Способ дифференциальной диагностики реактивного и ювенильного ревматоидного артрита у детей Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности ревматологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики ювенильного ревматоидного и реактивного артритов у детей.

Цель изобретения - ранняя диагностика и повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим обра- - зом.

Для оценки влияния вольтарена на стимулированную митогеном фитогемагглюти- нином (ФГА) функциональную активность клеток периферической крови используют метод культивирования цельной крови в микроплатах. Для исследования используют культуральную среду следующего состава: среда 199 с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота и антибиотиков (пенициллина и стрептомицина по 100 ЕД/мл).

На 100 мл этого раствора добавляют 3% глютамина 1 мл, 7,5% гидрокарбоната натрия 2,5 мл, 10% хлористого кальция 0,07 мл, 40% глюкозы 0,25 мл. Гепаринизирован- ную венозную кровь (25-30 ед. гепарина на 1 мл крови) смешивают с 10%-ным желатином в отношении 5:1 и инкубируют при 37° в течение 30 мин. Лейковзвесь снимают, проводят подсчет общего числа лейкоцитов и лимфоцитов и разводят культуральной средой до концентрации лимфоцитов 130 тыс/мл. 0,15 мл этой суспензии вносят в каждую лунку полистиролового 96-луночно- го V-образного планшета для иммунологических реакций, добавляя дополнительно 10 млн аутологичных эритроцитов на лунку. В каждую лунку вносят митоген фитогемагг- лютинин в объеме 20 мкл, концентрация его составляет 40 мкг/мл. В половину культур

VI

СО

сл VJ

00

со

одновременно с митогеном вносят вольта- рен в концентрации 1 мкг/мл культуры. Для каждого больного ставят по 6 культур (3 - без препарата, 3 - в присутствии препарата). Затем культуры инкубируют при 37° в атмосфере абсолютной влажности с 5% СОа в течение 72 ч. За сутки до окончания инкубации Б.НОСЯТ радиоактивную метку (0,4 мкКи Н-тимидина на лунку). После окончания инкубации культуры снимают с по- мощью коллектора с осаждением и промывкой клеток на фильтрах, фильтры с исследуемым клеточным материалом высушивают, помещают в счетные флаконы со сцинтиллятором и просчитывают на сцин- тилляционном счетчике Ракбета (LKB, Швеция). Сцинтиллятор готовят следующим образом: на 1 л толуола берут 5 г 2,5-дифе- нилоксазола (ППО) и 100 мг 1,4-ди-2-(5-фе- нилоксазоллил)-бензола(ПОПОП). ПОПОИ предварительно смешивают со 100-200 мл толуола и в течение 20-30 мин греют на водяной бане под ватно-марлевой пробкой до полного растворения. Компоненты смешивают и сцинтиллятор выдерживают в темноте в течение 1-2 суток, после чего используют, внося по 5 мл на счетный флакон. Оценку функциональной активности лимфоцитов проводят по стимулированному митогеном фитогемагглютинином синтезу в ДНК лимфоцитами периферической крови, который учитывают по включению радиоактивной метки 3Н-тимидина в ДНК лимфоцитов и выражают числом импульсов в минуту. После получения результатов со счетчика вы- числяют среднее значение показателя включения метки для культур без вольтаре- на и в присутствии препарата. Оценку чувствительности лимфоцитов к вольтарену проводятлутем сравнения этих величин. За изменение функциональной активности лимфоцитов в присутствии вольтарена принимали только достоверное (р 0,05) увеличение или уменьшение показателей под влиянием вольтарена. Для этого вычисляли границы доверительного интервала для показателей функциональной активности лимфоцитов каждого больного с вероятностью Р 0,95 по методу определения доверительной зоны линейной регрессии. Если показа- тели функциональной активности лимфоцитов в присутствии вольтарена попадали в пределы вычисленного доверительного интервала, заключали, что вольтарен не оказывал значимого влияния на функциональную активность лимфоцитов, т.е. клетки были не чувствительны к вольтарену, При получении в культурах с препаратом показателей выше верхней границы доверительного интервала диагностируют ювенильный ревматоидный артрит, а при показателях функциональной активности лимфоцитов в присутствии вольтарена ниже нижней границы доверительного интервала - диагностируют реактивный артрит.

Пример. Больная Ж. 1975 г. рождения. Поступила в кардиоревматологическое отделение для обследования и лечения. Из анамнеза известно, что заболела 3 недели назад, когда после перенесенной ОРВИ у девочки появилась болезненность и припухлость правого коленного сустава. Амбула- торно получала лечение нестероидными противовоспалительными препаратами без положительного эффекта. В анамнезе у девочки сигмоидит. При поступлении на основании клинических признаков поражения суставов и данных анамнеза был поставлен диагноз реактивный артрит правого коленного сустава.

Проведено обследование по предлагаемому способу через 3 недели после начала заболевания.

Получены результаты: ФГА - стимулированная активность лимфоцитов по включению радиоактивной метки 1276 имп/мин при доверительном интервале от 1039 до 1513 имп/мин. ФГА-стимулированная активность лимфоцитов в присутствии вольтарена составила 2149 имп/мин. Выявлено достоверное повышение функциональной активности лимфоцитов у больной под влиянием вольтарена. Таким образом, вольтарен оказывает стимулирующее действие, значит, диагноз по предлагаемому способу - ювенильный ревматоидный артрит.

Проведена реакция Ваалер-Розе.

Результат: жидкость осталась гомогенной и мутной, агглютинация не произошла, РФ не обнаружен, что соответствует диагнозу ревматоидного артрита.

В качестве контроля использовали комплексное обследование, включающее совокупность клинических, рентгенологических и лабораторных признаков. По совокупности этих признаков через 4 месяца с начала заболевания девочке поставлен диагноз ювенильного ревматоидного артрита.

Таким образом, диагноз, поставленный по предлагаемому способу, совпал с окончательным контрольным диагнозом ювенильного ревматоидного артрита.

П р и м е р 2, Больная И. 1975 г. рождения. Диагноз при поступлении: реактивный артрит. Заболела 7 дней назад, когда после перенесенной ОРВИ появилась отечность и болезненность левого локтевого сустава, ограничение подвижности в суставе, местное повышение температуры. Лабораторная активность отсутствует. Наследственность благоприятная. Ренгтенологические признаки поражения сустава отсутствуют.

Проведено обследование по предлагаемому способу через 10 дней после начала заболевания. Получены следующие результаты: функциональная активность лимфоцитов периферической крови по Ф ГА-стимулированнрму синтезу ДН К составила 2049 имп/мин при доверительном ин- тервале от 1457-2641. Функциональная активность в присутствии вольтарена-1047 имп/мин, т.е. выявлено ингибирующее действие вольтарена. Поданным обследования с помощью предлагаемого способа установ- лен диагноз реактивного артрита.

Кроме того, получили отсутствие РФ по реакции Баалер-Розе и латекс-тексту, т.е. по данным обследования диагноз: реактивный артрит.

Контролем служила постановка диагноза реактивного артрита по совокупности клинико-лабораторных и рентгенологических данных и эффекту антибактериального лечения через 1 месяц после поступления в стационар.

Таким образом, выявлено совпадение диагнозов по данным предлагаемого способа с контролем.

Использование предлагаемого способа в медицинской практике обеспечивает повышение точности дифференциальной диагностики артритов у детей на 27% и возможность ранней постановки диагноза за счет возможности оценки изменения на клеточном уровне Т-звена иммуногенеза в условиях блокады синтеза медиаторов воспаления.

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики реактивного и ювенильного ревматоидного артрита у детей путем иммунологического исследования крови, о т- личающийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет ранней диагностики, определяют митоген-стимулированную активность лимфоцитов в пробах крови до и после внесения вольтарена и при снижении этого показателя относительно исходного уровня диагностируют реактивный артрит, а при увеличении - ювенильный ревматоидный артрит.

Изобретение относится к медицине, в частности ревматологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики ювенильного ревматоидного и реактивного артритов у детей. Для повышения точности диагностики и ранней постановки диагноза иследуют иммунологические показатели периферической крови: определяют митогенстимулированную активность лимфоцитов, вносят вольтарен в дозе 1 мкг/мл и определяют митоген - стимулированную активность лимфоцитов в присутствии воль- тарена. При увеличении активности лимфоцитов в присутствии вольтарена по сравнению с исходной диагностируют юве- нильный ревматоидный артрит, а при уменьшении активности - реактивный артрит. Применение способа в практике здравоохранения позволит повысить точность дифференциальной диагностики артритов у детей на 27% и обеспечит возможность постановки диагноза в более ранние сроки. сл