Способ определения специфической сенсибилизации организма к аллергенам Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии, и может быть использовано для диагностики пищевой и лекарственной сенсибилизации.

Известен способ определения специфической сенсибилизации организма к аллергенам с помощью реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ).

Недостатком способа-прототипа является относительно низкая точность определения специфической сенсибилизации организма к аллергенам. Это объясняется тем, что известный способ позволяет учитывать только клеточный фактор РТМЛ и не обеспечивает возможность учета гуморального фактора РТМЛ.

Целью изобретения является повышение точности определения.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь, полученную из вены больного, помещают в пробирку, содержащую гепарин (из расчета 20 ед. на 1 мл крови). Пробирки с кровью ставят в холодильник при 4-6°С на 30 мин, затем раскапывают в лунки пластмассовых планшетов в объеме 0,1 мл. К порциям крови добавляют 0,025 мл раствора готового пищевого или лекарственного аллергена, смешивают и набирают в капилляры свободном током. В ходе определения в качестве аллергенов могут быть использованы, например, готовые коммерческие аллергены, такие как пищевые аллергены из говядины, из гречневой крупы, из курицы, овсяной крупы, лимона, пшеничной муки, рисовой муки, ржаной муки, свинины, утки, ячменной крупы. Используют капилляры для определения С-реактивного белка или капилляры аналогичного разреза. Запаивают пицеином. Центрифугируют 3 мин при 1000 об/мин. Оставляют в термостате при 37°С на 22 ч. Контролем служат капилляры с кровью и физиологическим раствором.

В результате центрифугирования лейкоциты располагаются слоем над поверхносл

с

VI

CJ

Јь

о

00

стью большего слоя эритроцитов. Величину миграции определяют с помощью окуляр- микрометра под увеличением 8,0x6,0, сравнивая с контролем. Уменьшение величины столбика более, чем на 20% говорит о наличии сенсибилизации к исследуемому аллергену.

Преципитацию выявляют путем исследования недостаточной части плазмы в опытном капилляре по сравнению с контрольным капилляром. Исследование проводят в проходящем свете на темном фоне. Преципитация определяется как помутнение надосадка, Для определения степени (интенсивности) помутнения надосадка может быть использован, например, визуальный учет реакции. В этом случае степень помутнения оценивается в крестах. При этом слабое помутнение надосадка оценивается в один крест, отчетливое помутнение надосадка оценивается в два креста, помутнение надосадка молочного цвета оценивается в три креста.

При определении наличия или отсутствия специфической сенсибилизации организма к аллергенам применяется во внимание как торможение миграции лейкоцитов, так и наличие преципитации в над- осадке. В случае отсутствия торможения миграции лейкоцитов и наличия положительной преципитации (два креста) специфическая сенсибилизация считается подтвержденной. В случае наличия выраженного торможения миграции лейкоцитов и отсутствия преципитации специфическая сенсибилизация к исследуемому аллергену также считается подтвержденной.

П р и м е р 1, Петя Л., 2 года 7 мес. Диагноз: пищевая аллергия, локализованный нейродермит. Проведено обследование способом-прототипом и предлагаемым способом. Кровь взята из вены натощак в пробирку с гепарином (из расчета 20 ед.гепарина на 1 мл крови). Пробирку с кровью поставили в холодильник при 4-6°С на 30 мин. Затем по 0,1 мл крови разнесли в ячейки пластмассовых планшетов, добавили по 0,025 мл различных аллергенов (использовались коммерческие аллергены, изготовленные в ЦНИИВС им. Мечникова; аллергены из молока с.74 К. 5695; из гречки с.4 К. 4602; из ячменной муки с.9 К. 4420; из рисовой крупы с. 1 К. 1655; из овсяной муки с.З К 4037; из ржаной муки с.. 1 К. 1615; а также дополнительно использовались аллергены из пищевых продуктов, приготовленных в лаборатории ex temporc). Аллергены, промышленный способ приготовления которых не налажен в нашей стране, готовятся путем термической обработки

и дальнейшего разведения физиологическим раствором в 1000 раз. Аллергены, приготовленные данным способом, испытаны при постановке параллельных опытов с коммерческими аллергенами из одного и того же продукта (гречка, рисовая крупа, ржагая мука, говядина, мясо курицы, овсяная крупа, пшеничная мука, ячменная крупа). Результаты опытов аналогичные. Дополнительно

0 готовились аллергены из свеклы, капусты, моркови, яблоки, кукурузной муки, картофельного крахмала. После внесения раствора аллергена в лунки, его перемешивали с гепаринизированной кровью и свободным

5 током набирали смесь из каждой лунки в 2 капилляра, запаивали пицеином. Центрифугировали 3 мин при 1000 об/мин, ставили в термостат при температуре 37°С на 22 ч. Учет величины миграции определяли с по0 мощью окуляр-микрометра под увеличением 8,0x6,0, сравнивая с контролем. Преципитацию выявляли исследованием надосадка в проходящем свете на темном фоне, сравнивая с контролем.

5 У ребенка проведено обследование для выявления сенсибилизации к аллергенам молока, гречки, ячменной муки, рисовой крупы, овсяной крупы, пшеничной муки, ржаной муки (инструмент-изготовитель), се0 рии, контрольные номера указанные выше), а также к аллергенам, приготовленным из кукурузы, картофельного крахмала, говядины, свинины, баранины, мяса курицы, свеклы, капусты, моркови,яблока.

5 Результаты обследования приведены в табл,1.

Таким образом, торможение миграции лейкоцитов отмечалось на аллергены ячменной крупы, кукурузной муки, картофельного

0 крахмала, свеклы, капусты. Преципитация наблюдалась в капиллярах с аллергенами гречневой крупы, ячменной крупы, рисовой крупы, пшеничной муки, ржаной муки и го5 вядины.

Результаты обследования подтвердились данными анамнеза и провокационными пробами.

Исключение всех причиннозначимых

0 аллергенов позволило добиться значительного клинического улучшения.

С использованием предлагаемого способа и способа-прототипа (РТМЛ) был обследован 201 ребенок, Аллергенные наборы

5 были различными, в основном определилась сенсибилизация к 12-18 аллергенам (молоко, гречневая крупа, ячменная мука, рисовая крупа, овсяная крупа, кукурузная мука, картофельный крахмал, пшеничная мука, ржаная мука, говядина, свинина, баранина, мяса курицы, свекла, капуста, морковь, яблоко). За 100% были приняты данные комплексного контрольного обследования. Выявление специфической сенсибилизации к причиннозначимым аллергенам контрольным способом осуществляли на основе данных анамнеза и провокационных проб. Результаты представлены в табл.1.

Из данных табл.1 видно, что использование предлагаемого способа позволяет повысить точность определения на 29%.

Для доказательства специфичности с использованием предлагаемого способа, способа-прототипа (РТМЛ) и контрольного способа (на основе анамнестических данных и результатов провокационных проб) были обследованы 3 группы детей с подтвержденным диагнозом; 1 группа - дети с сенсибилизацией к молоку (145 человек); П группа - дети, страдающие пищевой аллер гией, но у которых комплексное контрольное обследование не выявило сенсибилизации к молоку (56 человек);

III группа-дети, практически здоровые (15 человек). Результаты представлены в табл 3.

-

Представленные данные показывают высокую специфичность предлагаемого способа. Возможность одновременного учета результатов РТМЛ и результатов преципитации при использовании способа позволяет одномоментно оценивать как

клеточную, так и гуморальную реакции организма на исследуемый аллерген, что позволяет выявлять различные иммунопатологические звенья патогенеза, участвующие в формирова5 нии аллергического заболевания.

Проведенные исследования показали, что чувствительность предлагаемого способа составляет 1 мг/л для лекарственных препаратов и 10 мг/л для аллергенов, при10 готовляемых из пищевых продуктов.

Таким образом, использование предлагаемого способа определения специфической сенсибилизации организма к аллергенам обеспечивает повышение точ15 ности определения на 29% за счет одновременной оценки клеточной и гуморальной реакции организма на исследуемый аллерген.

Формула изобретения 20 Способ определения специфической сенсибилизации организма к аллергенам путем определения торможения миграции лейкоцитов крови в капиллярах в присутствии аллергена, отличающийся тем, что,

25 с целью повышения точности определения, дополнительно исследуют надосадочную часть плазмы в капилляре в проходящем свете на темном фоне и при наличии торможения миграции и приципитации в надоса30 дочной жидкости диагностируют специфическую сенсибилизацию к исследуемому аллергену.

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии и может быть использовано для диагностики пищевой и лекарственной сенсибилизации. С целью повышения точности определения оценивают торможение миграции лейкоцитов крови в капиллярах в присутствии аллергена, дополнительно исследуют надосадочную часть плазмы в проходящем свете на темном фоне и при наличии преципитации в пробе с аллергеном диагностируют специфическую сенсибилизацию к исследуемому аллергену. 3 табл.

Аллергены

Торможение миграции лейко- цитов,%

Молоко

Гречневая крупа

Ячменная крупа

Рисовая крупа

Овсяная крупа

Кукурузная мука

Картофельный крахм

Пшеничная мука

Ржаная мука

Говядина

Свинина

Баранина

Мясо курицы

Т а б л и ц а 1

Преципитация

25

+++ +++ +++

35 35

+++ ++ ++

Частота выявляемое™ специфической сенсибилизации к аллергенам при различных способах обследования

Специфичность различных способов обследования

Продолжение табл.1

Таблиц а 2

ТаблицаЗ