N,N'-ДИ(БЕНЗГИДРИЛ)-N-(ТРИФТОРАЦЕТИЛ)МОЧЕВИНЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЕ ПРОТИВОСУДОРОЖНУЮ И ФЕРМЕНТИНДУЦИРУЮЩУЮ АКТИВНОСТЬ Российский патент 1994 года по МПК C07C275/50 A61K31/17 

Изобретение относится к новым биологически активным соединениям, а именно к N,N'-ди-(бензгидрил)-N-(трифторацетил)мо- чевинам общей формулы I
, где R - H, Cl, которые проявляют противосудорожную и ферментиндуцирующую активность.

Известно, что производные мочевины обладают широким спектром биологической активности, в том числе противосудорожной и ферментиндуцирующей (1). Сама бензгидрилмочевина обладает выраженной противосудорожной активностью, сравнительно низкой острой токсичностью, но при длительном применении вызывает нежелательные побочные эффекты (2).

Известен хлоракон-N-бензиламид β -хлорпропионовой кислоты (3), обладающий противосудорожной активностью.

Известен также зиксорин - трифторметил- α -этилбензгидрол (4) - индуктор микросомальных оксидаз печени.

Известные соединения отличаются сравнительно низкой противосудорожной (хлоракон) и ферментиндуцирующей (зиксорин) активностью.

О противосудорожных и ферментиндуцирующих свойствах N,N'-ди-(бензгидрил)-N-(трифторацетил)-мочевин сведения в литературе отсутствуют.

Целью изобретения является изыскание соединений с высокой противосудорожной и ферментиндуцирующей активностью и низкой токсичностью в ряду N, N'-ди-(бензгидрил)-N-(трифторацетил)-мочевин.

Поставленная цель достигается соединениями формулы 1, которые получают трифторацетилированием N,N'-(бензгидрил)-мочевины трифторуксусным ангидридом при температуре 65-70^оС в течение 4 ч в среде бензола или его алкилгомологов, при следующих мольных соотношениях реагентов: N,N'-ди-(бензгидрил)-мочевины: трифторуксусный ангидрид: бензол = 0,01:(0,015-0,030):(0,10-0,20) с выходом целевых продуктов до 79%.

При использовании хлорангидрида трифторуксусной кислоты в качестве трифторацетилирующего реагента в результате реакции образуется и хлористый водород, который требует немедленного связывания, в противном случае он активно корродирует реактор для проведения синтеза. Кроме того, работа с трифторангидридом трифторуксусной кислоты требует соответствующего аппаратурного оформления, а именно использования реактора закрытого типа (температура кипения хлорангидрида трифторуксусной кислоты 16^оС, т.е. практически это газ).

В заявляемом способе получения, в результате реакции выделяется трифторуксусная кислота, которая является дополнительным фактором гомогенизации реакционной смеси, а по завершению реакции легко удаляется из зоны реакции в виде азеотропа с растворителем и с избытком непрореагировавшего трифторуксусного ангидрида. Окончание реакции во всех синтезах контролировали методом тонкослойной хроматографии по исчезновению пятна исходной N,N'-(бензгидрил)-мочевины.

Хроматографирование производили на пластинах Силуфол-УФ-254, проявление УФ-светом.

Для успешного синтеза целевых N,N'-ди-(бензгидрил)-N-(трифторацетил)-мочевин являются строгое соблюдение мольных соотношений реагентов и температуры проведения процесса.

Условия синтеза приведены в табл.1 и обоснованы на примере N,N'-ди-(бензгидрил)-мочевины.

Нижний предел количества трифторуксусного ангидрида (0,01 моль, пример 1) определяется стехиометрией реакции, а превышение количества ангидрида 0,03 молей на 0,01 моль N,N'-ди-(бензгидрил)-мочевины (пример 5) не целесообразно, т.к. лишь удорожает процесс, при этом не вызывая повышения выхода целевого продукта.

Как видно из данных табл. 1 (примеры 3, 6-9), количество бензола должно быть не менее 0,1 моль, в противном случае наблюдается падение выхода целевого продукта, а увеличение количества бензола свыше 0,2 молей приводит к усложнению процесса выделения целевого продукта. Наиболее предпочтителен интервал температуры проведения реакции трифторацетилирования N,N'-ди-(бензгидрил)-мочевин в 65-70^оС (примеры 10-14), иначе снижается выход целевого продукта.

В табл. 2 приведены экспериментальные данные по использованию алкилгомологов бензола в качестве среды для проведения реакции трифторацетилирования N, N'-ди-(бензгидрил)-мочевины трифторуксусным ангидридом. Молярные количества реагентов в табл.2 приведены в тех же оптимизированных соотношениях, которые отработаны в случае использования бензола (табл.1, пример 3).

Структура и состав синтезированных N,N'-ди-(бензгидрил)-N-(трифторацетил)- мочевин доказаны на основании данных элементного анализа, тонкослойной хроматографии и ИК-спектроскопии.

П р и м е р 1. В 3-горлую колбу, снабженную обратным холодильником, мешалкой и термометром, загружают 3,93 г (0,01 моль) N,N'-ди-(бензгидрил)-мочевины, 3,3 мл (0,02 моль) трифторуксусного ангидрида и 10 мл бензола. Реакционную смесь при интенсивном перемешивании выдерживают 4 ч при 65^оС. По окончании реакции (ТСХ-контроль) отгоняют азеотроп бензола и трифторуксусной кислоты и избыток ангидрида, а образовавшийся осадок перекристаллизовывают из 50 мл гексана и получают 3,81 г (78%) N,N'-ди-(бензгидрил)-N-(трифторацетил)-мочевины. (Рег. N 9973690). т.пл. = 118-120^оС.

Найдено, %: N 5,73.

C₂₉H₂₃O₂N₂F₃.

Вычислено, %: N 5,70
ИК-спектр ( ν , вазелиновое масло, см^-1): 3345 (NH), 1655 (C=O), 1715 (C-CF₃).

П р и м е р 2. N,N'-ди-(3-хлорбензгидрил)-N-(трифторацетил)-мочевину синтезировали аналогично примеру 1 из 4,62 г (0,01 моль) N,N'-ди-(3-хлорбензгидрил)-мочевины, 3,3 мл (0,02 моль) трифторуксусного ангидрида и 10 мл бензола с выходом 4,35 г (78%). N Госрегистрации 9973590, т.пл. = 117-119^оС.

Найдено, %: N 5,02.

C₂₉H₂₁O₂N₂Cl₂F₃.

Вычислено, %: N 5,04.

ИК-спектр: ( ν , вазелиновое масло, см^-1): 3340 (NH), 1660 (C=O), 1720 (C-CF₃).

Исследование острой суточной токсичности и противосудорожной активности N,N'-ди-(бензгидрил)-N-(трифторацетил)- мочевины.

N, N'-ди-(бензгидрил)-N-(трифторацетил)- мочевина (I Гос.регистрации 9973690) и N,N'-ди-(3-хлорбензгидрил)-N-(трифтораце- тил)-мочевина (N Гос. регистрации 9973590) исследованы на противосудорожную активность по тестам максимального электрошока (МЭШ) и коразолового "титрования".

Опыты проведены на беспородных белых мышах обоего пола массой 18-25 г. Препараты вводили внутрь в виде взвеси, приготовленной на 1%-ной крахмальной слизи за 1,5-2 ч до воздействия судорожных агентов. Оценку противосудорожной активности при судорогах, вызываемых МЭШ, проводили по предупреждению тонической экстензии задних конечностей у мышей и повышению судорожного порога (СПК) по сравнению с контролем при коразоловом тесте с использованием расчетного метода непрямых разностей. Кроме того, для сравнительной оценки противосудорожного действия находили величину ЭД₅₀ (доза, вызывающая предупреждение тонической фазы судорог у 50% животных) по тесту с МЭШ с использованием пробитанализа по Литчфильду и Уилкоксону. Острую суточную токсичность определяли по Buchby и рассчитывали широту терапевтического действия (ЛД₅₀/ЭД₅₀).

Экспериментальные данные об острой токсичности, противосудорожной активности и широте терапевтического действия приведены в табл.3, из которой видно, что исследуемые соединения малотоксичны (ЛД₅₀ 2000 мг/кг), обладают противосудорожной активностью по тесту МЭШ и существенно (в 1,70 и 3,40 раза) повышают судорожный порог коразола по сравнению с контролем. Величина ЭД₅₀ по тесту МЭШ равна 250 и 108 мг/кг. Кроме того, препараты имеют высокие показатели широты терапевтического действия - 8,0 и 18,5 единиц соответственно.

По изученным показателям исследованные соединения имеют преимущества перед препаратом сравнения, применяемым в медицинской практике - N-бензиламид β -хлорпропионовой кислоты. Так, по тесту МЭШ препарат N 9973690 имеет одинаковые величины ЭД₅₀, а 9973590 - в дозе в 2,2 раза ниже, чем у хлоракона, вызывает предупреждение тонической фазы судорог у 50% мышей. По коразоловому тесту исследованные соединения в одинаковых с хлораконом дозах существенно повышают судорожный порог коразола, но защитный антикоразоловый индекс у соединения 9973690 и 9973590 выше, чем у препарата сравнения (в 1,3 и 2,6 раза соответственно). Показатель широты терапевтического действия в исследованных соединениях также превышает таковой препарата сравнения (в 1,4 и 3,2 раза).

Проведены испытания на ферментиндуцирующую активность соединений N 9973690 и 9973590 на кафедре фармакологии Томского мединститута.

О биологической активности указанных соединений судили по тесту гексеналового сна. Гексеналовая проба служит интегральным показателем состояния монооксигеназии системы печени у экспериментальных животных и является скрининговым тестом при отборе препаратов, модулирующих метаболизм ксенобиотиков.

Испытания проведены на беспородных мышах-самцах массой 18-22 г, группы составляли из 6-12 животных. Исследуемые соединения вводили в эквимолярных дозах: N 9973690 - 192 мг/кг и N 9973590 - 176 мг/кг внутрь трехкратно один раз в сутки в виде суспензии на 1% крахмальной слизи. Препарат сравнения Зиксорин - ферментиндуцирующее средство фирмы "Гедеон Рихтер", производное бензгидрола - вводили внутрь в эквимолярной дозе 100 мг/кг. Гексенал инъецировали внутрибрюшинно в дозе 80 мг/кг через 24 ч после последнего введения индукторов. Длительность медикаментозного сна оценивали по отсутствию рефлекса переворачивания у животных. Укорочение длительности гексеналового сна свидетельствует об индукции монооксигеназной системы печени, осуществляющей метаболизм гексенала и других ксенобиотиков, поступающих и образующихся в организме. Контрольным животным вводили эквиобъемное количество крахмальной слизи. Полученные результаты обрабатывались статистически по критерию Стъюдента.

Результаты биологических испытаний приведены в табл.4.

Как видно из табл. 4, заявленное соединение обладает выраженной ферментиндуцирующей активностью в отношении монооксивенозной системы печени: сокращает длительность гексеналового сна.

Таким образом, соединения формулы 1 проявляют одновременно две активности, при этом они более активны по каждой из проявляющей активности по сравнению с применяемыми известными хлораконом и зиксорином.

Использование: в медицине, так как продукт проявляет противосудорожную и ферментиндуцмрующую активность. Сущность: продукт - N, N′ - ди/бензгидрил - N - трифторацетил/ мочевины формулы: (RC₆H₄)(C₆H₅)CHNHCON(COCF₃)CH(C₆H₅)(C₆H₄R) , где R=H,Cl. C₂₉H₂₃O₂N₂F₃ Т.пл. -118-120°С, C₂₉H₂₁O₂N₂Cl₂F₃ Т.пл. 117-119°С. Выход 78%. Реагент 1 : N, N-ди/бензгидрил/мочевина. Реагент 2 : ангидрид трифторуксусной кислоты. Условия реакций : температура 65-70°С среда - бензол или его алкил - гомолог, соотношение реагент 1 : реагент 2 : среда 0,01 : (0,015-0,030) : (0,10-0,20). 4 табл.

N, N¹ - Ди(бензгидрил)-N-(трифторацетил)мочевины общей формулы

где R - H, Cl,
проявляющие противосудорожную и ферментиндуцирующую активность.