Способ получения полиплоидных форм клевера лугового Советский патент 1992 года по МПК A01H4/00 A01H1/04 

СЛ

С

Изобретение относится к биотехнологии, сельскому хозяйству, селекции и семеноводству. Согласно способу проростки семян обрабатывают колхицином при вакуум-инфильтрации, эксплантируют первичный конус нарастания на искусственную питательную среду, проводят микрокло- нальное размножение. Полученные растения - регенеранты, высаживают .в почву, выращивают до цветения и по форме пыльцы первого соцветия оценивают плоид- ность. 1 з.п. ф-лы, 3 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции растений для получения новых исходных форм

Известен способ получения полиплоидных форм у различных кормовых культур путем обработки точек роста проростков колхицином при вакуум-инфильтрации, выращивания проростков в рассадных ящиках, оценки на плоидность каждой цветочной головки каждого растения, удаления диплоидных головок и переопылением полиплоидных, выращивания растений из полученных семян первого поколения (Со), оценки растений на плоидность по форме пыльцы (пыльца полиплоидных растений многоовальная, неправильной формы, диплоидных - продолговатая, правильной формы) и отбора нехимерных полиплоидных растений второго поколения (Ci),

Недостатки способа-растения, выращенные из обработанных проростков (Со) имеют химерное строение тканей; длительный процесс получения нехимерных полиплоидов (из проростков семян выращивают растения на протяжении двух поколений для выделения нехимерных полиплоидов).

Цель изобретения - ускорение получения нехимерных полиплоидов.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения полиплоидных форм клевера лугового, включающему обработку проростков семян колхицином при ва- куум-инфильтрации, выращивание растений из проростков, оценку плоидности соцветий по форме пыльцевых зерен, отбор полиплоидных растений, после обработки проростков колхицином отчленяют первичные конусы нарастания и размножают их микроклонально на искусственной питательной среде, из вегетативного потомства

Х|

сл о сл сл XJ

каждого экспланта отбирают нехимерные полиплоидные растения-регенеранты, при этом оценивают плоидность по форме пыльцы первого соцветия,

Пример 1. Семена клевера лугозого поверхностно стерилизуют и в асептических условиях высаживают на искусственную питательную среду Гамборга Вз в чашки Петри. 4-6-дневные проростки для синхронизации клеточных делений помещают в холодильник при 1°С на 2 сут, а потом на 1 ч в термостат при 27-28°С, Затем проростки погружают в стерильный 1 %-ный водный раствор колхицина и сосуд, в котором находятся проростки, помещают в вакуум-камеру, давление в которой постепенно снижают до 100 мм рт.ст, с последующим повышением его до уровня атмосферного давления. Обработку в вакуум-камере повторяют А раза через 1 ч. Обработанные колхицином проростки промывают автокла- вированной дистиллированной водой в стерильных условиях, отчленяют эпикотили и высаживают в среду для микроклонального размножения. Среда содержит минеральные соли, витамины и фитогормоны. Состав приведен втабл,1.

Эксплапты культивировали на световых стеллажах с освещенностью 12 клк, температурой 22 ±2°С, фотопериодом 16ч. В потомстве каждого зкспланта отбирали регенеранты, которые имели признаки тет- раплоидных растений аналогично тетрапло- идным растениям, полученным традиционным путем, а именно: более широкие листовые пластинки, более темную окраску листьев, ярче выраженную опушен- ность, утолщенные листовые черешки. Отобранные регенеранты пассировали на среду того же состава для окоренения, но без витаминов и гормонов. По мере появления корней регенеранты высаживали в искусственную почву Биои-112 и доращивали растения до фазы цветения. В период цветения определяли плоидность по форме пыльцевых зерен каждой цветочной головки всех окорененных растений-реге- нерантов (табл 2).

Как видно из табл.2, среди регенеран- тов не обнаружено ни одного растения, на

котором образовались бы цветочные головки разной плоидности, т.е, ие обнаружено ни одного химерного растения, что дает возможность по первой цветочной головке отбирать тетраплоидные нехимерные растения. Всего проанализировано 334 рас- теиия-регенеранта сорта Йыгева-433 (из них оказалось нехимерных гетраплоидов 141 и диплоидов 183) и 97 растений-регенерантов

селекционного образца Крупноплодный (из них нехимерных тетраплоидов 57, диплои- дов-40), Период получения полиплоидных форм ограничивался тремя пассажами на питательной среде и периодом роста их в

искусственной почве, т.е. от 3 до 5 мес. в условиях искусственного климата.

Примеры 2иЗ, Процесс вели аналогично примеру 1.

Результаты представлены в табл.2.

В табл.3 представлено влияние различ-

ных концентраций 6-БЛП на результаты способа.

Предлагаемый способ по сравнению с прототипом позволяет ускорить получение нехимерных полиплоидов и их использование в селекционном процессе.

Формула изобретения

1,Способ получения полиплоидных форм клевера лугового, включающий обработку проростков семян колхицином при ва- ку ум-инфильтрации, выращивание растений, оценку плоидности соцветий и отбор полиплоидных форм, отличаю щи и- с я тем, что, с целью ускорения получения

нехимерных полиплоидов, выращивание растений осуществляют путем помещения первичного конуса нарастания проростков на искусственную питательную среду и последующего их микроклонального размножения, затем полученные растения переносят в почву, выращивают до цветения и плоидность растений оценивают по форме пыльцы у первого соцветия.

осуществляют на питательной среде Гам- борга Вд, в которую дополнительно вводят 10 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,1 мг/л индолилуксусной кислоты.

Состав компонентов питательной среды для микроклонального размножения клевера лугового

Сахароза 30000, рН 5,7-5,8

Выход полиплоидных форм клевера лугового при обработке проростков колхицином и размножении эпикотелей на искусственной питательной среде (количество, шт.).

Влияние высоких доз б-БАП на регенерационную способность пазушных почек клевера лугового (сорт Йыгева-433), среда культивирования Вз+0,1 мг/л ИУК+ б-БАП.

Таблица 1

Таблица 2

Таблица 3

Продолжение талб. 3