Штамм энтеровируса свиней для контроля иммуногенности вакцины против болезни Тешена свиней Советский патент 1992 года по МПК C12N7/00 

ы

Ё

Использование: вирусология, ветеринария. Сущность изобретения: штамм энтеро- вирусов свиней, характеризующийся стабильной вирулентностью для поросят, который может быть использован для контроля им- муногенности вакцины против болезни Тешена свиней. Штамм Черниговский-2372 вируса болезни Тешена свиней обладает высокой вирулентностью для свиней в возрасте до 1 года: вызывает 100%-ную гибель на 5-20-е сутки после интрацеребрального заражения с характерной для данного заболевания клиникой и патолого-анатомическими изменениями.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и представляет собой новый штамм энтеровирусов свиней, используемый для контроля иммуногенности вакцины против энзоотического энцефаломиелита (болезни Тешена) свиней.

Целью изобретения является штамм энтеровирусов свиней, характеризующийся стабильной вирулентностью для поросят, который может быть использован в качестве контрольного для оценки иммуногенной активности и специфичности вирус-вакцины против болезни Тешена свиней.

Поставленная цель достигается получением штамма Черниговский-2372 Enterovirus Suls - 1, депонированного в коллекции микроорганизмов Всесоюзного государственного научио-контрольно го института ветеринарных препаратов, регистрационный № 286/5

Исходный штамм выделен из головного мозга подсвинка 10-месячного возраста, вынужденно убитого с характерными для болезни Тешена признаками.

Полученный штамм Черниговский- 2372 энтеровирусов свиней имеет следующие характеристики.

Морфологические признаки. Сферическая форма, типичная для энтеровирусов свиней, имеет икосаэдральную симметрию, размер вириона 28 нм.

Антигенные свойства. Штамм Черниговский-2372 антигенно родственный референтному штамму Konratice Enterovirus Suis - 1: в реакции перекрестной нейтрализации вирус в дозе 1000 ТЦДво/мл нейтра- лизуетс.я 20 нейтрализующими единицами антисыворотки к референтному штамму Konratice; антисыворотка к штамму Черниговский-2372 в дозе 20 нейтрализующих

VJ VI

4 00

VI

единиц нейтрализует референтный штамм Kontratice в дозе 1000 ТЦДбо/мл.

Биологические свойства. Штамм Чер- ниговский-2372 обладает высокой репродуктивной активностью на культуре клеток перевиваемой линии СПЭВ и накапливается в них до 5,5 Ig ТЦДзо/мл в течение 24 ч при 37°С ±0,5. Обладает бляшкообразую- щими свойствами на перевиваемых клетках линии СПЭВ. Образует однородные бляшки размером 0,5 - 1 мм.

Физико-химические свойства. Является РНК-содержзщим, репродукция вируса в культуре клеток не подавляется присутствием в поддерживающей среде 100 мкг/мл 5-бром-2-дезоксиуридина и 0,1-1,0 мкг/мл актиномицина Д, устойчив к воздействию хлороформа, эфира, трипсина. Не ингибиру- ется средами со значениями рН 2-11. Понижает титры на 2-3 Ig ТЦДбо после прогревания при 50°С в течение 50-60 мин. Термоустойчив при прогревании 50°С в течение 60 мин в присутствии 1 М хлористого магния.

Стабильность основных свойств штамма при пассировании в культуре клеток СПЭВ - не менее 10 пассажей (срок наблюдения).

Основные условия хранения. В виде 10%-ной мозговой суспензии на растворе Хенкса штамм хранится при рН 7,2-7,6 и температуре 20-40°С в течение 6 лет без снижения инфекционной активности (срок наблюдения).

Безвредность для лабораторных животных. Штамм Черниговский-2372 безвреден для белых мышей, морских свинок и кроликов при внутримышечном, внутривенном, подкожном введениях.

Штамм Черниго8ский 2372 вируса энзоотического энцефаломиелита свиней обладает высокой вирулентностью для свиней в возрасте до 1 года, вызывает 100%- ную гибель на 5-20-е сутки после интрацеребрального заражения. Свиньи погибают с характерной для данного заболевания клиникой и патологоанатомически- ми изменениями.

Инфекционный титр вируса для поросят 3 мес возраста составляет 1030 ЛДбо/мл.

Штамм Черниговский-2372 используют в качестве контрольного штамма для оценки иммуногенной активности вакцинного штамма, матровой расплодки и производственных серий вирус-вакцины против болезни Тешена свиней.

Пример 1, Оценку иммуногенности вакцинного штамма вируса энзоотического энцефаломиелита свиней проводят путем

определения устойчивости привитых животных к заражению патогенным штаммом вируса. Для этого вакцинный штамм Перечинский-642 Enterovlrus Suls - 1 вводят 4 поросятам трехмесячного возраста внутримышечно в область внутренней стороны бедра в объеме 1 мл. Через 14 дней привитых и 4 контрольных (непривитых)поросят заражают вирулентным штаммом

0 И4ерниговский-2372 с активностью не ниже 3,5 д ТЦДбо/мл. Перед использованием гомогенизированную мозговую ткань оттаивают и добавляют раствор Хенкса в соотношении 1:10. Суспензию фильтруют через

5 стермльный марлевый фильтр. Поросят заражают интрацеребрально в объеме 0,4 мл на голову. Наблюдение за поросятами ведут 30 сут, в течение которых ежедневно двукратно (утром и вечером) измеряют темпе0 ратуру тела. Контрольные поросята заболевают на 5-20-е сутки после заражения с клиническими признаками болезни Тешена: кратковременное, в течение 1-2 дней, повышение температуры тела до 40,55 41,0°С в продромальный период, расстройство координации движения, слабость, гиперстезия кожи, у отдельных животных рвота; паралич конечностей наступает обычно на 8-12-е сутки, а гибель животных

0 на 10-16-е сутки после заражения.

Привитые поросята устойчивы к вирулентному штамму Черниговский-2372.

Пример 2. Штамм Черниговский- 2372 вируса энзоотического онцефаломие5 лита свиней используют для контроля иммуногенной активности и специфичности матровой расплодки вакцинного штамма вируса болезни Тешена свиней. С этой целью пяти поросятам трехмесячного воз0 раста вводят внутримышечно в области внутренней стороны бедра двукратно, с интервалом 14 дней, по 1 мл матровой расплодки вируса. Через 14 сут после второго введения всех привитых и двух контрольных

5 поросят заражают вирулентным штаммом вируса болезни Тешена свиней Черниговский-2372.

Для этого 10%-ную мозговую суспензию на растворе Хенкса, предварительно

0 профильтрованную через стерильный марлевый фильтр, вводят интрацеребрально в объеме 0,4 мл на голову. В течение 30 сут ведут наблюдение за животными с ежедневной двухразовой термометрией. Матровая

5 расплодка вакцинного штамма вируса считается пригодной для серийного изготовления на ее основе вирус-вакцины, если привитые поросята после заражения вирулентным штаммом вируса Черниговский- 2372 не заболевают, а контрольные

животные заболевают и гибнут с характерными для болезни Тешена признаками.

Пример 3. Штамм Черниговский- 2372 вируса энзоотического энцефаломиелита свиней используют при оценке иммуногенной активности и специфичности вирус-вакцины против болезни Тешена свиней. Контроль вакцины, изготовленной биофабрикой, проводят на пяти поросятах трехмесячного возраста, два из которых являются контрольными. Трем поросятам внутримышечно в область внутренней стороны бедра вводят по 1 мл вакцины. Через две недели после второй иммунизации вак0

цинированных и контрольных поросят заражают интрацеребрально вирулентным штаммом вируса болезни Тешена свиней Черниговский-2372 в объеме 0,4 мл на голову. Вакцина считается иммуногенной, если привитые поросята остаются живыми после заражения на протяжении 30 сут, а все контрольные животные заболевают и гибнут с характерной для болезни Тешена клиникой.

Формула изобретения Штамм энтеровируса свиней ВГНКИ № 286/5 для контроля иммуногенности вакцины против болезни Тешена свиней.