Индуктор монооксигеназной системы печени Советский патент 1992 года по МПК C07D209/46 C12N9/02 A61K37/50 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной фармакологии и биохимии и может быть использовано в научных исследованиях при изучении монооксигеназной системы печени, ответственной за окислительный метаболизм большинства чужеродных соединений и ряда эндогенных субстратов.

В литературе отсутствуют сведения о ферментиндуцирующей активности в отношении цитохром-Р-450-зависимой монооксигеназной системы печени структурных аналогов заявляемого соединения. Известно применение фенобарбитала - 5-этил-5- фенилбарбитуровой кислоты в качестве средства, ускоряющего метаболизм ксенобиотиков и улучшающего антитоксическую функцию печени. Это соединение является эталонным индуктором. Однако оно обладает рядом недостатков: умеренная фермен- тиндуцирующая активность; высокая

токсичность, выраженный снотворный эффект.

Целью предполагаемого изобретения является устранение недостатков прототи-- па, а именно снижение токсичности, устранение снотворного эффекта, повышение эффективности действия, как индуктора монооксигеназной системы печени.

Указанная цель достигается тем, что в качестве средства, индуцирующего моноок- сигеназную систему печени применяют 1- оксо-3-фенил-6-хлор-2,3-дигидро-1Н-изоин- дол.

Применение 1-оксо-3-фенил-6-хлор-2,3- дигидро-1Н-изоиндола стало возможным благодаря выявленному его новому свойству: ферментиндуцирующей активности в от- ношении цитохром-Р-450-зависимой монооксигеназной системы печени. Данные свойства заявляемого соединения в литературе не описаны.

Х|

сл

4 VI

Сл

Пример. Биологические испытания проведены на белых беспородных крысах- самцах массой 180-250 г по следующим тестам: длительность гексеналового сна подопытных животных после трехкратного введения препаратов, содержание цитохро- ма Р-450 в микросомальной фракции печени и его функциональная активность в отношении метаболизма амидопирина и анилина; тест двойной иммунодиффузии по Оухтер- лони с поликлональными антителами против 2-х форм цитохрома Р-450 - форм Ь и электрофорез в полиакриламидном геле дл я определения молекулярной массы ге- мопротеида. Изучена также острая токсич- ность полученного соединения на мышах по методу Buchby (1963).

Микросо мальную фракцию печени крыс получали дифференциальным центрифугированием (Армакоа и соавт., 1968), Цитох- ром Р-450 определяли по методу Omura и Sato (1964) на двухлучевом спектрофотометре Хитачи-557 в сканирующем режиме. Метаболизм анилина определяли по уровню п-аминофенола, метаболизм амидопирина по скорости образования формальдегида (Карузина, Арчаков, 1977). Электрофорез макросом в полиакриламидном геле проводили как описано ранее Laemmly, 1970. Содержание микросомального цитохрома Р-450 и активность ферментов метаболизма рассчитаны на мг микросомального белка. Белок определяли по микрометоду Лоури (Кочетов, 1980). Полученные результаты обработаны статистически по критерию Стъю- дентз(Лакин, 1980).

Препарат вводили крысам внутрь в виде взвеси на 1 % крахмальной слизи в дозе 100 мг/кг один раз в сутки в течение 3-х дней. Через 48 ч после последнего введения про- водили гексеналовую пробу или выделяли микросомальную фракцию печени. Длительность гексеналового сна была в равной степени укорочена как под влиянием заявляемого соединения, так и базового препа- рата - фенобарбитала, вводимого в аналогичных условиях (100 мг/кг, 3-кратно внутрь), что свидетельствует об усилении процесса метаболизма гексенала у животных (Лакин, Крылов, 1981).

Заявляемое соединение вызывает более, чем 3-х кратное увеличение уровня основного гемопротеида монооксигеназной системы печени - цитохрома Р-450. Фено

барбитал в аналогичных условиях увеличивает содержание цитохрома Р-450 лишь в 2,5 раза. Функциональная активность монооксигеназной системы под влиянием заявляемого соединения также существенно выше, чем при индукции фенобарбиталом (таблица 1). Тест двойной иммунодиффузии по Оухтерлони показал, что микросомы из печени крыс, получавших заявляемое соединение, взаимодействуют с антителами к форме Ь, что характерно для индукции фенобарбиталом, и не дают преципитации с анти- с. Электрофоретическое разделение белков микросом печени в полиакриламидном геле выявляет увеличение интенсивности окраски белка в области 53 кДа, что также характерно для индукторов фенобар- биталового типа.

Таким образом, заявляемое соединение является мощным индуктором фенобарби- талового типа, причем по силе ферментин- дуцирующего действия в отношении цитохром-Р-450-зависимой монооксигеназной системы печени это соединение превосходит эталонный индуктор - фенобарбитал. Кроме того, применение заявляемого изо- индола в качестве индуктора устраняет недостаткифенобарбитала:вферментиндуцирующей дозе--100 мг/кг - он не обладает снотворным эффектом; фенобарбитал в этой дозе при однократном введении вызывает сон у 80% животных. Заявляемое соединение обладает значительно меньшей токсичностью, по сравнению с фенобарбиталом; ЛДво для мышей при введении внутрь составляет более 1500 мг/кг, для фенобарбитала - 320 мг/кг. Наблюдение за животными в течение 1 месяца не выявило каких-либо заметных отклонений в состоянии и поведении.

Использование в экспериментальной фармакологии заявляемого соединения расширит набор средств применяемых для изучения монооксигеназной системы печени.

В таблице отражено влияние 3-х кратного введения 1-оксо-3-фенил-6-хлор-2,3-ди- гидро-1 Н-изоиндола и фенобарбитала на длительность гексеналового сна и некоторые показатели монооксигеназной системы печени крыс (средние из 5-8 определений).

Формула изобретения

Применение 1-оксо-3-фенил-6-хлор-2,3- дигидро-1 Н-изоиндола в качестве индуктора монооксигеназной системы печени.

- различия достоверны, по сравнению с контролем, Р % 0,05;

- различия достоверны, по сравнению с фенобарбиталом, Р % 0,05

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к экспври ментальной фармакологии и биохимии, и может быть использовано при изучении мо- нооксигеназной системы печени. Известно применение фенобарбитала в качестве индуктора цитохром-Р-450-зависимой моноок- сигеназной системы печени. Целью изобретения является снижение токсичности, устранение снотворного эффекта, повышение эффективности действия. В качестве фермент-индуцирующего средства применяют 1-оксо-3 феиил-6-хлор-2,3-дигидро-1 Н- изоиндол. Данное соединение обладает меньшей токсичностью и пониженным снотворным эффектом. 1 табл.