Способ размножения растений IN VIтRо Советский патент 1992 года по МПК A01H4/00 

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к области культуры изолированных тканей и органов, и может быть использовано для ускоренного размножения посадочного материала.

Известны способы размножения растений в жидкой питательной среде в состоянии вращения на аппаратах роллерного типа. При этом, в качестве вторичных эксплантов используют развившиеся из пазушных меристем побеги или почки.

Однако данные способы не позволяют увеличить коэффициент размножения растений до требуемых величин.

Наиболее близким к предлагаемому является способ размножения плодовых и ягодных культур, согласно которому проводят поверхностную стерилизацию исходного материала, изоляцию эксплантов, культивирование их на периодически обновляемых искусственных питательных средах до образования конгломератов почек и побегов, разделение последних на субъединицы, последующее субкультивирование и укоренение и адаптация к нестерильным условиям. Однако, в .качестве вторичных зксплантов в этом способе используют только развившиеся побеги и почки. Многочисленные крупные листья при пересадках отсекают и выбрасывают, что приводит к непроизводительным потерям посадочного материала.

Целью изобретения является увеличение коэффициента размножения растений.

Предлагаемый способ позволяет увеличить коэффициент размножения в 6-7 раз.

V| СО 00

д

Os Ю

Предлагаемый способ отличается от известного тем, что после развития конгломератов почек и побегов, производят отсечение развившихся листьев, которые помещают в культивационные сосуды с непрерывно перемещающейся жидкой питательной средой и культивируют до образования адвентивных почек или побегов. Последние могут быть использованы для дальнейшего культивирования или непосредственного укоренения.

Изобретение осуществляется следующим образом.

Пример 1. Развившиеся в процессе клонального микроразмножения листья нарцисса отсекают и помещают в культу- ральные сосуды с жидкой питательной средой. В качестве питательной среды используют среду, предназначенную для размножения нарцисса следующего состава, мг/л: NH4N03 1650. КЫОз 1900, CaCfc 2Н20 440; MgSCU 7НаО 370, Kl-fePCb 170, НзВОз 6.2, MnSCM 4H20 22,3, ZnSCM 7H20 8,6. Kl 0,83. NaMoCM 2H200,25,CuS04 5HaO 0,025, CoCIa 6H20 0,025, тиамин 0,5. пири- доксин 0,5, никотиновая кислота 0,5, аскорбиновая кислота 1,0, сахароза 30000, б-бензиламинопурин 10,0, а-нафтилуксус- ная кислота 1,0; FeSCM 55,6, ЕДТА Na2 74,6. Поскольку питательная среда использовалась в жидком виде, концентрацию хелата железа для предотвращения развития хлороза увеличивали в два раза. Сосуды с экс- плантами, для обеспечения непрерывного омывания листьев питательной средой, устанавливали на аппарат роллерного типа, где культивировали 1,5-2 месяца. Результаты по индукции адвентивных образований на листьях нарцисса приведены в табл. 1.

Сравнение между агаризованной питательной средой, жидкой средой и условиями культивирования (стационарные и обеспечивающие непрерывное смывание листьев) показывает статистически достоверную разницу в частоте индукции адвентивных образований, причем наибольший процент

регенерируется при использовании жидкой питательной среды в состоянии вращения. Пример 2. Развившиеся в процессе размножения In vitro листья земляники (фаза пролиферации) отрезают и помещают на питательные среды разных видов (жидкая и агаризованная). Появление адвентивных образований фиксировали спустя месяц после культивирования, которое осуществляли как в стационарных условиях, так и на аппарате роллерного типа. В качестве питательной среды использовали среду, предназначенную для размножения земляники следующего состава, мг/л: NhNNOs 1650,

КМОз 1900, CaCfc 2HaO 440, MgSC-4 7H20 370, КН2Р04 170. НзВОз 6,2, MnS04 4H20 22,3. ZnSC-4 7H20 8,6, Kl 0,83. NaMoC-4 2H20 0,25, FeSC-4 27,8. ЕДТА Na2 37,3. тиамин 0.5, пиридоксин 0,5, никотиновая кислота 0,5,

аскорбиновая кислота 1,0, сахароза 30000, б-бензиламинопурин 1,0.

Результаты по индукций адвентивных почек на листьях земляники приведены в табл. 2. Как видно из полученных результатов.

оптимальным для образования адвентивных почек является вариант с использованием жидкой питательной среды в состоянии вращения. Коэффициент размножения в этом варианте, по сравнению с прототипом,

увеличивался у нарцисса в 7,2 раза, у земляники в 6,8 раз.

Формула изобретения Способ размножения растений In vitro, включающий изоляцию эксплантов, культивирование их на агаризованной питательной среде до образования конгломератов почек и побегов, разделение их на отдельные субъединицы и последующее культивирование их на питательной среде до

образования растений-регенерантов, отличающийся тем, что, с целью увеличения коэффициента размножения, после образования конгломерата почек и побегов от них отделяют листья и помещают их в культивационный сосуд с непрерывно перемешивающейся жидкой питательной средой и культивируют до образования адвентивных почек.

Таблица

Использование: сельское хозяйство биотехнология для ускоренного размножения посадочного материала. Сущность изобретения: размножение растений в культуре ткани осуществляют путем культивирования эксплантов на агармаованной питательной среде до образования конгломератов почек и побегов, после чего от них отделяют листья, помещают их в культивационный сосуд с жидкой питательной средой и культивируют до получения адвентивных почек при постоянном перемешивании среды. 2 табл.

Таблица2