Способ получения белковой основы микробиологических питательных сред Советский патент 1992 года по МПК C12N1/20 C12N1/20 C12R1/01 

Изобретение относится к микробиологии и касается способа получения белковой основа питательных сред для культивирования бактерий, в частности флавобактерий, биомасса которых может быть использована в качестве корма для инфузорий, которые используются для кормления личинок рыб на ранних стадиях развития.

Известны микробиологические питательные среды на мясной основе: мясная вода, мясопептонный бульон, триптический перевар Хоттингера и другие

Для приготовления мясной воды парную говядину или конину освобождают от костей, жира, сухожилий, пропускают через мясорубку, полученный мясной фарш заливают водой и кипятят После кипячения мясную воду остуживают для застывания жира, фильтруют до полной прозрачности, разливают в бутылки, и стерилизируют. На основе мясной воды готовят мясопептонный бульон, добавляя к 1 л мясной воды 1 % сухого пептона и 0,5% хлорида натрия, устанавливают необходимую реакцию, кипятят, фильтруют, устанавливают гидрокарбонатом или гидроксидом натрия требуемую реакцию и стерилизуют.

Для приготовления триптического перевода Хоттингера так же, как и при приготовлении мясной воды, используют высококачественное говяжье мясо. Для этого его освобождают от костей, жира и сухожилий, нарезают мелкими кусочками, получают мясной фарш. Отдельно получают мясной бульон, который смешивают с фаршем. Смесь сливают в бутыль, доводят до рН 7,8-8,0, прибавляют обработанную на мясорубке поджелудочную железу в количестве

М

4

И

00 О

10% , тщательно перемешивают, добавляют хлороформ из расчета 10-30 мл на каждый литр и ставят в термостат при 37°С на 7-10 сут. По истечении этого времени перевар фильтруют, стерилизуют

Недостатками таких сред является их высокая стоимость, поскольку белковой основой для их приготовления является остродефицитный пищевой продукт - мясо сельскохозяйственных животных.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения белковой основы микробиологических питательных сред путем автолиза внутренних органов домашних птиц при рН 8,6-9,0, в котором после очистки целевого продукта устанавливают рН 6,8-7,2. Для осуществления способа к внутренним органам домашних птиц, измельченным на мясорубке, добавляют воду, раствор гидроксида натрия, хлороформ. Баллоны с содержимым устанавливают в термостатированной комнате, периодически перемешивают, коррегируют рН 8,6-9,0. После семидневного выстаивания надоса- дочную жидкость декантируют, кипятят, до- бавляют раствор сульфата алюминия, суспензию гидроксида кальция, фильтруют и устанавливают рН 6,8-7,2.

Недостатком данного способа является сложность процесса, так как предусматривается многоступенчатое проведение автолиза сырья, требуется соблюдение асептических условий с применением токсического вещества - хлороформа, включение многих последовательных операций (декантации, кипячения, фильтрования, подогрева, нейтрализации ионов кальция), а также высокая стоимость целевого продукта.

Цель изобретения - упрощение процесса и удешевление продукта.

Поставленная цель достигается тем, что в способе получения белковой основы питательных сред, включающем подщелачива- ние белкового бульона, его кипячение с последующим охлаждением, добавление сульфата алюминия, отделение осадка и нейтрализацию бульона, в качестве белкового бульона используют обварочный бульон мясокомбинатов, полученный из субпродуктов второй категории, который перед подщелачиванием охлаждают до 5°С и освобождают от твердых частиц жира, подщелачивание проводят до рН 12,0-13,0, а кипячение - в течение 15-120 мин,

В качестве субпродуктов второй категории используют легкие, рубец, хвосты, сычуг, трахеи, уши, губы, желудки свиней и др. Состав полученных бульонов зависит От сортамента закладываемых субпродуктов.

В них содержится, белка от 2,0 до 6,54 г/л; жира до 150 г/л; содержание сухого остатка до 30 г/л.

Обварочные бульоны мясокомбинатов

(БМ) представляют собой мутную жидкость с коэффициентом светопропускания, определенном по нефелометру, составляющим 1,6-2,0; цвета от молочно-белого до интенсивно желтого с характерным мясным запа0 хом. Выдерживание в бытовом холодильнике (при 5°С в течение 18-20 ч) вызывает затвердевание основного количества (до 98%), содержащихся в таких бульонах, который всплывает на поверх5 ность бульонов. Фильтрование охлажденного БМ приводит к извлечению до 98% жиров, но существенно не уменьшает их мутности.

Микроскопические исследования ука0 зывают на наличие в БМ стойкой фазово- дисперсной коллоидной системы, образованной мельчайшими капельками эмульгированных жиров вместе с компонентами, входившими в состав животных тка5 ней субпродуктов и перешедших в коллоидное состояние при их варке и после охлаждения.

Подщелачивание до рН 12,0-13,0 с последующим кипячением в течение 15-120

0 мин разрушает коллоидную систему, так как при этом происходит омыление жиров с образованием нерастворимых в воде натриевых и кальциевых солей жирных кислот. Более полное осветление бульона имеет ме5 сто при обработке сульфатом алюминия, при этом последний предпочтительно вводить в бульон, охлажденный до 40-60°С. Количество сульфата алюминия в бульоне должно составлять 2,5-8,5 г/л.

0 П р и м е р 1. 500 мл бульона, полученного в процессе варки субпродуктов второй категории (хвосты, легкие, мясная обрезь), с содержанием белка по Лоури 1 г/л и мутностью 1,16 (по нефелометру) охлаждают до

5 5°С, удаляют избыток жира декантацией жидкой фазы (содержание остаточных жиров 0,3% по бутирометру), добавляют сухой гидроксид натрия до рН 12,0 и кипятят при перемешивании 15 мин. Полученный рас0 твор охлаждают до 40°С, прибавляют раствор сульфата алюминия до конечной концентрации 2,5 г/л. Смесь фильтруют через бумажный фильтр красная лента, не допуская охлаждения, устанавливают рН

5 6,8 (при выпадении осадка его удаляют фильтрованием), разливают в емкости и стерилизуют при 1,0 эти в течение 30 мин. В дальнейшем используют в качестве белковой основы для приготовления жидких и плотных питательных сред. Белковая основа представляет собой Тчр о з рэчную жидкость светло-желтого цвета следующего состава:

Аминный азот, мг%508

Остаточные пептиды, %0,40

Сухие вещества, %4,00

Фосфаты, мг%0,30

Цветность0,10

Прозрачность0,04

ИндолНе обнаружен

Пример 2. Способ осуществляют аналогично примеру 1, но щелочную обработку бульона (содержание белка по Лоури 3 г/л, остаточных жиров 0,4%, мутность 1,18) проводят при добавлении сухого гид- роксида натрия до рН 12,5, кипятят при перемешивании 60 мин, охлаждают до 50°С, прибавляют раствор сульфата алюминия до конечной концентрации 5,0 г/л и устанавливают рН 7,0, осадок удаляют фильтрованием. Получают белковую основу питательных сред следующего состава:

Аминный азот, мг%700

Остаточные пептиды, %0,45

Сухие вещества, %4,50

Фосфаты, мг%0,32

Цветность0,15

Прозрачность0,08

ИндолНе обнаружен

Пример 3. Способ осуществляют аналогично примеру 1, но щелочную обработку бульона (содержание белка по Лоури 6 г/л, остаточных липидов 0,5%, мутность 1,20) проводят при добавлении сухого гид- роксида натрия до рН 13,0, кипятят при перемешивании в течение 120 мин, охлаждают до 60°С, прибавляют раствор сульфата алюминия до конечной концентрации 8,5 г/л и устанавливают рН 7,2, осадок удаляют фильтрованием. Получают белковую основу питательных сред следующего состава:

Аминный азот, мг%820

Остаточные пептиды, %0,50

Сухие вещества, %5,00

Фосфаты, мг%0,35

Цветность0,17

Прозрачность0,10

ИндолНе обнаружен

Аминокислотный состав бульона из субпродуктов второй категории до и после его кипячения при рН 12,0-13,0 и температуре 100°С в течение 15-120 мин и добавлением сульфата алюминия 2,5-8,5 г/л приведен в таблице,

Испытание ростовых свойств бульона в сравнении с контролем (мясопептонный бульон - МПБ) проводят на бактериях Staphylococcus aureus 209 и Flavobacterium aquatile ДХТИ-84 путем посева по 0,1 мл

исходной суспензии бактерий с содержанием последних 1U клеток/мл (по стандарту мутности с проверкой по методу Коха) в 9,9 мл контрольных и опытных сред. Для испы- 5 тания роста Flavobacterium aquatile ДХТИ- 84 в контрольные и опытные среды вводят 2% глюкозы Инкубацию проводят в термостате в течение трех суток при 37°С для стафилококков и при 24°С для флавобакте0 рий. По истечении времени инкубации проводят количественный учет жизнеспособных бактерий по методу Коха.

Рост культур стафилококков и флаво- бактерий на испытуемом бульоне составля5 ет соответственно1 для стафилококков 1,0-1,4«108 кл/мл; дляфлавобактерий 4,0-4,5 108 кл/мл, на контрольной среде: для стафилококков 1,0-1,1«109 кл/мл; для флавобакте- рий 4,2-4,6.108 кл/мл.

0 Таким образом, результаты испытаний бульона показывают, что он может служить белковой основой для приготовления питательных сред для бактерий.

Осуществление предлагаемого способа

5 в указанном режиме за небольшой промежуток времени (15-120 мин) позволяет получить бульон, удовлетворяющий потребность культивируемых бактерий в источнике аминного азота. Выход за нижний

0 предел указанных параметров (15-120 мин, рН 12,0-13,0) приводит к уменьшению содержания аминного азота в бульоне. Верхний предел указанных параметров диктуется необходимостью за короткий

5 промежуток времени получить по лноцен- ную по амин ному азоту питательную среду.

Формула изобретения

1 Способ получения белковой основы

0 микробиологических питательных сред, включающий подщелачивание белкового бульона, его кипячение с последующим охлаждением, добавление сульфата алюминия, отделение осадка и нейтрализацию

5 бульона, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и удешевления продукта, в качестве белкового бульона используют обварочный бульон мясокомбинатов, полученный из субпродуктов второй

0 категории, перед подщелачиванием его охлаждают до 5°С и освобождают от твердых частиц жира, подщелачивание проводят до рН 12,0-13,0, а кипячение - в-течение 15-120 мин.

5 2. Способ по п.1,отличающийся тем, что сульфат алюминия вводят в бульон с температурой 40-60°С.

3. Способ по пп.1 и2,отличающий- с я тем, что сульфат алюминия вводят в бульон в количестве 2,5-8,5 г/л.

Аминокислотный состав бульена до и после обработки

Изобретение относится к микробиологии и касается способа получения белковой основы микробиологических питательных сред, в частности флавобактерий, биомасса которых может быть использована в качестве корма для инфузорий, которые используются для кормления личинок рыб на ранних стадиях развития. Цель изобретения -упрощение процесса и удешевление продукта В качестве исходного сырья используют обварочный бульон мясокомбинатов, полученный из субпродуктов второй категории (легких, хвостов, рубцов, желудков, сычуга, трахеи, ушей, губ, мелкой мясной обрези и др). Обварочный бульон охлаждают до 5°С, освобождают его от твердых частиц жира, затем подщелачивают до рН 12,0-13,0, кипятят в течение 15-120 мин, охлаждают предпочтительно до 40-60°С, вводят сульфат алюминия предпочтительно в количестве 2,5-8,5 г/л, отделяют осадок, а бульон нейтрализуют. 2 з.п. ф-лы, 1 табл. (Л С