Замещенные азолиды рибонуклеозид-5 @ -монофосфатов в качестве промежуточных продуктов для синтеза рибонуклеозид-5 @ -полифосфатов Советский патент 1989 года по МПК C07H19/20 

Изобретение относится к активированным рибогтуклео зид-З -монофосфатам обшей формулы

V

N-f -0-1.0 Y У

НО он

а)при X - СН и Y

б)при X - СН и Y

в)X - азот и Y г)при X - СИ и Y

д)при X - СН и Y

е)при X - СН и Y

ж)при X - СН и Y - N02

Изобретение касается нуклеозидов ,в частности, замещенных азолидов рибонуклеозид - 5^Ъ - монофосфатов общей формулы 1 @ где а) при X -СНи У-CH₃ N- остаток аденина

б) при Х - СНи У- BRN - остаток аденина

в) при Х - азот и У -NO₂-остаток урацила

г) при Х- CH и У-BRN -остаток гуанина

д) при Х- CH и У -NO₂N- остаток цитозина

е) при Х- СНи У BRN- остаток цитозина

ж) при Х -CH и У -NO₂ N -остаток гуанина, которые могут быть использованы в качестве полупродуктов для синтеза рибонуклеозид-5^Ъ-полифосфатов, применяемых в биологии, медмцине, биотехнологии. Цель - создание полупродуктов для синтеза рибонуклеозид-5^Ъ-полифосфатов с лучшим выходом. Синтез целевых соединений ведут реакцией соответствующих нуклеозид-5^Ъ-монофосфатов с активирующим агентом - соответствующим NN -ацилбисазолом или карбонилбисазолом в сухом апротонном растворителе при 0°С. Новые соединения позволяют получать метиленовые аналоги P¹,P⁴ -бис-(нуклеозид)-тетрафосфатов и нуклеозид-5^Ъ-трифосфатов с выходом 88-90% и 49-51% соответственно, что на 10-15% превышает выходы, полученные с применением других соединений. 3 табл.

которые могут быть использованы для синтеза рибонуклеозид-5 -полифосфатов, применяемых в биологии, медицине, биотехнологии.

Цель изобретения - повышение выхода рибонуклеозид-5 -полифосфатов.

Общая методика. Раствор 50 мкмоль нуклеозид-5 -монофосфата (уридин-5 - монофосфат) и гуанозин-5 -монофосфат в виде бис(триэтиламмониевой) соли, аденозин-5 -монофосфат в виде бис (трибутиламмониевой) соли, цитидин- 5 -монофосфат в виде моно-метилтри- октиламмониевой соли в 0,5 мл абсолютного диметилформамида, обрабатывают при О С 200 мкмоль соответствующего кристаллического карбонилбис (азола) . Через несколько часов добавляют О , 05 метанола, затем (через 10 мин) разбавляют водой до 10 мл и наносят на колонку (3,5-19 см) с ДЕАЕ-целлюлозой, промывают 200 мл, воды и элюируют линейным градиентом ТЕАВ (0-0,05 М по 300 мл), собирая фракции при концентраи;ии соли 0,04- 0,045 М в виде единственного пика, содержащего активированное производное нуклеозид-5 -монофосфата. Полученный водный раствор бикарбо- натной соли активированного производного нуклеозид-5 -монофосфата обессоливают на колонке с G-10. Выход, определенный методом УФ-спектро метрии, во всех случаях составляет около 85%.

Синтез метиленового аналога Р , Р -бис(5 -нуклеозид)тетрафосфата. 176 мг (1 ммоль) метилендифосфоно- вой кислоты растворяют в 10 мл смеси пиридина и воды (1:1), добавляют 370 мг (2 ммоль) трибутиламина, упаривают с абсолютным пиридином при 15 мм рт.ст. (40 млк 4) и затем с абсолютным диметилформамидом (50мл« 3) при 5 мм рт.ст. К полученному раствору добавляют 4 ммоль N,N -ацил бисазола, перемешивают при О С до полног о исчезновения метилендифосфо новой кислоты. Контроль за реакцией осуществляю - с помощью ТСХ на плас

5

0

5

0

0

5

0

5

0

5

тине Silufol в системе: вода (25%): аммиак (10%): трихлоруксусная кислота: метиловый спирт 6:3:1:10. К смеси добавляют 0,5 мл метилового спирта, после чего через 30 мин раствор упаривают досуха на масляном насосе, добавляют аммонийную соль нуклеозид- 5 -фосфата (4 ммоль), перемешивают 100 ч при 0°С и упаривают в вакууме (5 мм рт.ст.). Остаток растворяют в 500 МП воды и наносят на колонку с ДЕАЕ-целлюлозой (НСО,, 27- 2,5 см), промывают 200 мл воды, вещество элюируют линейным градиентом 0,2-0,6 М бикарбонатаммониевого буфера с рН .7,5. Фракцию основного пика, выходящего при 0,38-0,4 М, упаривают в вакууме (15 мм рт.ст.) досуха, затем переупаривают со смесью воды и спирта (1:1) (100 млхЗ) и лиофильно высушивают (табл. 2),

Характеристики полученных соединений приведены в табл. 1.

Синтез нуклеозид-5 -трифосфа;а. 1 ммоль аммониевой соли нуклеозид- 5 -монофосфата (табл. 2) в абсолютном ДМФА обрабатывают 4 ммоль N,N - ацилбисазола при О С в течение нескольких часов до полного исчезновения исходного нуклеозид-5 -фосфата. По окончании реакции добавляют метанол для разложения избытка непрореагировавшего N,N -ацилбисазола, выдерживают реакционную смесь 30 мин. Раствор упаривают на масляном насосе досуха и добавляют 5 ммоль трибутиламмониевой соли пирофосфорной кислоты в абсолютном ДМФА. Реакционную смесь вьщерживают 35-40 ч. Для вьще- ления нуклеозид-5 -трифосфата используют градиентное разделение на ДЕАЕ- целлюлозе (НСО ) . Основной продукт - нуклеозид-5 -трифосфат элюируют при концентрации соли 0,22-0,28 М.

Результаты приведены в табл. 3.

Таким образом, применение замещенных азолидов рибонуклеозид-5 - монофосфатов для синтеза рибонуклео51

зид-5 -полифосфатов, в частности, метиленобых аналогов, Р , (нуклеозид) тетрафосфатов и нуклео- зид-5 -трифосфатов позволяет достичь выходов 88-90 и 49-51% соответственно, что на 10-15% превышает выходы, полученные с применением активированных форм рибонуклеозид-5 -монофосфатов.

Формула изобретения Замещенные азолиды рибонуклеозид- 5 -монофосфатов общей формулы

Ч Л-о-1.о ; ,

АН VY

но ОН

0,8

0,62 259(t5,3) 8,6t

0,8

0,62 259(15,3) 8,67

0,5

0,5

0,5

0,48

0,46

. 0,8

0,46 0,62

1,0

0,48 0,72 252(13,7) 8,72

ная хроматография на пластинах системе изопропанол:аммиак (25Z) :1),

рез в 0,05 М растворе ТЕАВ,

0,72 262(10)

1,0 0,72 252(13,7)

0.8

0,62 271(9,1)

11,1

8,72

27t(9,t) 8,68

18726

где а) при X - СН и Y таток аденина; при X

0

- СН, N - осб) в) г)

Д)

- СН и Y - Вг, N - остаток аденина;

при X - азот и Y - NC , N - остаток урацила;

при X - СН и Y-Br N - остаток гуанина;

при X - СН и Y - N0 ,

N - ос

таток цитозина;

е)при X-CHиY-Br N- остаток цитозина;

ж)при.Х - СН и Y - NOj, N - остаток гуанина,

в качестве промежуточных продуктов для синтеза рибонуклеозид-5 -полифосфатов.

Таблица t

0,8

0,62 259(t5,3) 8,6t

0,8

0,62 259(15,3) 8,67

0,72 262(10)

11,1

1,0 0,72 252(13,7)

0.8

0,62 271(9,1)

8,72

27t(9,t) 8,68

44

тех в системе изопропанол вода:аммиак (25%) 7:2:1. Электрофорез в системе 0,1 М водный CHgCOONa.

N,N -Кар- бонилбис- метилими- дазол

Таблица 2

Таблица 3

90

0,2 1,04

259

N,N -Тио- карбонил- бисбром- имида 3 ол

N,N -THOнилбиснитроимидаэол

ТСХ в системе диоксан:аммиак (25%);вода 6:1:4.

Продолжение табл.3

88

0,18 1, -10

272

90,5 0,16 0,85 252