1
(21)4898547/25 (22)03.01.91 (46)23.10.92. Бюл. №39
(71)Институт биоорганической химии АН БССР
(72)А.П.Дрожденюк, В.П.Голубев, И.Н.Мороз и С.А.Усанов
(56) Tisellus И. а.о. Protein chromatography on calcium phosphate columns. Biochem., Biophys. 65, № 1, p. 132-155, 1956. Авторское свидетельство СССР № 1197725, кл. G 01 N 30/48, В 01 D 15/08, 1985.
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕНТА ДЛЯ ЖИДКОСТНОЙ КОЛОНОЧНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
(57) Использование: изобретение относится к сорбентам для жидкостной хроматографии, в частности к получению нового сорбента для жидкостной хроматографии. Сущность: сорбент получают смешиванием растворов натрия винокислого, хлористого кальция и уксуснокислой меди. После кратковременной обработки полученных сферическихгранулсорбентаконцентрированными растворами содержащими фторид- и фосфат-ионы, при комнатной температуре и уравновешивании фосфат-ионами при нейтральных значениях р Н сорбент используют в колоночной хроматографии. 2 ил.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Способ получения неорганического сорбента для хроматографии биополимеров | 1984 |
|
SU1197725A1 |
| Способ хроматографического выделения и очистки иммуноглобулинов | 2018 |
|
RU2694620C1 |
| ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ АЛЬФА-ФЕТОПРОТЕИНА | 1996 |
|
RU2094078C1 |
| Способ получения дигиталис-антител | 1984 |
|
SU1455999A3 |
| Способ получения сорбента-гидроксилапатита | 1987 |
|
SU1450852A1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОСНОВНОГО ИНГИБИТОРА ПРОТЕАЗ ИЗ ОРГАНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | 2002 |
|
RU2229888C2 |
| РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pMSIN4, КОДИРУЮЩАЯ ГИБРИДНЫЙ ПОЛИПЕПТИД - ПРЕДШЕСТВЕННИК ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА, ШТАММ BL21(DE3)/pMSIN4-ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА | 2011 |
|
RU2447149C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ГЛУТАМИЛ-L-ТРИПТОФАНА И ЕГО СОЛЕЙ | 1996 |
|
RU2120446C1 |
| ПЕПТИДСОДЕРЖАЩАЯ ФРАКЦИЯ ИЗ СЕЛЕЗЕНКИ МЛЕКОПИТАЮЩИХ, ОБЛАДАЮЩАЯ ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ | 1993 |
|
RU2033796C1 |
| Способ получения пируватдекарбоксилазы из пивных дрожжей | 1988 |
|
SU1541255A1 |
Изобретение относится к сорбентам для жидкостной хроматографии, конкретно, к получению нового сорбента типа оксиапа- тита, который может быть использован для жидкостной колоночной хроматографии биополимеров.
Известен способ получения сорбента оксиапатита для разделения белков, который заключается в обработке раствора хлористого кальция двузамещенным фосфатом натрия с последующим кипячением полученных кристаллов брушита в растворе едкого натра. Для получения 200 мл суспензии сорбента необходимо 30-35 ч.
Известен способ получения сорбента для жидкостной колоночной хроматографии, заключающийся в том, что раствор виннокислого натрия обрабатывают раствором хлористого кальция, осадок подвергают обработке раствором фосфата калия при 70- 85°С, затем - при кипячении. Полученный сорбент промывают фосфатным буфером. Данный способ позволяет получать шаровидные частицы сорбента определенного размера.
Недостатком прототипа является длительность процесса получения сорбента, недостаточно высокая сорбционная емкость для белка.
Целью изобретения является сокращение длительности процесса получения сорбента и улучшение его хроматографических характеристик.
Поставленная цель достигается тем. что в способе получения сорбента при смешении раствора виннокислого натрия приливают смесь растворов хлористого кальция и уксуснокислой меди. Осадок суспендируют в растворе фтористого кальция. Полученные кристаллы сорбента обрабатывают раствором фосфата калия и промывают фосфатным буфером.
Применяемые в заявляемом способе, в отличие от прототипа, добавление ионон меди, обуславливающее получение кристаллов шаровидной формы, и обработка раствором
сл
с
Ч о со ю
о
фтористого калия ранее при получении сорбентов типа оксиапатита не использовались.
Сущность изобретения поясняется фигурами графического изображения и приме- ром конкретного выполнения.
На фиг. 1 приведен профиль элюции 5СА, связавшегося с сорбентом; на фиг. 2 - фотография кристаллов сорбента, полученного способом-прототипом; на фиг. 3 - фо- тография кристаллов сорбента, полученного по заявленному способу.
П р и м ,е р. К 45 мл 0,33 М раствора натрия виннокислого приливают смесь, состоящую из 25 мл раствора хлористого каль- имя ( UO85) и 15 мл 0,1 М раствора уксуснокислой меди. Полученный раствор переливают из одного сосуда в другой в течение 70-100 раз (2-3 мин), образовавшийся осадок декантируют и промывают 1- 2 раза дистиллированной водой. Время оседания частиц 3-5 минут. Затем осадок суспендируют в 20 мл 2 М раствора фтористого калия. Выдерживают 1-2 мин, супер- натант сливают, а осадок промывают дважды дистиллированной водой. Затем сорбент обрабатывают 25-30 мл 1,5 М раствора фосфата калия, рН 8,5-9,0, выдерживают 5-10 мин, осадок промывают водой и
%74
Фс/г 1
суспендируют в 0,001 М нзтрийфосфатном буфере, рН 6,8-7,5. Полученный таким образом сорбент используют в хроматографии. Хроматографическме характеристики: емкость по БСА 59 мг/г, скорость протекания растворителя 90 мл/ч. Время получения сорбента 45-60 мин.
Таким образом, преимуществами заявляемого способа являются: сокращение времени получения сорбента, увеличение сорбционной емкости, отсутствие тепловой обработки, получение кристаллов практически сферической формы,
Формула изобретения Способ получения сорбента для жидкостной колоночной хроматографии, включающий осаждение виннокислым натрием нерастворимой соли, содержащей ионы кальция, из раствора, содержащего хлористый кальций, обработку осадка раствором фосфата калия и промывку фосфатным буфером, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени процесса и улучшения хроматографических характеристик сорбента, при осаждении к раствору хлористого кальция добавляют раствор уксуснокислой меди, а перед обработкой осадка фосфатом калия осадок суспендируют в растворе фто- ристого калия.
Фие.1
