Способ получения митотических полиплоидов райграса пастбищного Советский патент 1992 года по МПК A01H1/04 A01H4/00 A01H1/06 C12N5/04 

Изобретение относится к селекции и генетике растений и может быть использовано для создания полиплоидных форм у райграса пастбищного

Известен способ получения митотиче- ских полиплоидов у райграса пастбищного, предусматривающий получение проростков путем проращивания семян на фильтровальной бумаге, синхронизацию клеточных делений холодом, обработку 0.2%-ным водным раствором колхицина и выращивание обработанного материала в условиях закрытого грунта.

Недостатком указанного способа является низкий выход полиплоидов, который составляет около 10,0 % от общего числа обработанных проростков.

Цель изобретения - увеличение выхода полиплоидов у райграса пастбищного.

Поставленная цель достигается тем, что в известном способе получения полиплоидов, включающем получение проростков семян, синхронизацию клеточных делений

холодом, обработку водным раствором колхицина и помещение колхицинированных проростков в условия закрытого грунта для выращивания растений, проростки семян получают путем эксплантации и выращивания зародышей на модифицированной питательной среде Линсмайера-Скуга при содержании сахарозы 100 г/л, а перед помещением в условия закрытого грунта колхицинированные проростки переносят на ту же среду при содержании сахарозы 30 г/л и выращивают в течение 2-х недель при 10°С и в течение следующих 6-ти недель при 24°С.

Пример. Зародыши извлекают из стерилизованных семян и проращивают при 24±2°С в пробирках на питательной среде следующего состава: макро- и микроэлементы 2/3 нормы по Линсмайеру и Ску- гу, тиамин 0,2 мг/л; ИУК 0,4 мг/л; кинетин 0.24 мг/л, сахароза 100 г/л; агар-агар 7 г/л Проростки длиной 3-8 мм, на 2 сут помещают в холодильник при 1±0,5°С, после чего

VJ

4 00 Јь Ы

Сл)

ставят на 1 ч при 27-28°С в условиях интенсивного освещения и сразу заливают 0,3%- ным стерильным водным раствором колхицина на 4 ч. Раствор колхицина предварительно стерилизуют через мембранные фильтры МПИроге ( 0,45 м). Колхициниро- ванные проростки тщательно промывают стерильной водой и высаживают на новую среду того же состава при содержании сахарозы 30 г/л. Обработанный растительный материал на 2-е недели помещают в камеру искусственного климата при 10±1°С, после чего в течение следующих 6-ти недель культивируют при 24±2°С на той же среде, в тех же пробирках (освещенность 16 ч). Выжив- шие проростки высаживают в вегетационные сосуды с почвой и выращивают в условиях теплицы,

Сравнительная оценка эффективности разных методических приемов в стерильной культуре на выход полиплоидов райграса пастбищного №N 1212 и 1218 (по каталогу ЛитИЗ) представлена в таблице (колхицин 0,3%, экспозиция 4 ч). В среднем по каждому варианту обрабатывались 68 проростков. Плоидность определяли по числу хромосом в корневой меристеме.

Как видно из таблицы, наибольший выход полиплоидов 65.8% получают, когда для обработки колхицином используют проростки, полученные путем проращивания эксплантированных зародышей на пита

0 5

0

5

0

тельной среде при содержании сахарозы 100 г/л, а культивирование колхициниро- ванных проростков после обработки в течение 2-х первых недель проводят при +10°С (вариант 7).

Предлагаемый способ позволяет увеличить выход полиплоидов райграса пастбищного примерно в 6 раз по сравнению с аналогичным способом, взятым излитерату- ры, что соответственно сокращает затраты для создания новых полиплоидных форм.

Формула изобретения Способ получения митотических полиплоидов райграса пастбищного, включающий получение проростков семян, синхронизацию клеточных делений холодом, обработку водным раствором колхицина и помещение колхицинированных проростков в условия закрытого грунта, о т- личающийся тем, что, с целью увеличения выхода полиплоидных растений, проростки семян получают путем эксплантации и выращивания зародышей на модифицированной питательной среде Линсмайера - Скуга при содержании сахарозы 100 г/л и перед помещением в условия закрытого грунта колхицинированные проростки переносят на ту же питательную среду при содержании сахарозы 30 г/л и выращивают в течение 2-х недель при 10°С и в течение последующих б-ти недель при 24°С.

Использование1 биотехнология растений, культивирование тканей и клеток, сельское хозяйство, луговодство. Сущность изобретения: получают митотические полиплоиды райграса пастбищного путем обработки растительного материала колхицином, при этом проростки для обработки колхицином получают путем культивирования зародышей на питательной среде при содержании сахарозы 100 г/л, и перед помещением в условия закрытого грунта колхицинированные проростки переносят на ту же среду и выращивают при содержании сахарозы 30 г/л в течение 2-х недель при 10°С и в течение последующих 6-ти недель при 24°С, 1 табл.