоштамм бактерий, который опсонизируют различными сериями иммуноглобулина, а затем осуществляют реакцию завершенного фагоцитоза лейкоцитов крови больного к опсонизированно- му аутоштамму с определением индекса завершенного фагоцитоза (ИЗФ). Для лечения выбирают ту серию нормального иммуноглобулина, которая максимально повышает ИЗФ, причем коэффициент эффективности этой серии, определяемый как отношение ИЗФ в опыте к ИЗФ в контроле (без иммуноглобулина), не должен быть меньше 1,5. При меньшей трудоемкости и сокращении времени исследования с 6-7 дней до 2 сут точность выбора препарата повышается на 64,7%. (Л

обулина как отношение ЛДбо в опыте к Дго в контроле, выбор серий препарата с ысоким коэффициентом эффективности КЭ) для лечения соответствующей гнойной нфекции..

Однако известный способ дает большой процент ошибок в выборе серий иммуноглоулина, т.е. имеет недостаточную точность.

Цель изобретения - повышение точноти способа.

Для достижения поставленной цели согласно способу выбора серий препарата нормального иммуноглобулина для лечения строй гнойной инфекции путем воздействия различных серий препарата на патогенные микроорганизмы, i в качестве микроорганизмов используют аутоштамм бактерий, при этом обрабатывают его имму- ноглобулином и добавляют к пробе крови больного, проводят реакцию завершенного фагоцитоза лейкоцитов, определяют индекс завершенного фагоцитоза и при повышении его в 1,5 раза по сравнению с пробой без иммуноглобулина, выбирают данную серию иммуноглобулина для лечения.

Способ осуществляют следующим образ/ом..

У больного выделяют патогенный аутоштамм бактерий, для чего производят забор материала из очага гнойного воспаления или крови больного и высевают его на скошенный агар, который помещают в термостат при 37°С на сутки. Из полученной суточной культуры патогенного аутош- тамма бактерий по оптическому стандарту мутности готовят на физиологическом растворе взвесь бактерий в концентрации 0,1109 мкрб.кл./мл. Затем производят забор венозной крови больного в стерильную пробирку в количестве 0,1 мл на каждую серию подбираемого иммуноглобулина и добавляют на А об.ч. крови.1 ч 3,8%-ного раствора цитрата натрия или на 1 мл крови - 0,1 мл гепарина. В другиеселиконизирован- ные стерильные пробирки помещают по 0,05 мл каждой серии иммуноглобулина в разведении 1:24 на физиологическом рас- творе и по 0,02 мл приготовленной взвеси бактерий, перемешивают встряхиванием и помещают на 10-15 мин в термостат при 37°С (опсонизация бактерий). В одну пробирку вместо иммуноглобулина добавляют 0,05 мл физиологического раствора (контроль). В каждую пробирку с опсонизиро- ванными бактериями помещают 0,1 мл цитратной или гепаринизированной крови, перемешивают, забирают 0,02 мл смеси и переносят в пробирку с 3,0 мл физиологического раствора. После перемешивания содержимое пробирки в количестве 0,05 мл переносят на чашку Петри, на поверхность хорошо просушенного агара, и втирают жидкость досуха. Чашки Петри помещают в термостат на 17-18 ч при 37°С.

Оставшуюся в пробирках часть бактериаль- но-иммунрглобулино-кровяной смеси помещают в термостат на 2,5 .ч при 37°С (предварительная инкубация). После предварительной инкубации пробирки легко

0 встряхивают и вновь отбирают из них по 0,02 мл смеси, которую переносят в 3,0 мл физиологического раствора, перемешивают, затем 0,5 мл смеси высевают на чашки. Петри, последние инкубируют 17-18 ч при

5 37°С. После 17-18-часовой инкубации все чашки Петри с выросшими на них бактериями остужают в течение 10-15 мин в холодильнике при 4-6°С, смывают бактериальные колонии с помощью шпатели и 40 мл дистил0 лированной воды и тщательно перемешивают. Затем определяют оптическую плотность смыва бактериальных колоний по концентрационному фотоколориметру (КФК-2М), используя светофильтр 364 нм и

5 кюветы шириной 5,1 мм. В контрольную кювету помещают дистиллированную воду. Индекс завершенного фагоцитоза лейкоцитов (ИЗФ) рассчитывают как отношение оптической плотности смыва колоний

0 бактерий, выросших на агаре без предварительной, инкубации смеси, к оптической плотности смыва колоний бактерий, выросших на агаре после предварительной инкубации смеси. Коэффициент эффективности

5 (КЭ) иммуноглобулина определяют как отно- . шение ИЗФ в опыте к ИЗФ в контроле (инкубация .с физиологическим раствором). После этого из различных серий нормального иммуноглобулина для лечения выбирают

0 наиболее эффективные, а именно те, у которых КЭ явля.ется максимальным, но не менее 1,5 усл.ед.

Подбор должен сопровождаться контролем используемых сред на стерильность.

5 Общая продолжительность исследования, включая выделение патогенного аутоштам- ма бактерий, 46-48 ч.

Пример. Больная В., 3 года, поступила в клинику в тяжелом состоянии на 7-е сутки

0 после начала заболевания. Последние трое суток лечилась в реанимационном отделении с диагнозом: острая гнойная правосторонняя невыясненной этиологии деструктивная пневмония, осложненная пи- опневмотораксом. Причрескожной пункции плевры удалено 250 мл гноя. Проводили

аспирационный дренаж плевральной полости, антибактериальную и дезинтокси- кационную терапию. Без уточнения возбудителя гнойной инфекции больной в

течение 3 дней вводили антистафилококковую плазму в количестве 100 мл и антистафи- локркковый иммуноглобулин в общей дозе 0,5 мл/кг массы тела ребенка. Состояние оставалось крайне тяжелым, увеличивалась инфильтрация верхней доли правого легкого и количества гнойного экссудата, выводимого из плевральной полости. В связи с отсутствием положительной динамики в заболевании, больная переведена в детскую хирургическую клинику, При поступлении состояние тяжелое. Больная адинамична. Выраженная бледность кожных покровов. Температура тела 38,8°С. Частота дыхания 54/мин. Тоны сердца приглушены. Частота сердечных сокращений 144 уд/мин. Установлен второй аспирацйонный дренаж плевральной полости справа в третьем мёж- реберье и сделан высев гноя на скошенный агар. Так как гной, выделившийся по дренажам, по цвету и запаху был похож на гной при синегнойной инфекции, то начали внутримышечное введение серии № 360786 нормального иммуноглобулина с высоким КЗ (3,1 усл.ед) к синегнойной палочке, определенным ранее известным способом (прототипом), в дозе 0,5 мл/кг массы тела больного. Одновременно проводили антибактериальную, дезинтоксикационную терапию и аутотрансфузию ультрэфйоле- товооблученной крови.

Несмотря на проводимое лечение, состояние оставалось тяжелым. Одышка до 50 дыханий в 1 мин. Сохраняется высокая температура тела с повышениями до 39,4°С.

На второй день с момента поступления на скошенном агаре выросли бактериальные колонии. При последующем бактериологическом исследовании идентифицирована синегнойная палочка. Проведен выбор серии препарата иммуноглобулина по предлагаемому способу (ин витро) из 4 серий нормального иммуноглобулина, включая и примененную для лечения боль-: ной серию N2 360786, и из одной серии антистафилококкового иммуноглобулина.

Определяли индекс завершенного фагоцитоза как отношение оптической плотности смыва колоний бактерий, выросших на агаре без предварительной инкубации бак- териально-иммуноглобулино-кровяной смеси, к оптической плотности смыва колоний бактерий, выросших на агаре после предварительной инкубации смеси. Затем определяли коэффициент эффективности серий нормального иммуноглобулина и серии антистафилококкового иммуноглобулина.

Результаты представлены в таблице.

Представленные данные свидетельствуют о том, что серия № 230486 нормального

иммуноглобулина имеет ,0 усл.ед., т.е. повышает ИЗФ аутоштамма бактерий в 5 раз, остальные серии иммуноглобулина завершенный фагоцитоз лейкоцитов к 5 возбудителю гнойной инфекции не повышают.

В соответствии с предлагаемым способом для лечения больной Б. выбрана серия № 230486 нормального иммуногло0 булина..

В тот же день произведена замена в той же дозе используемой серии нормального иммуноглобулина на серию № 230486 с выявленной ин витро (в соответствии с предла5 гаемым способом) высокой активностью к аутоштамму бактерий. На вторые сутки после начала введения подобранного предлагаемым способом иммуноглобулина значительно улучшилось общее состояние.

0 Больная активна. Улучшился аппетит. Температура тела снизилась до 37,2°С и на третьи сутки нормализовалась. Частота дыхания 30/мин. Тоны сердца ясные. Частота сердечных сокращений 88 уд/мин. При рен5 тгенологическом исследовании (контрольном исследовании) на 8-е сутки с момента поступления в клинику инфильтрация легочной ткани не определялась, избыточен бронхососудистый рисунок, легкое рас0 правлено. Через 4 дня после назначения выбранной серии иммуноглобулина произведено повторное определение ее эффективности ин витро в соответствии с предлагаемым способом: ,9 усл.ед.

5 ИЗФ аутоштамма синегнойной палочки повысился с 4,0 до 16,2 усл.ед, Препарат отменен. Общая курсовая доза иммуноглобулина составила 2,8 мл/кг массы тела больного. После заместительной им муно0 терапии на фоне указанного выше комплексного лечения у больной произошло снижение лейкоцитарного индекса интоксикации с 3,6 до 1,4 усл.ед., повышение лизосомальной активности нейтрофилов с

5 402 до 444 усл.ед., активности фагоцитоза

нейтрофилов к латексу с 20 до 32 усл.ед.,

интенсивности фагоцитоза нейтрофилов с

72 до 160 усл.ед., повысилось абсолютное и

относительное количество В-лимфоцитов с

0 0,44-109/л (12%) до 0,61 -109/л (30%) соответственно, содержание в сыворотке крови с 102 до 130 МЕ/л, На 13-е сутки у больной удалены дренажи из плевральной полости, и на 25-е сутки она выписана домой в удов5 летворительном состоянии.

При обследовании и лечении больных с острой гнойной инфекцией установлено, что серии нормального иммуноглобулина с высокой эффективйостью, выявленной по спосрбу-прототипу, эффективна в лечении,

только у б из 17 больных. Серии препарата, выбранные по предлагаемому способу, эффективны в лечении у 33 из 33 больных. Полученные различия статистически достоверны (,63). Таким образом, процент совпадений результатов при выборе серий нормального иммуноглобулина известным способом составил 35,3%, Процент ошибок при использовании известного способа выбора серий препарата для лечения больных с острой гнойной инфекцией составил 64,7%. Ошибки в выборе серий нормального иммуноглобулина предлагаемым способом не наблюдались. Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает повышение точности выбора серий нормального иммуноглобулина, при этом точность повышается на 64,7%.

Следует отметить, что предлагаемый способ обеспечивает значительное сокращение сроков исследования: с 6-7 дней до 2 сут. Значительно уменьшается трудоемРезультаты выбора ин витро иммуноглобулина для лечения больной Б

кость способа: в отличие от известного способа предлагаемый не требует иммунизирования и заражения большого количества животных, ухода за ними.

Формула и зобретени я Способ выбора серий препарата нормального иммуноглобулина для лечения острой гнойной инфекции путем воздействия

различных серий препарата на патогенные микроорганизмы, отличающийся тем, что, с целью, повышения точности способа, в качестве микроорганизмов используют аутоштамм бактерий, при этом обрабатывают его иммуноглобулином и добавляют к пробе крови больного, проводят реакцию завершенного фагоцитоза лейкоцитов, определяют индекс завершенного фагоцито- . за и при повышении его в 1,5 раза по

сравнению с пробой без иммуноглобулина выбирают данную серию иммуноглобулина для лечения.