Способ диагностики деструкции ткани мочевыводящей системы Советский патент 1984 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, в частности к способам диагностики деструкции тканей мочевыводящих путей у детей.

Известен способ диагностики деструкции ткани мочевыводящей системы путем исследования мочи.

Указанный способ диагностики основан на определении активности эндогенных фосфолипаз А и С в сыворотке крови и моче при помощи реакции экстрактов с яично-агарозной пластинкой с образованием различных классов фосфолипидов. В норме (у здоровых детей) активность фосфолипазы С не обнаруживается, имеется незначительная активность фосфолипазы А. Повыщение активности фосфолипазы С в моче позволяет диагностировать активный деструктивный процесс в мочевыводящих путях.

Способ является безопасным для больных, позволяет диагностировать мембранодеструктивный процесс в мочевыводящих путях, что является важным для уточнения характера заболевания I.

Однако, выявляя активный деструктивный процесс в тканях мочевыводящих путей, способ не позволяет уточнить локализацию воспалительно-деструктивного процесса в мочевыводящем тракте (гломерулярный или тубулярный отдел нефрона, чащечно-лоханочная система, мочевой пузырь). Способ не позволяет также установить механизмы (причины) развития деструктивного процесса в тканях мочевыводящих путей, что затрудняет выбор наиболее рационального метода терапевтического воздействия.

При значительном бактериальном загрязнении мочи, что наблюдается при некоторых заболеваниях мочевыводящего тракта, трудно исключить присутствие экзогенной (бактериальной) фосфолипазы А и С в моче, что может приводить к ошибкам в диагностике деструктивного процесса.

Цель изобретения - установление деструкции в кортикальном слое почечной ткани.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу диагностики деструкции ткани мочевыводящей системы путем исследования мочи определяют содержание лизофосфатидилхолина и гидроперекисей липидов, активность трансамидиназы и щелочной фосфатазы, и при появлении в моче лизофосфатидилхолина и трансамидиназы, активности щелочной фосфатазы от 1,5 до 37,5 нмоль/мл/мин и содержании гидроперекисей липидов от 1,08 до 4,86 нмоль/сут диагностируют деструкцию в почечной ткани в кортикальном слое.

Способ осуществляют следующим образом.

Мочу, взятую из суточного количества, центрифугируют для удаления клеток мочевого осадка при 3000 об/мин 15 мин. Содержание лизофосфатидилхолина в моче определяют методом тонкослойной хроматографии на силикагеле. Липиды экстрагируются из J 20 мл мочи смесью хлороформ-метанол. Затем 0,2 мл экстракта подвергают восходящей хроматографии в системе растворителей: хлороформ-метанол-аммиак-вода (в соотнощении 30:8,8:1,0:0,4). После хроматографии пластины проявляют в парах

йода. Пятно лизофосфатидилхолина элюируют и пробирку помещают на песочную баню для перевода органического фосфора в неорганический. Содержание фосфора в пробе определяют по реакции с малахитовым

5 зеленым путем фотометрии комплекса при длине волны 650 нм.

Расчет содержания лизофосфатидилхолина в моче проводят по формуле:

Х ах 0,016 XD, где X -содержание лизофосфатидилхолина

0в моче в мкмоль/сут;

( - содержание фосфора в пробе, найденное по калибровочному графику; 0,016 - коэффициент пересчета в мкмоль; D - суточный диурез в мл.

5 Определение активности щелочной фосфатазы в моче производят оптимизированным методом.

Определение активности трансамидиназы проводят следующим образом. К 1 м-л буферного раствора с субстратом (0,1 М фосфат0 ный буфер с рН 7,4, содержащий 17-10 М Л-аргинина и 0,114 М глицина) добавляют 0,5 мл мочи. Смесь инкубируют 120 мин при комнатной температуре. Затем добавляют I мл раствора нингидрина (2,5/о-ный раствор нингидрина в метилцеллюлозе) и 3 мл, ледяной уксусной кислоты. Смесь инкубируют 60 мин в кипящей водяной бане. Охлаждают при комнатной температуре и определяют оптическую плотность раствора при длине волны 546 нм.

0 Расчет активности фермента производят по формуле:

У (Eon Екон) 5

18 10-5.120 0,5

где X - активность трансамидиназы в нмоль/мл/мин;

ЕОП - экстинция опыта;

экстинция контроля; конечный объем реакционной смеси в мл;

18-10 - коэффициент молярной экстин0ции раствора орнитина в

нмоль/см ;

120 - время инкубации в мин; 0,5 - объем мочи.

Содержание гидроперекисей липидов в 5 моче определяют методом амперометрического титрования.

Липиды экстрагируют из 20 мл мочи смесью хлороформ-метанол. Липидный экстракт инкубируется с 50 мг йодистого калия в темноте 1 ч. Еылеливштся под влиянием перекисей липидов свободный йод связывают добавлением 1 мл 0.0001 н раствора тиосульфата натрия, избыток которого оттитровывают амперометрически 0,0001 н раствором йодноватокислого в ячейке полярографа. (

Расчет содержания гидроперекисей липидов производят по формуле

Х 4,055 X А XD X 10Лизофосфатидилхолин, мкмоль/сут. Щелочная фосфатаза, нмоль/мл/мин Трансамидиназа,нмоль/мл/.ин

Гидроперекись липидов, нмоль/сут

Биохимические показатели мочи у здоровых лиц (X ± м) п 20.

У здоровых лиц отмечается лишь незначительная активность щелочной фосфатазы в моче и очень низкий уровень экскреции перекисей липидов с мочой. При появлении в моче лизофосфатидилхолина, повышении активности щелочной фосфатазы выше 1,5 нмоль/мл/мин, появлении трансамидиназной активности мочи и увеличении экскреции с мочой гидроперекисей липидов выше 1,0 нмоль/сут диагностируют активный деструктивный процесс.в почках, преимущественно в проксимальном отделе нефрона, обусловленный активацией процессов свободнорадикального окисления липидов почечных цитомембран.

Пример 1. Больной П., 14 лет. Поступил в клинику с жалобами на отеки, слабость, изменения в анализах мочи (протеинурия до 2-4%). Болен в течение 10 лет, обострения почечного процесса 2-3 раза в году. В клинической картине заболевания доминирует выраженный отечный синдром, значительная протеинурия. Учитывая длительность заболевания, отсутствие эффекта от проводимой терапии, с целью диагностики развития деструктивного процесса в почках проведены специальные биохимические исследования мочи: содержание лизофосфатидилхолина в моче 0,74 мкмоль/сут, активность щелочной фосфатазы 6,90 нмоль/мл/мин,.трансамидиназы 2,77 нмоль/мл/мин, содержащие гидроперекисей липидов в моче - 1,82 нмоль/сут На основании клинической картины заболевания и результатов биохимических исследований мочи диагностирован активный деструктивный процесс (повышена экскреция с мочей лизофосфатидилхолина), преимущественно в проксимальном отделе нефрона (высокая активность щелочной фосфатагде X - содержание гидроперекисей липидов в моче в нмоль/сут; А - разница (мл) раствора йодноватокислого калия, пошедшего на титрование контроля и опыта; 4,055 - расчетный коэффициент для пересчета в нмоль; D - суточный диурез в мл. Контрольные (нормативные) показатели содержания продуктов перекисного окисления, мембранолиза и ферментативной активности мочи следующие: .

Не определяется

М2±0,29

Не определяется

0,39±0,0

зы, трансамидиназы) в результате активизации процессов свободно-радикального окисления липидов (повышена экскреция с мочой гидроперекисей липидов).. Проведенное в последующем прижизненное морфологическое исследование почечной ткани обнаружило и подтвердило изменения в гломерулярном и тубулярном отделе нефрона, с преимущественным поражением эпителиальных клеток проксимального канальца в виде дегенеративно-деструктивных изменений, что свидетельствует о достоверности полученных данных.

Пример 2. Больная М. 12 лет. Больна в течение 3 лет. В клинике доминирует незначительный отечный синдром, умеренная протеинурия (до 2 г/сут), незначительная гематурия. Обострения процесса 1 раз в год. С целью диагностики возможного деструктивного процесса в почках проведены специальные биохимические исследования мочи. Получены следующие результаты: содержание лизофосфатидилхолина 1,30 мкмоль/сут, активность щелочной фосфатазы 37,5 нмоль/ /мл/мин, трансамидиназы - 6,75 нмоль/мл/ /мин, .экскреция гидроперекисей липидов

4,86 нмоль/сут. В результате проведенных исследований диагностирован активный деструктивный процесс (значительно увеличена экскреция с мочой лизофосфатидилхолина), преимущественно в проксимальном отделе нефрона (высокая акг ъноСль щелочной фосфатазы, трансамидийазы) в результате активизации процессов свободно-радикального окисления липидов (значительно повышена экскреция с мочЬй гидроперекисей липидов). Проведенное в последующем прижизненное морфологическое исследование почечной ткани обнаружило мембранозный тип гломерулонефрита с изменением базальных мембран капилляров клубочка, с признакаs

ми дистрофии эпителия проксимального отдела нефрона (деструкции кортикального слоя почки).

Таким образом, клинические примеры и результаты морфологического исследования почечной ткани свидетельствуют о том, что использование предлагаемого способа диагностики деструктивного процесса в почечной ткани позволяет с высокой степенью достоверности диагностировать деструкцию почечной ткани в кортикальном слое, даже при

18352

незначительных клинических проявлениях заболевания определить локализацию и выяснить механизмы деструкции. Выяснение локализации деструктивного процесса и механизмов деструкции необходимо для уточнения характера патологического процесса в почках, что расширяет диагностические возможности способа и является основанием для проведения целенаправленных терапевтических мероприятий с использованием препаратов с антиоксидантным и мембранопротекторным фармакологическим эффектом.

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДЕСТРУКЦИИ ТКАНИ МОЧЕВЫВОДЯЩЕЙ СИСТЕМЫ путем исследования мочи, отличающийся тем, что, с целью установления деструкции в кортикальном слое почечной ткани, определяют содержание лизофосфатидилхолина и гидроперекисей липидов, активность трансамидиназы и щелочной фосфатазы, и при появлении в моче лизофосфатидилхолина и трансамидиназы, активности щелочной фосфатазы от 1,5 до 37,5 нмоль/ /мл/мин и содержании гидроперекисей липидов от 1,08 до 4,86 нмоль/сут диагностируют деструкции почечной ткани в кортикальном слое.