Способ определения адаптированности чабанов к холодовым нагрузкам в условиях отгонного животноводства Советский патент 1992 года по МПК G01N33/49 G01N33/50 

Изобретение относится к физиологии, биохимии и гигиене и может быть использовано для определения адаптированности организма чабанов к Холодовым нагрузкам.

Цель изобретения-упрощение способа за счет сокращения числа трудоемких операций.

Способ осуществляют следующим образом.

Для определения адаптированное™ человека к холоду используют три показателя адениловой системы: суммарное содержание адениловых нуклеотидов в эритроцитах, которое у адаптированных лиц составляет 1,7 мкмоль/мл эритромассы и выше, а в неадаптированной контрольной группе от 0,5 до 1,6 мкмоль/мл; уровень АТФ у неадаптированных чабанов до 65%, от 65% и выше- у адаптированных лиц, а также коэффициент отношения АТФ к АДФ, имеющий у адаптированных чабанов значение 3 и выше.

Принцип способа заключается в экстракции адениловых нуклеотидов 10%-ной трихлоруксусной кислотой, последующем их разделении методом низковольтного электрофореза и спектрофотометрией элю- ата в ультрафиолете.

Реактивы: бумага ленинградская быстрая, М; 2; 10%-ная трихлоруксусная кислота (ТХУ); 0,1М цитратный буфер рН 4,5; серный эфир.

Ход анализа: кровь из вены в количестве 3-4 мл берут в охлажденные пробирки с гепарином, Определяют гематокрит суспензии отмытых в физиологическом растворе эритроцитов. К 0,5 мл эритроцитов прибавляют 0,5 мл 10%-ной ТХУ, охлаждают 30 мин в испарителе холодильника, центрифугируют при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость количественно переносят в чистую пробирку с притертой пробкой и очищают путем встряхивания с трехкратным объемом серного эфира. После разделения слоев эфир отсасывается пастеровской пипеткой.

СП

С

xj го

00 00

о

СП

Очистку повторяют дважды. В результате очистки эфиром удаляется ряд соединений ненуклеотидной природы, имеющих линии поглощения в ультрафиолете.

Подготовленные экстракты наносят в количестве 0,1 мл на бумажные ленты для электрофореза, отступя от катодного конца ленты. Используются полосы бумаги 40x4 см2. Разделение производят при напряжении 15 Вт/см в камере для бумажного электрофореза, заполненной 0,1 М цитратным буфером рН 4,5.

После разделения фораграммы высушивают в горизонтальном положении в сушильном шкафу при 80°С 3 мин, затем просматривают на ультрахимескопе (фильтр УФС-1).

В качестве свидетелей используются химически чистые препараты АТФ, АДФ, АМФ в концентрации 4x10, 1,5хЮ6, 1 10. м соответственно.

Зоны миграции свидетелей и нуклеотидов ТХУ- экстракта эритроцитов строго постоянны и характеризуются определенной подвижностью, обнаруживаемой на ультрахимескопе.

Очерченные пятна нуклеотидов вырезают, элюируют в 5 мл 0,1 N HCI при 37°С в течение 4 ч, последние 30 мин непрерывно встряхивая. Оптическую плотность элюатов регистрируют на спектрофотометре при 258 и290нм.

Содержание адениловых нуклеотидов рассчитывают по формуле

0,363 Е -40 100

пг

где 0,363 - расчетный коэффициент адени- ловой системы; Е - разность экстинкции при 258 и 290 нм; 40 - коэффициенты пересчета на 1 мл.

Пример 1. По предлагаемому способу обследован овцевод-чабан со стажем работы 11 лет. Суммарное количество адениловых нуклеотидов в эритроцитах 1,88

мкмоль/мл, содержание АТФ 71 %, отношение АТФ/АДФ 3,0.

П р и м е р 2. Обследован овцевод-чабан со стажем работы по профессии 12 лет. Суммарное количество адениловых нуклеотидов 2,74 мкмоль/мл; АТФ 73%; АТФ/АДФ 4,5.

Примерз. Обследован овцевод-чабан со стажем работы 9 лет. Суммарное количество нуклеотидов 1,7 мкмоль/мл; АТФ 65%;

АТФ/АДФЗ.О.

Суммарные данные, полученные для адаптированных чабанов (со стажем работы от 1 г) и неадаптированных людей (контрольных, чабанов со стажем менее 1 г) приведены в таблице.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет вместо реализации сложного исследования комплекса физиологических показателей провести значительно более

простой и быстрый биохимический тест. Формула изобретения Способ определения адаптированности организма чабанов к Холодовым нагрузкам в условиях отгонного животноводства, о т личающийся тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения числа трудоемких операций, у испытуемых проводят забор крови из вены, отделяют эритроциты, определяют в них адениловые

нуклеотиды, и при суммарном их содержании 1,7 мкмоль/мл эритромассы и более, содержании АТФ 65% и более от суммарных адениловых нуклеотидов и отношении АТФ/АДФ, равном 3 и более, определяют

адаптированность к Холодовым нагрузкам.

Использование: физиология, биохимия и гигиена труда, оценка работоспособности человека при воздействии холода. Сущность изобретения: проводят забор крови, выделяют эритроциты, в них определяют содержание адениловых нуклеотидов. При наличии суммарного количества от 1,7 мкмоль/мл эритромассы и выше, содержании АТФ от 65% и выше и значении коэффициента отношения АТФ к АДФ 3 и выше определяют адаптированность организма чабана к холоду. 1 табл.