Способ приготовления мазков-отпечатков лейкоцитов кожи Советский патент 1992 года по МПК G01N1/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и касается излучения миграции лейкоцитов

Целью изобретения является повышение выхода клеток и уменьшение гравматич- ности.

Способ осуществляют следующим образом.

На внутреннюю поверхность предплечья размером 0,,5 см втирают фотосенсибилизатор, содержащий эмульсионный крем и ме- токсален в соотношении 1:100. Через 30-60 мин (время, необходимое для фотосенсибилизации) производят облучение кожи в месте нанесения фотосенсибилизатора лазерным излучением с длиной волны 320- 400 нм (УФА-диапазон). В качестве источни- ка лазерного излучения может быть использован лазер ЛГИ-21 с длиной волны 337,1 нм и средней выходной мощностью 4 мВт. Площадь участка облучения составляет 0,03-0,06 см , доза облучения - не менее 15 Дж/см2.

Выбор дозы облучения осуществляют по результатам предварительного исследования. Через 8-9 ч на месте облучения начинает формироваться очаг асептической воспалительной реакции, что проявляется в виде возникновения участка эритемы. Через 46 48 ч на месте облучения возникает суб- эпидермальный пузырек с диаметром, соответствующим площади участка облучения. Пузырек заполняется тканевой жидкостью (экссудатом), в которую мигрируют лейкоциты. Непосредственно после образования пузырька (48 ч) или через заданный интервал времени (например, 72 ч) пузырек вскрывают стерильной иглой и из его содержимого готовят мазок-отпечаток на стерильное предметное стекло, предварительно обезжиренное в смеси Никифорова (см юрт/эфир в поопорции 1:1).

После высыхания при комнатной температуре мазок-отпечаток фиксируют в течение 3 мин 96° этиловым спиртом и окрашивают (например, по Романовскому), препарат просматривают под микроскопом с иммерсией и подсчитывают 50 -100 клеток

Пример. Доброволец 24 года. Диагноз: практически здоров В участок кожи на внутренней поверхности левого предплечья размерами 3,5 х 3,5 см внесен эмульсиони

С

««&

4 Ы СП

VI

со

Ю

ный крем, содержащий метоксален. Через 1 ч было проведено облучение двух участков кожи лазерным облучением с длиной волны 337,1 нм (лазер ЛГИ-21) с дозой по 15 Дж/см2. Кожа внутренней поверхности правого предплечья была обработана 3%- ной настойкой йода и спиртом, затем стерильным скальпелем произведена скарификация эпидермиса размером 0,5 х 0,5 см. Скарификат был покрыт стерильным предметным стеклом, которое было зафиксировано на руке пластырем.

Спустя 8 ч на месте лазерного облучения появилась эритема, а через 46 ч после облучения - два субэпидермальных пузырьках.

Мазки-отпечатки из радиационных пузырьков готовились: из одного - через 48 ч, из второго - через 72 ч после облучения. Мазки-отпечатки со скарификата готовились: первый - через б ч, второй - через 24 ч.

В мазке-отпечатке по Ребук через 6 ч определяют большое количество нитей фибрина и клеточного детрита. Лимфоцитов 2%, моноцитов 17%, гранулоцитов81%. Через 24 ч в мазке по Ребук отмечают высокую бактериальную обсемененность, что сделало невозможным подсчет качественного состава мазка.

В мазке-отпечатке, полученном из радиационного пузырька через 48 ч: лимфоциты 0%, моноциты 29%, гранулоциты 80%. В мазке-отпечатке через 72 ч: лимфоциты 3%, моноциты 61%, гранулоциты 36%. Клеточные элементы в мазках-отпечатках, полученных из радиальных пузырьков, сохраняют свои мембраны, детрит и бактериальная обсемененность отсутствуют.

П р и м е р 2. Больной 30 лет. Диагноз: псориаз, стадия прогрессирования.

В участок кожи размерами 3 х 3 см на внутренней поверхности левого предплечья нанесен эмульсионный крем, содержащий фотосенсибилизатор. Через 45 мин после фотосенсибилизации в пределах фотооен- сибилизированных участков было облучено два участка кожи диаметром 3 мм лазерным излучением с длиной волны 337,1 нм с дозой 10 Дж/см2.

На внутренней поверхности правого предплечья было выполнено Ребук-тестиро- вание по описанной методике.

Результаты исследования. В мазках по

Ребук: через 6 ч (I фаза АВР)лимфоциты 1 %,

моноциты 15%, гранулоциты 84%; через 24

ч (II АВР) лимфоциты 0%, моноциты 36%,

гранулоциты 64%.

В мазках-отпечатках из радиационного пузырька через 48 ч лимфоциты 0%, моно- циты 38%, гранулоциты 60%.

Способ позволяет значительно повысить выход лигирующих клеток, а также значительно упрощает анализ за счет снижения травматичности.

0

0

Формула изобретения Способ приготовления мазков-отпечат- коз лейкоцитов кожи путем ее предварительной обработки с последующим изготовлением мазка из мигрирующих клеток, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода клеток и уменьшения травматичности, мазок готовят из секрета субэпидермального пузырька, при этом обработку кожи проводят в течение 30-60 мин фотосенсибилизирующей смесью, содержащей метоксален и эмульсионный крем в соотношении 1:100, а субэпидермальный пузырек получают путем воздействия на кожу УФА-лазерным излучением дозой 15 Дж/см2.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии Целью является повышение выхода клеток и уменьшение rjja s магичности Цель достигается тем, чш IM кожу наносят фотосенсииилизирующую смесь, содержащую метоксзлен и эмульсионный крем в соотношении 1:100, а иссле довзнию подвергают содержимое субэпидермального пузырька, полученного путем воздействия на кожу УФА-лазерным излучением дозой 15 Дж/см . Способ позволяет значительно снизить травмзт11- ность исследования за счет исключения скарификации, а также получить большой выход клеток.