Способ выделения РSеUDомоNаS aeRUGINoSa Советский патент 1992 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для выявления инфекций, вызываемых Ps.aeruginosa.

Известен способ выделения Ps.aeruginosa на селективной среде, состоящей из сухого дагестанского пептона (20,6 г), K2S04 (10,0 г). MgCLa (1,5 г), арага 15,0 г, в качестве селективного агента - 0,2-0,5% цетилперидинового хлорида (ЦЛХ), вода - до 1 л.

Однако используемая среда не обеспечивает высокой селективности в отношении Ps.aeruginosa, так как на ней наблюдается рост ассоциантов, а также не обладает достаточной чувствительностью.

Известен способ выделения Ps.aeruginosa путем посева на питательную среду, содержащую источники азота, углерода, минеральные соли, агар и селективный агент, в качестве которого используются п-оксифенилсалициламид в определенной концентрации.

Однако используемый селективный агент при повышении его концентрации в пределах указанных величин угнетает рост Ps.aeruginosa, что снижает чувствительность способа. Показатель угнетения роста Ps.aeruginosa 2,6.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа за счет снижения угнетающего действия селективного агента.

Х|

01

ю

vj vj ГО

Пример 1. Навески, мас.%: сухой пептон СК 1,086; агар 1,130; хлорид натрия 0,495, растворяют в дистиллированной воде до 100 мл и нагревают до полного расплавления агара. Раствор доводят водой до пер- воначального обьема и добавляют в качестве селективного агента 0,3 мл 1 %-но- го раствора фенил(4-гидроксифенил)суль- фида (1%-ный раствор готовят путем растворения 0,03 г селективного агента в 2,8 мл диметилсульфоксида), Среду разливают во флаконы и стерилизуют в автоклаве при 120°С в течение 20 мин (рН среды 7,2-7,4), Готовую питательную среду расплавляют в водяной бане и разливают в чашки Петри, Материал от больного с диагнозом хронический остеомиелит засевают ватным тампоном на поверхность питательной среды, инкубируют посев при 37°С в течение 18-24 ч, после чего учитывают результаты. Наличие выросших колоний указывает на из принадлежность к виду Ps.aeruginosa. Колонии имеют размер до 2 мм, выпуклые, серые, рост других микроорганизмов отсутствует.

Пример 2. Навески, мас.%: сухой пептон 1,146; агар 1,170; хлорид натрия 0,510, растворяют в дистиллированной воде до 100 мл и нагревают до полного расплавления агара. Доводят водой до первоначального объема и добавляют 0,31 мл 1%-ного раствора фенил(4-гидроксифе- нил)сульфида, разливают во флаконы и стерилизуют в автоклаве при 120°С в течение 20 мин (рН среды 7.2-7,4). Готовую питательную среду расплавляют в водяной бане и разливают в чашки Петри. Матераил от больного с диагнозом пэраректальный свищ ватным тампоном засевают на поверхность питательной среды, посев инкубируют в течение 18-24 ч, после чего учитывают результат. Колониии имеют размер до 2,0 мм, выпуклые, серые. Рост других микроорганизмов отсутствует.

Пример 3. Навески, мае %: сухой пептон 1,160; агар 1,208; хлорид натрия 0,532, растворяют в дистиллированной воде до 100 мл и нагревают до полного растворения агара,доводят водой до первоначального обьема и добавляют 0,32 мл 1 %-ного раствора фенил(4-гидроксифенил)сульфи- да. Разливают во флаконы и стерилизуют в автоклаве при 120°С в течение 20 мин (рН среды 7,2-7,4) Готовую питательную среду

расплавляют в водяной бане и разливают в чашки Петри. Материал от больного с диагнозом апендэктомия ватнымтампономзасевают на поверхность питательной среды,

инкубируют посев в течение 18-24 ч, после чего учитывают результат. Колонии имеют размер до 2,0 мм, серые, выпуклые. Рост других микроорганизмов отсутствует,

Результаты изучения чувствительности

предлагаемой среды даны в табл. 1.

Чувствительность среды была изучена на пяти штаммах Ps.aeruginosa выделенных из клинического материала. Сто микробных клеток засевают в количестве 1 мл на 2 чашки из разведения , инкубируют при 37°С в течение 18-24 ч и подсчитывают число выросших колоний. Результаты показывают, что предлагаемый селективный агент оказывает меньшее ингибирующее действне на рост Ps.aeruginosa (в 1,5 раза меньше по сравнению с известным).

Даньые, приведенные в табл. 2, свидетельствуют о том, что при использовании фенил(4-гидроксифенил) сульфида и оксзфенамида возможно выделение основного возбудителя из смеси культур, взятых в соотношении 1:1000,

Вместо пептона в составе среды можно использовать гидролизат кормовых дрожжсй в аналогичной концентрации с получением аналогичного положительного результата.

Результаты изученных селективных свойств предлагаемой среды даны в табл. 2.

Таким образом, использование предлагаемого способе позволяет повысить селективность выделения при одновременном снижении ингибирующего действия в отношении роста Ps.aeruginosa.

Формула изобретения

Способ выделения Pseudomonas aeruginosa путем посева исследуемого материала на питательную среду, содержащую источник азота, агар, хлористый натрий, селективный агент и дистиллированную воду, с последующим инкубированием посевов и исследованием выросших колоний, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительност способа за счет снижения

угнетающего действия селективного агента, в качестве селективного агента используют 1%-ныГ1 раствор фенил(4-гидроксифе- нил)сульфида в диметилсульфоксиде.

Таблица

Использование: медицинская микробиология, лабораторная диагностика инфекций, вызываемых Pseudomonas aeruginosa. Сущность: исследуемый материал высевают на плотную питательную среду, содержащую белковую Основу - источник азота (пептон, дрожжевой гидролизат), хлористый натрий в дистиллированной воде и селек-. тивный агент - 1%-ный раствор фенил(4- гидроксифенил)сульфида в ДМСО, рН среды 7,2-7,4. Среду перед употреблением стерилизуют при 120°С в течение 20 мин. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-24 ч и учитывают результаты. Наличие колоний свидетельствует о присутствии в исследуемом материале возбудителя. Способ позволяет выявить как пигментообразующие, так и беспигментные штаммы P.aeruginosa. Способ высокочувствителен (выделение возбудителя из смеси культур, взятых в соотношении 1:1000), 2 табл. со С