Способ определения повреждения отделов нефрона Советский патент 1992 года по МПК G01N33/573 

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии, и может быть использовано для определения повреждения отделов нефрона.

Целью изобретения является повышение информативности способа за счет возможности дифференциального определения повреждения в дистальном и проксимальном отделах нефрона

Способ осуществляют следующим образом.

Криостатный срез биопсийного материала почки инкубируют в среде для выявления активности сукцинатдегидрогеназы (инкубационную среду готовят непосредственно пере.д опытом, смешивая равные обь- емы 0,2 М фосфатного буфера с рН-7,6 и 0,2 М раствора сукцината натрия к 10 мл данного раствора добавляют 10 мл раствора 10 мг нитросинего тетразолия (НСТ) в воде). В местах высокой активности сукцинатдегидрогеназы выпадают фиолетовые гранулы гидразинтетразолия Затем эти срезы после

промывки в дистиллированной воде инкубируют в среде для выявления активности щелочной фосфатазы (инкубационную среду готовят также непосредственно перед опытом, для чего растворяют 5 мг неф- тол - As - BI - фосфата в 0,25 мл диме- тилформамида, добавляют 25 мл дис- тилированной воды и 25 мл 0,2 М трис-НС буфера с рН 8,7. Сюда же прибавляют 30 мг прочного красного TR). В местах высокой активности щелочной фосфатазы выпадают красные гранулы красителя. Таким образом, вокруг гранул щелочной фосфатазы как маркера проксимального отдела нефрона выявляется сукцинатдегидрогеназа, по снижению активности которой определяют повреждение проксимального канальца, а при изолированно выявляемом снижении активности сукцинатдегидрогеназы определяют повреждение дистального отдела нефрона. Пример 1. Больной П., поступил с жалобами на боли в области поясницы, общую слабость. В анамнезе: перенес острый гломурулонефрит. Объективно: артериаль(Л

t

VI

.N

о VI ю

ное даеленме 140/90 мм рт.ст., анемия (эритроциты 3,8 1012/л, гемоглобин 130 г/л), протеинурия 1,12 r/сут, эритроцитурия 6,5 106/сут, цияиндрурия 7,3 10 /сут. Симптом Ластернацкого положительный. При гистологическом исследовании био- псийного материала подтвержден диагноз хронического гломерулонефрита (мембра- нозный тип).

При исследовании биопсийного материала почки на СДГ идентифицированы проксимальные и дистальные отделы не- фрона 60 из 100 наблюдаемых фрагментов почечных канальцев, а при использовании предлагаемого способа 100 из 100. В результате достигается поставленная цель.

Пример 2. Больная С, поступила с жалобами на общую слабость, головную боль. В анамнезе: перенесла острый гломе- рулонефрит. Объективно: артериальное давление 140/80 мм рт.ст,, анемия (эритроциты 3.9 1012/л, гемоглобин 126 г/л), протеинурия 1,33 г/сут, эритроцитурия 7,2х х106/сут, цилиндрурия 8,2 104/сут, Симптом Пастернацкого отрицательный. При гистологическом исследовании биопсийного материала почки подтвержден диагноз хронического гломерулонефрита (мембраноз- ный тип).

При исследовании биопсийного материала почки на СДГ идентифицированы проксимальные и дистальные отделы не- фрона 60 из 100 наблюдаемых фрагментов почечных канальцев, а при использовании заявленного способа 100 из 100. В результате достигается поставленная цель.

Пример 3. Больная Ю. поступила с жалобами на общую слабость, головную боль, боль в области поясницы. В анамнезе: острый гломерулонефрит, Объективно: артериальное давление 150/90 мм рт.ст.. анемия (эритроциты 3,6 1012/л, гемоглобин

130 г/л), протеинурия 0,98 г/сут, эритроцитурия 7,1 106/сут, цилиндрурия 4,8 104/сут. Симптом Пастернацкого положительный. При гистологическом исследовании биопсийного материала почки подтвержден ди- агноз хронического гломерулонефрита (мембранозный тип).

При исследовании биопсийного материала почти на СДГ идентифицированы проксимальные и дистальные отделы нефрона 60 из 100 наблюдаемых фрагментов почечных канальцев, а при использовании заявленного способа 100 из 100. В результате достигается поставленная цель.

Всего было обследовано предложенным способом 90 лабораторных животных (крыс) с сулемовой и цис-платиновой нефро- патией и б больных с гломерулонефритом, у которых с точностью 100% были определены повреждения отделов нефрона.

ъ

Формула изобретения Способ определения повреждения отделов нефрона путем гистоэнзимохимического исследования биопсийного материала, включающий оценку активности щелочной фосфатазы по числу гранул маркера, с последующим определением повреждения в сравнении с контролем, о т л ичающийся тем, что, с целью повышения информативности способа за счет возможности дифференциального определения повреждения в дистальном и проксимальном отделах нефрона, дополнительно проводят

оценку активности сукцинатдегидрогеназы по числу гранул формазана и при снижении количества гранул формазана относительно контроля определяют повреждения в дистальном участке нефрона, а при наличии

гранул маркера щелочной фосфатазы и снижении числа гранул формазана - повреждение проксимального отдела нефрона.

Использование: в области нефрологии Сущность изобретения: повреждение отделов нефрона определяют по снижению активности сукцинатдегидрогеназы в сочетании с определением активности щелочной фосфатазы на криостатных средах биопсийного материала почки. Способ позволяет проводить дифференциальное определение повреждения в дистальном и проксимальном отделах нефрона.