СПОСОБ ПОДАВЛЕНИЯ ГУМОРАЛЬНОГО И КЛЕТОЧНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА Советский патент 1995 года по МПК G01N33/483 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к моделям ингибиции иммунного света.

Регуляцию иммунного ответа осуществляют целым рядом химиотерапевтических средств и веществами биоорганического происхождения, вызывающими как снижение, так и усиление иммунного ответа. К числу первых можно отнести цитостатики, например циклофосфан, которые способны ингибировать реакции в различных звеньях иммунного ответа путем воздействия на пролиферирующую фракцию клеток иммунной системы. К вторым можно отнести липополисахариды бактериального происхождения, способные стимулировать преимущественно В-клеточную систему иммунитета. Вещества группы имидазола, например левамизол, способны стимулировать Т-клеточную cистему и антителообразование.

Известно, что воздействие некоторых физических факторов, таких как переменное магнитное поле низкой частоты, способно стимулировать процессы дифференциации и пролиферации Т-клеток.

Кроме того, существует способ ингибиции как гуморального, так и клеточного иммунного ответа путем воздействия на организм ионизирующей радиации. Ингибиция при этом способе достигается за счет гибели клеток.

Целью изобретения является снижение побочного действия за счет предотвращения гибели Т- и В-лимфоцитов.

Цель достигается за счет воздействия на организм иммунизированного животного гипомагнитного поля напряженностью 5˙10^-10 Тл в течение 24 ч.

Способ осуществляется следующим образом.

Для того, чтобы ингибировать гуморальный иммунный ответ, животных иммунизируют и помещают в ферромагнитную камеру со степенью экранизации 5˙10^-10 Тл в фазу индукции на 24 ч. После экспозиции животных содержат последующие трое суток в обычных условиях в виварии. На четвертые сутки после иммунизации модель готова для дальнейших исследований.

Для того, чтобы ингибировать клеточный иммунный ответ, животных после повторной иммунизации под подвешенный апоневроз задней лапки помещают в ферромагнитную камеру со степенью экранизации 5˙10^-10 Тл в продуктивную фазу на 24 ч. По истечении времени экспозиции модель готова для дальнейших исследований.

Оценка гуморального иммунного ответа.

Мышей иммунизируют внутривенно суспензией эритроцитов барана (ЭБ), содержащей 2˙10⁸ кл. На четвертые сутки после иммунизации животных забивают методом цервикальной дислокации, забирают селезенки. Полученные спленоциты путем суспензирования в среде Игла в количестве 10⁷ кл/мл смешивают с комплементом морской свинки и ЭБ. После 2-часовой инкубации при 37^оС определяют количество 1 М антителообразующих клеток (АОК) по числу гемолитических бляшек в безгелевой среде согласно методу Cunningham.

Оценка реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ).

Оценку реакции ГЗТ проводят по Г. Фримелю (1987) в следующей модификации: мышей иммунизируют внутрибрюшинно 0,5 мл 0,5%-ной суспензией ЭБ. На пятые сутки после иммунизации под подошвенный апоневроз опытных задних лапок вводят 50 мкл 50%-ной суспензии ЭБ в среде 199, в контрольные лапки 50 мкл среды 199. Через 24 ч у животных штангенциркулем измеряют толщину опухания опытной и контрольной лапок в мм. Реакцию оценивают по разности толщины опухания опытной и контрольной лапок.

П р и м е р 1. Мышь линии СВА (самец, возраст 1,5 мес). Манипуляции проводились по вышеуказанной схеме для ингибиция гуморального иммунного ответа. Число АОК составило: 20250; 107,7/10⁶ спленоцитов.

П р и м е р 2. Мышь линии (СВАx xС57/B16)F1 (cамка, возраст 1,5 мес). Манипуляции проводились по выше указанной схеме для ингибиции гуморального иммунного ответа. Количество АОК составило: 36684, 166,7/10⁶ сп.

П р и м е р 3. Мышь линии (СВАx xС57/B16)F1 (cамка, возраст 1,5 мес). Манипуляции проводились в соответствии со схемой для ингибиции клеточного иммунного ответа по оценке реакции ГЗТ. Разность толщины опухания лапок составила 0,7 мм.

П р и м е р 4. Мышь линии (СВАx xС57/B16)F (cамка, возраст 1,5 мес). Манипуляции проводились по вышеуказанной схеме для ингибиции клеточного иммунного ответа по оценке реакции ГЗТ. Разность толщины опухания лапок составила 0,8 мм.

Обоснование достоверности выбранного способа.

При изучении гуморального иммунного ответа было использовано 93 животных двух линий в 8 опытах, при изучении клеточного иммунного ответа было использовано 45 животных в 4 опытах. Полученные данные обработаны статистически и представлены в таблицах.

Влияние гипомагнитных условий на развитие гуморального иммунного ответа на ЭБ в фазу индукции в течение 24 ч мышей линии СВА (самцы) показано в табл.1.

Как видно из табл.1, число АОК в опытной группе по сравнению с контрольной снижено на 21,3% (АОК/10⁶ сп.), что свидетельствует об ингибирующем влиянии гипомагнитных условий на фазу индукции гуморального иммунного ответа (Р < 0,05).

Влияние гипомагнитных условий на развитие гуморального иммунного ответа на ЭБ в фазу индукции в течение 25 ч мышей линии (СВА x С57/B16)F1 (cамки) показано в табл.2.

Как видно из табл.2, у данной линии мышей имеется снижение АОК/10⁶ сп в опытной группе по сравнению с контрольной на 22,5% что свидетельствует об ингибирующем влиянии данного фактора на гуморальный иммунный ответ (Р < 0,02).

Влияние гипомагнитных условий на развитие реакции ГЗТ на ЭБ в продуктивную фазу в течение 24 ч у мышей линии (СВА x С57/B16)F1 (cамки) показано в табл.3.

Из приведенных данных табл.3 видно, что разница степени опухания лапок в опытной группе меньше на 16,8% по отношению к контрольной группе (Р < 0,05), на основании чего можно сделать вывод об ингибирующем влиянии гипомагнитных условий на клеточный иммунный ответ.

Технико-экономическая эффективность.

Предложенные гипомагнитные условия ингибируют гуморальный ответ на 21,3-22,5% Это соответствует степени ингибиции при облучении в дозе 70-100 Р. Данные показывают, что степень угнетания клеточного иммунного ответа в предложенных условиях соответствует ингибиции в дозе облучения 100-130 Р. Следовательно, приведенные данные по степени ингибиции сравнимы.

Облучение вызывает повреждение ДНК, что приводит к гибели 63% В-лимфоцитов (120-180 Р) и 63% Т-лимфоцитов (200-250 Р), приводит к развитию лейкозных и других опухолевых заболеваний. Кроме того, облучение приводит к повышению проницаемости тканей, что вызывает нарушение функционирования легочного, гематофтальмического, гемато-энцефалического барьеров, сосудов кожи, снижает бактерицидные и детоксические свойства тканей.

Гипомагнитные условия гибели клеток не вызывают, Т- и В-лимфоциты на 24 ч были помещены в гипомагнитные условия. Количество жизнеспособных клеток после этого не изменилось (по сравнению с контролем).

Следовательно, предложенный способ как минимум на 63% снижает гибель клеток, полностью отменяя побочные эффекты.

Модель может быть использована в эксперименте для исследований, связанных с изучением аутоиммунных состояний, аллергических реакций, патогенеза иммунодефицитов, реакции отторжения трансплантата, вопросов иммуногематологии.

Использование: экспериментальная медицина. Сущность: на иммунизированных животных воздействуют гипомагнитным полем с напряженностью 5·10^-10 Тл в течение 24 ч. Эта процедура позволяет предотвратить гибель Т- и В-лимфоцитов и тем снизить побочные эффекты. 3 табл.

СПОСОБ ПОДАВЛЕНИЯ ГУМОРАЛЬНОГО И КЛЕТОЧНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА путем воздействия на организм физического фактора, отличающийся тем, что, с целью снижения побочного действия за счет предотвращения гибели Т- и В-лимфоцитов, в качестве физического фактора используют гипомагнитное поле напряженностью 5 · 10^-10 Тл, а воздействие осуществляют в течение 24 ч на предварительно иммунизированный организм.