Способ выделения и идентификации бактерий ХаNтномоNаS маLторнILIа Советский патент 1992 года по МПК C12Q1/04 C12N1/20 

ел

С

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается бактериологических исследований инфекционных эаболевэний человека и экологии микроорганизмов. Цель изобретения - упрощение и повышение чувствительности способа. Способ сводится к тому, что исследуемый материал засевают на плотную питательную среду, содержащую, г/л: сухой питательный агар из рыбного гидролизата 35-36; висмута нитрат основной 1.5-3; фурагина калиевая соль 0.018-0,03; дистиллированная вода до 1 л; рН 6.8-7,2. Инкубируют посев при 35-37°С в течение 40-48 ч или 18-24 ч при посеве чистых культур. Индентифицируют искомые бактерии X. maltophllla непосредственно на данной среде по наличию вокруг выросших колоний или газона бактерий зоны серебристого металлического блеска питательной среды.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается бактериологических исследований инфекционных заболеваний человека и экологии микроорганизмов.

Известен способ выделения и идентификации бйктерий X. maltophllla путем обработки материала в течение 120 мин 0,0035 М раствором этилендиаминтетрауксусной кислоты в 0,15 М трис-солянокислом буфере рН 8,8 с последующим выращиванием в жидкой селективной среде, содержащей четыре селективных компонента, и учетом результатов по наличию роста бактерий.

Однако известный способ сложный и имеет низкую чувствительность (рост X. martophllla наблюдается при минимальной посевной дозе 10 микробных тел в 1 мл).

Цель изобретения - упрощение и повышение чувствительности способа.

Цель достигается тем, что исследуемый материал засевают на плотную питательную среду, содержащую, г/л: сухой питательный агар из рыбного гидролизата 35- 36; висмута нитрат основной 1,5-3; фурагима калиевая соль 0.018-0,03; дистиллированная вода до 1 л; рН 6,8-7,2; инкубируют посев при 35-37°С в течение 24-48 ч и идентифицируют искомые бактерии X. maltophllla непосредственно на данной среде по наличию вокруг выросших колоний или газона бактерий зоны серебристого металлического блеска питательной среды.

Способ осуществляется следующим образом.

Приготовление дифференциальной питательной среды. В 1 л дистиллированной водь вносят 35 г сухого питательного агара из рыбного гидролизата, рН 6.8 7,2. кипятят до полного растворения, стерилизуют в паровом стерилизаторе при 120°С 20 мин. Горячий питательный агар разливают по 200 мл в стерильные колбы. Добавляют в кажvj о

Сл

о чэ о

дую колбу висмут нитрат основной 0,4 г, порошок растертого в ступке препарата фурагин растворимый 10%-ный с натрия хлоридом 90%-ным 40 мл (т.е. фурагина калиевой соли 4 мг), тщательно перемешивают, разливают в стериальные чашки Петри. Среда в чашках имеет желтый цвет, пригодна к использованию в течение 7 сут при хранении от 4 до 8°С.

П р и м е р 1. Исследуемый материал - отделяемое раны засевают ватным темпо- ном на поверхность питательной среды в чашке Петри (среда содержит на1 л дистиллированной воды, г: сухой питательный агар из рыбного гидролизата 35: висмута нитрат основной 1,5; фурагина калиевая соль 0,018; рН 7.0). инкубируют при 37°С в течение 48 ч, после чего учитывают результаты: на поверхности среды выросли изолированные колонии различных бактерий, в том числе выпуклые колонии диаметром 2-3 мм темно-коричневого цвета с кольцевой зоной серебристого металлического блеска среды вокруг колоний. Наличие колоний с зоной серебристого металлического блеска питательной среды указывает на принадлежность бактерий к виду Xanthomonas maltophllla.

П р и м е р 2. Исследуемый материал - воду реки 0,1 мл вносят пипеткой и растирают шпателем по поверхности питательной среды в чашке Петри (среда содержит на1 л дистиллированной воды, г: сухой питательный агар из рыбного гидролизэта 35.5; висмута нитрат основной 2; фурагина калиевая соль 0,02; рН 7.0). инкубируют при 37°С в течение 48 ч, почле чего учитывают результаты: на поверхности среды выросли 30 изолированных колоний различных бактерий, в том числе 5 выпуклых колоний диаметром 2-3 м темно-коричневого цвета с кольцевой зоной серебристого металлического блеска среды вокруг колоний. Наличие ко- яоний с зоной серебристого металлического блеска питательной среды указывает на выделение бактерий вида Xanthomonas maltophilla. количество которых составляет 50 КОЕ в 1 мл воды.

П р и м е р 3. Исследуемый материал - чистую агаровую культуру бактерий засевают петлей в виде бляшки диаметром 5 мм на поверхность сектора питательной среды в чашке Петри (среда содержит на 1 л дистиллированной воды, г: сухой питательный агар из рыбного гидролизата 36: висмута нитрат основной 3; фурэгина калиевая соль 0,03;

рН 7,0), инкубируют при 37°С в течение 24 ч. после чего учитывают результат; на месте посева вырос газон бактерий коричневого цвета, окруженный зоной серебристого металлического блеска питательной среды, наличие которой указывает на принадлежность исследуемых бактерий к виду Xanthomonas maltophllla.

Свойства X. maltophllla давать цветную

реакцию на питательной среде, используемой в способе, было выявлено у всех изученных штаммов X. maltophllla (110 штаммов) и отсутствовало, у прочих бактерий 56 видов 24 родов. Это позволяет упростить выделение и идентификацию X. maltophllla, приводя их. одноэтапно и сопряженно без дополнительных тестов.

Питательная среда обладает высокой чувствительностью, полностью равной чувствительности ее питательной основы (питательного агара из рыбного гидролизата) - 2-9 КОЕ. Этот уровень чувствительности полностью сохраняется в присутствии бактерий - ассоциантов в больших концентрациях (10 КОЕ), большинство видов которых подавляется средой, в том числе эшерихии, морганеллы, цитробактер и другие.

Применение изобретения позволяет также проводить количественные исследования на X. maltophllla материалов от больных 1« внешней среды.

ф-ормула изобретения Способ выделения и идентификации бактерий Xanthomonas maltophilla, включающий посев исследуемого материала в питательную среду, содержащую источники азота и углерода, селективный агент и дистиллированную воду, инкубирование посевов при 35-37 С в течение 24-48 ч и учет

результатов по характеру роста бактерий, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, исследуемый материал непосредственно высевают на поверхность плотной

питательной среды, содержащей, г/л: Сухой питательный агар на рыбном гидролизате35-36 Висмута нитрат основной 1,5-3 Фурагина калиевая соль 0,018-0,03

Дистиллированная водаДо 1 л рН среды 6.8-7,2 и после инкубирования выделение и идентификацию X. maltophllla проводят по наличию на среде вокруг выросших колоний или

газона бактерий зоны серебристого металлического блеска/