Способ получения 2 @ -дезоксинуклеозид-5 @ -0-/1-тио/трифосфатов Советский патент 1992 года по МПК C07H19/20 

Описание патента на изобретение SU1775406A1

Данное изобретение относится к усовершенствованному способу получения де- зоксинуклеозид-5 -0-(1-тио)трифосфатов () общей формулы 1

ОчР

о о s

II II II

о-р-о-р-о-р-ул;

о- о- о V но

где В-цитозин-1-ил, гуанин-9-ил, и может быть использовано в молекулярной биологии и генетической инженерии.

Цель изобретения - увеличение выхода целевых продуктов и упрощение процесса достигается выявлением условий и параметров реакций, времени, концентрации, реакционной среды, присутствием дополнительных реагентов.

П р и м е р 1. Дезоксигуанозин-5 -0-(1- тио)трифосфат (). тетралитиевая соль. Дезоксигуанозин (10,7 мг, 40 мкмоль), высушивают при 110°С, 12 мм рт.ст. над P20s в течение 8ч, растворяют при перемешивании и нагревании до 120°С в течение 1 мин в смеси триэтилфосфат-триметилфос- фат (1:1. 0,18 мл), охлаждают , прибавляют пиридин (6,6 мкл, 82 мкмоль), охлаждают в ледяной бане , прибавляют свежеперегнанную PSCb (8 мкл, 80 мкмоль), выдерживают при этой же температуре 120 мин. Затем к реакционной смеси добавляют раствор ди-(три-н-бутиламмони- евой) соли пирофосфатной кислоты (66 мг, 120 мкмоль) в безводном ацетонитриле (0,6 мл), содержащий также три-н-бутиламин (22 мкл, 90 мкмоль), встряхивают, выдерживают раствор при комнатной температуре 10 мин, прибавляют воду ( мл), выдерживают еще

4

Я

О О

45 мин и наносят на колонку с ДЭАЭ-сефа- дексом А-25 (7-0,9 см, НСО з). Колонку элю- ируют водой (20 мл) и затем линейным градиентом 0,10-1, бикарбоната аммония, рН 8,5 по 50 мл в смесителе и резерву- аре. Продукт выходит при концентрации соли 0,70-OJS M (425 о.е.260,90% от теоретического выхода). Воду упаривают в вакууме, бикарбонат аммония удаляют многократным упариванием с 60% спиртом в вакууме. Остаток растворяют в воде (5 мл), титруют раствором 0,1 М гидроокиси лития до рН 8,5, пропускают раствор через колонку (2-0,8 см), содержащую в нижней части 1 мл Chelex 100 (LQ, а в верхней Дауэкс 50-2 (LI, 1 мл). Продукт элюируют водой (20 мл), раствор упаривают в вакууме до объема 0,1 мл и прибавляют 1,5 мл 0,5%-ного перхлората лития в ацетоне. Осадок центрифугируют, промывают ацетоном (2-1 мл), эфиром (1 мл) и высушивают в вакууме над PzQs при 25°. УФ-спектр А ггйх (е) 253 н,с (13700), Amin(e) (232 нм(4800), 31Р-ЯМР-спектр: & 43,32 и 42,84 (д), -22,72 (дд), -5,93 м.д

(А).

П р и м е р 2. Дезоксицитидин-5 -0-{1- тио)трифосфат () тетралитиевая соль. Дезоксицитидин (9,2 мг, 40 мкмоль) тиофос- форилируют и обрабатывают пирофосфа- том так же, как описано в примере 1. Получают 309 о.е.272 (85%) продукта в виде смеси диастереомеров. Осаждение его в виде тетралитиевой соли дает 16,4 мг.

УФ-спектр: Атах(е) 272 им (9100), A min (е) 250 нм (6300); Sl Р-ЯМР-спектр-.р

43.12 и 42,82 (д). Ва -22,67 (дд), Р/ 5.94 м.д.

(A).J

Таким образом, данный способ позволяет примерно в 2 раза повысить выход целевых продуктов (85-90%) при. упрощении процесса за счет применения меньшего количества реагента (PSCly) и меньшей продолжительности стадий.

Формула изобретения Способ получения 2 -дезоксинуклеозид- 5-0-{1-тио)трифосфатов общей формулы 1

О

S

II

-P-0-P-0-P

ОчВ

О

I

сг

о

но

где В-гуанин-9-ил- или цитозин-1-ил, путем обработки 2 -дезоксинуклеозидов тиохлоро- кисью фосфора в триалкилфосфате в присутствии основания при температуре 0-5°С с последующим добавлением раствора пиро- фосфата и гидролизом реакционной смеси, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта и упрощения процесса обработку дезоксинук- леозидов тиохлорокисью фосфора проводят в смеси триэтилфосфата и триметилфосфата (1:1) в присутствии пиридина в течение 110- 130 мин, пирофосфат добавляют в виде раствора его три-н-бутиламмоииевой соли в ацетонитриле и выдерживают в течение 4- 10 мин, а гидролиз реакционной смеси осуществляют водой в течение 20-50 мин.

Похожие патенты SU1775406A1

название год авторы номер документа
Способ получения 2 @ -дезоксинуклеозид-5 @ -0-(1-тио)трифосфатов 1987
  • Богачев Виктор Семенович
SU1775405A1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДЕЗОКСИНУКЛЕОЗИД-5'-ТРИФОСФАТОВ 1994
  • Богачев В.С.
RU2080325C1
Дезоксиуридинтрифосфаты, связанные с цианиновыми красителями сульфамидоалкильными линкерами, для использования в ПЦР 2017
  • Чудинов Александр Васильевич
  • Кузнецова Виктория Евгеньевна
  • Спицын Максим Анатольевич
  • Шершов Валерий Евгеньевич
  • Гусейнов Теймур Октаевич
  • Лапа Сергей Анатольевич
  • Заседателев Александр Сергеевич
RU2667070C1
Производные дезокситионуклеотидов,как мономеры для синтеза дезоксиполинуклеотидов, и способ их получения 1979
  • Кумарев Виктор Прокофьевич
  • Богачев Виктор Семенович
  • Баранова Людмила Васильевна
SU929647A1
Замещенные азолиды рибонуклеозид-5 @ -монофосфатов в качестве промежуточных продуктов для синтеза рибонуклеозид-5 @ -полифосфатов 1986
  • Пурыгин Петр Петрович
  • Краевский Александр Антонович
  • Белоусова Зоя Петровна
  • Папчихин Александр Владимирович
  • Якимова Ирина Анатольевна
SU1491872A1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОЛЕЙ 5'-ТРИФОСФАТОВ ПРИРОДНЫХ И МОДИФИЦИРОВАННЫХ ДЕЗОКСИРИБО- И РИБООЛИГОНУКЛЕОТИДОВ 2007
  • Абрамова Татьяна Вениаминовна
  • Васильева Светлана Викторовна
  • Королева Людмила Сергеевна
  • Власов Валентин Викторович
  • Сильников Владимир Николаевич
RU2348643C1
АНАЛОГИ ПРИРОДНЫХ ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕОЗИДТРИФОСФАТОВ И РИБОНУКЛЕОЗИДТРИФОСФАТОВ, СОДЕРЖАЩИЕ РЕПОРТЁРНЫЕ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ ГРУППЫ, ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В АНАЛИТИЧЕСКОЙ БИООРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ 2014
  • Анненков Вадим Владимирович
  • Пышный Дмитрий Владимирович
  • Даниловцева Елена Николаевна
  • Воробьев Павел Евгеньевич
  • Зелинский Станислав Николаевич
  • Верхозина Ольга Никитична
  • Грачев Михаил Александрович
RU2582198C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОЛЕЙ 5'-ТРИФОСФАТОВ ДЕЗОКСИРИБО- И РИБООЛИГОНУКЛЕОТИДОВ 2006
  • Абрамова Татьяна Вениаминовна
  • Васильева Светлана Викторовна
  • Серпокрылова Инна Юрьевна
  • Власов Валентин Викторович
  • Сильников Владимир Николаевич
RU2326888C1
Способ получения пуриновых дезоксинуклеозид-5 - трифосфатов 1977
  • Загребельный Станислав Николаевич
  • Коржов Виктор Александрович
  • Хомов Виктор Васильевич
  • Стариковская Антонина Федоровна
SU660976A1
НОВЫЕ ПРОЛЕКАРСТВА НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ 2010
  • Вердин Грегори Л.
  • Мина Мина
  • Ивамото Наоки
RU2612521C2

Реферат патента 1992 года Способ получения 2 @ -дезоксинуклеозид-5 @ -0-/1-тио/трифосфатов

Изобретение относится к химии нуклео- зидов, в частности, к получению -дезокси- рибонуклеозид-5 -0-(1-тио)трифосфатов общей формулы 0е -Р(ОХОв)-0-Р-(ОХОе)-0Р(5ХОе)-0-СН2-СН-0-СНВ-СНг-СН(рН). где В-гуанин-9-или или цитозин-1-ил, используемых в генетической инженерии и молекулярной биологии. Цель - повышение выхода и упрощение процесса. Синтез ведут из 2- дезоксирибонуклеозидов обработкой их сначала тиохлорокисью фосфора в смеси триметил- и триэти л фосфате (1:1) в присутствии пиридина при 0-5°С (110-130 мин), затем пирофосфатом в виде раствора его три-н-бутил-аммониевой соли в безводном ацетонитриле (4-10 мин) и далее водой (20- 50 мин) (гидролиз). Выделение целевых веществ ведут на ионообменных колонках. Эти условия позволяют увеличить выход целевых веществ до 85-90% при снижении длительности процесса и сокращении расхода тиохлорокиси фосфора. сл С

Формула изобретения SU 1 775 406 A1

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1992 года SU1775406A1

Goody R.S.
Isakov W
Simple synthesis and separation of the diastereomers of -thlo ahologs of ribo- and deoxyrlbo- dl- and trlphosphate
Tetrah
Lett
Пневматический водоподъемный аппарат-двигатель 1917
  • Кочубей М.П.
SU1986A1

SU 1 775 406 A1

Авторы

Богачев Виктор Семенович

Даты

1992-11-15Публикация

1987-10-29Подача