Способ получения нуклеозидов или их фармацевтически приемлемых сложных эфиров Советский патент 1992 года по МПК C07H19/16 C12P19/40 

Изобретение относится к 6-замещен- ным 21, 3 -дидеоксинуклеозидам, их фармацевтическим производным, пригодным для лечения и профилактики некоторых вирусных инфекций.

СПИД относится к иммуносупрессивно- му или иммунодеструктивному заболеванию, которое предрасполагает лиц к инфекциям с возможным смертельным исходом. В сущности, СПИД связан с прогрессирующим истощением Т-клеток, особенно субсистемы помощник-индуктор, несущей поверхностный маркер -OKI4.

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) репродуцивно выделен от больных СПИД или больных с симптомами, которые часто

предшествуют СПИД. ВИЧ цитопатичен, и по-видимому, преимущественно -инфицирует и разрушает Т-клетки. несущие ОКТ - маркер, причем теперь общепризнано, что ВИЧ является этилогическим фактором СПИДа.

С момента открытия того, что иммуноде- фицитный вирус является этиологическим агентом СПИД, сделано множество предложений по созданию химиотерапевтических средств против вируса иммунодефицита человека, которые могут быть эффективны при лечении больных СПИД. Так, например, в описании на Европатент № 196185, раскрывается З1 азидо-З -деокситими- дин/апробированный над названием

х| х| о ю ел о

W

зидовудин/, его фармацевтически приемлемые производные и использование их при лечении ретровирусных инфекций у человека, в том числе СПИД, и ассициированные клинические состояния.

Опубликования заявка на Европатент № 0206497 относится в основном к пурино- вым нуклеозидам, применяемым при лечении вирусных инфекций, вызывающих иммунодефицит у человека и аналогичные состояния. В частности, в указанной заявке описан 2.6-диаминпурин-9-/Ј-0-2 , з -диде- оксирибофураноэид, предназначенный для лечения вирусных инфекций, приводящих к иммунодефициту человека.

В ходе данной работы, найдено, что некоторые 6-замещенные 21, 3 -дидеоксинук- леозиды, упоминаемые ниже, пригодны для лечения или профилактики вирусных инфекций, в частности раствор ретровирусных инфекций и особенно СПИД.

Ранее были описаны некоторые 6-замещенные пуриновые нуклеозиды, и в частности, в журнале Bioorg. Chem. 9/1/ стр. 52 - 59,1983 г., описан 6-метиламинопурин-9-/3-0 21-, з -дидеоксирибофуранозид, применяемый далее в данном описании для лечения вирусных инфекций, вызывающих иммунодефицит человека и аналогичные состояния.

Цель изобретения - изыскание способа получения новых соединений, описываемых указанной ниже структурной формулой, обладающих более высокими лечебными свойствами при лечении и профилактике вирусных инфекций.

Согласно изобретению предлагается способ получения нуклеозидов формулы

/i/.R2

Хх

1 N N

H0n(°j

где Ri - водород или амино: Rz Са - Се-ал- кокси- или метокси замещенный Сз Се- циклоалкилом, Сз - Св-циклоалкокси, пирролидинил, или аминогруппа, замещенная С2 - Се-алкилом, Сз-Сб-циклоалкилом, или ди-замещенная Сз - Се-цикло- алкил-С2 - Се-алкилом или ди-Ci - Се-алкилом, или их фармацеватически приемлемых сложных эфиров.

Согласно изобретению нуклеозиды формулы I получают путем взаимодействия пуринового основания формулы (II) ВН, где В - соответствующий, остаток пурина, с 3- деокситимидином в апротонном полярном растворителе в фосфатном буфере в присуствии смеси ферментов переноса пентози- ла, такой как смесь тимидинфосфорилазы и пуринуклеозидфосфорилазы с последующим в случае необходимости переводом

полученного соединения формулы (I) в его фармацевтически приемлемый сложный эфир обработкой соответствующим галои- дангиридом.

К примерам ретровирусных инфекций,

0 которые можно лечить или предупреждать способом в соответствии с настоящим изобретением, относятся такие как вирус, вызывающий иммунодефицит человека (ВИЧ), ВИЧ-2 и лимфотропный вирус Т-клеток у

5 человека (HLTV), например, инфекции HTLV-I или HTLV-IV. Предлагаемые соединения особенно пригодны для лечения или профилактики СПИД и родственных клинических состояний, например как СПИД 0 связанного комплекса (АРС), прогрессируе- мая общая лимфаденопатия (PGL), СПИД - связанных неврологических состояний, таких как рассеянныйчжлероз или тропические парапарезы, анти-ВИЧ-антитело положи5 тельные и ВИЧ-положительные состояния, саркома Капоши и системная волчанка. Предлагаемые соединения можно также использовать для лечения и профилактики псориаза. Предлагаемые соединения, указывае0 мые в данном описании также как активное вещество, можно принимать при лечении любым подходящим способом, включая оральный, ректальный, назальный местный (в т.ч, в ротовой полости и под языком), ва5 гинальный и парентеральный (в т.ч. подкожное, внутримышечное, внутривенное и внутрикожное введение).

Требумая доза обычно будет колебаться в интвервале от 3,0 до 120 мг на кг массы

0 тела больного в сутки, предпочтительно от 6 до 90, а в наиболее предпочтительном варианте от 15 до 60 мг на кг массы тела в сутки. Требуемую дозу предпочтительно распределять на две. три, четыре, пять,

5 шесть или более дробных доз, принимаемых в течение суток через соответствующие интервалы. Указанные дробные дозы можно принимать в единичных дозированных формах, например, содержащих 10 - 1500 мг,

0 предпочтительно 20 - 1000 мг и в наиболее предпочтительном варианте 50 - 700 мг активного вещества на одноразовую дозу.

В идеальном варианте, активное вещество следует вводить для достижения в кро5 ви максимальных концентраций активного соединения примерно от 1 до 75 мкМ и предпочтительно примерно от 2 до 50 мкМ, а в наиболее предпочтительном варианте примерно от 3 до 30 мкМ. Такие концентрации можно получить, например, путем введения внутривенно 0,1 -5% раствора активного вещества, не обязательно растворенного в физиологическом растворе, или при оральном приеме в виде пилюли, содержащей примерно от 1 до 100 мг/кг активного ингредиента. Требуемую концентрацию в крови можно поддерживать непрерывным вливанием для подачи примерно 0,01 до 5,0 мг/кг/ч или периодическими вливаниями, содержащими примерно от 0,4 до 15 мг/кг активного вещества.

Хотя можно активное вещество вводить в чистом виде, предпочтительно его назначать в виде фармацевтического состава.

Рецептуры изобретения содержат хотя бы один активный ингредиент, как указано выше, в комбинации с одним или несколькими его приемлемыми носителями и в необязательном варианте другие лекарственные средства, Каждый носитель должен быть приемлемым в смысле совместимости с другими компонентами лекарственного состава и безвредности его больному. В рецептуры входят носители, пригодные для орального, ректального, назального, местного (в т.ч. i ротового и подъязычного), вагинального или парентерального (в т.ч. подкожного, внутривенного, внутримышечного и внутрикожного) введения. Для удобства лекарственные составы можно представлять в единичной дозированной форме и приготавливать любыми известными в фармации методами. Такие методы включают операцию связывания активного вещества с носителем, кото- рый составляет один или несколько вспомогательных ингредиентов. Обычно лекарственные составы приготавливают посредством равномерного и тщательного соединения активного вещества с жидкими носителями или тонкоизмельченными твердыми носителями, или с обоими, а затем при необходимости формования целевого продукта.

Лекарственные составы предлагаемого изобретения, предназначенные для орального введения, можно приготавливать в виде дискретных единиц, например, как капсулы, пилюли или таблетки, каждая из, которых содержит дозированное количество активного вещества, в виде порошка или гранул, в виде раствора или суспензии в водном или безводном жидком веществе или в виде жидкой эмульсии типа масло-вода или вода-масло. Активный ингредиент может быть также представлен в виде шарика, или пасты.

Таблетки можно получать путем уплотнения или прессования, по желанию с одним или несколькими вспомогательными

компонентами Спрессованные таблетки можно получать путем уплотнения в соответствующей машине активного вещества в свободнотекущем виде, например как поро- 5 шок или гранулы, при желании смешанного со связующим (например, повидоном, желатином, оксипропилметилцеллюлозой), за- масливателем, инертным разбавителем, консервантом, дезинтегрантом (например,

0 . натрийгликолягом крахмала, сшитым повидоном, сшитой нзтрийкарбоксиметилцел- люлозой), поверхностно-активным или диспергирующим веществом. , Сформованные таблетки можно получить путем

5 формования в соответствующей машине смеси из порошкообразного соединения, увлажненного инертным жидким разбавителем. По желанию на таблетки можно нанести покрытие или надрез и их можно

0 составлять так, чтобы обеспечить медленное или регулируемое высвобождение активного вещества, содержащегося в таблетке, используя, например, оксипро- пилметилцеллюлозу в различных соотноше5 ниях для получения требуемого профиля высвобождения. По желанию, таблетки можно выполнить с энтеральной оболочкой для выделения частично из кишечника помимо желудка. Указанное особенно имеет

0 преимущество для производных пуриновых нуклеозидов, поскольку такие соединения подвержены кислотному разложению.

Лекарственные препараты, пригодные для местного применения в ротовой поло5 сти, включают лепешки с активным веществом в ароматизированной основе, обычно сахаре и акации или астрагале, пастилки с активным веществом в инертном носителе, например как желатин и глицерин, или саха0 ре и акации, и растворы для полоскания ротовой полости, содержащие активное вещество в соответствующем жидком носителе.

Лекарственные составы для ректально5 го приема могут быть представлены в виде свечей с соответствующей основой, содержащей, например, масло какао или салици- лат.

Прописи, пригодные для вагинального

0 применения, могут быть представлены в виде писсариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пены или спрэйев, содержащих дополнительно к активному веществу такие носители, которые известны в данной области

5 для этих целей.

В рецептуры, предназначенные для парентерального введения, входят водные и безводные изотонические стерильные растворы, которые могут содержать противо- окислители, буферы, бактериостаты и

растворенные вещества, которые переводят состав в изотоничный с кровью предполагаемого больного, и водные и безводные стерильные суспензии, которые могут содержать суспендирующие вещества и загустители. Указанные лекарственные препараты могут быть представлены в герметичных емкостях с одноразовой или многоразовой дозой, например, ампулах или флаконах, причем их можно хранить в суб- лимированно-высушенном (лиофилизован- ном) состоянии, необходимо только непосредственно перед употреблением добавление стерильного жидкого носителя, например, воды для инъекций. Моментально приготавливаемые инъекционные растворы и суспензии можно получать из стерильных порошков, гранул и таблеток типа, описываемого выше в данном описании. Предпочтительными препаратами, используемыми в единичной дозировке, являются такие, которые содержат, как ранее указывалось в данном описании, суточную дозу или единицу, суточную дробную дозу или ее соответствующую долю активного вещества.

Предлагаемые соединения можно также представлять для использования в форме ветеринарных препаратов, которые можно получать, например, традиционными в данной области способами.

Следует иметь в виду, что при добавлении к ингредиентам, особенно указываемым выше, предлагаемые препараты могут включать другие вещества, общепринятые в данной области, имеющие отношение к типу рассматриваемого лекарственного препарата. Например, вещества, пригод- ные для орального введения, могут включать такие вспомогательные агенты, как подслащивающие добавки, загустители и ароматизированные вещества.

П р и м е р 1. 6-1М-пиперидинопурин-9- /2-D-2 ,3 -дидеоксирибофуранозид.

6-М-пиперидинпурин. (2,41 ммоль, 0,5 г Sigma Chemicals St Louis МО)растворяют в 10 мл диметилсульфоксида при нагревании.

После охлаждения до комнатной темпе- ратуры прибавляют з -деокситимидина (3,62 ммоль, 0,82 г) вместе с 30 мл 10 м М калийфосфатного буфера с рН 6,8, содержащего 0,04% азида калия.

Прибавляют очищенную тимидинфос- фатную (10,000 м.ед) и пуриннуклеозидфос- форилазу (20,000 м.ед), абсорбированные в 10 мл DEAE-целлюлозе, и полученную суспензию перемешивают при 35°С. Через 8 часов реакционную смесь фильтруют и фильтрат наносят на систему из сопряженных колонок. Первая колонка заполнена гидроксидной смолой AGI-X2 (2,5 х 10 см), а вторая - смолой из Амберлита XAD -2 (2,5 - 20 см). После нанесения образца колонку

промывают большим объемом воды, и полученный продукт элюируют метанолом. После удаления растворителя и повторного растворения в смеси хлороформ-метанол (9: : 1 по объему), дополнительно хроматографируют на колонке с силикагелем (5 х 20).

Подвижную фазу представляют смесь

хлороформ: метанол (9 : 1 по объему).

Продуктсодержащие фракции соединяют,

повторно растворяют в этаноле и фильтруют

через 0,22 мкм фильтр. Этанол упаривают, а продукт растворяют вводе. После лиофили- зации 6-Ы-пиперидинопурин-9- -0-2 ,з -ди- деоксиробофуранозид (0,265 г) анализируют в виде 0,1 гидрата, содержащего 0,3 этанола.

Вычислено, %: С 58,74; Н 727; N 21,96

С15Н21№02

Найдено, %: С 58,86; Н 7,14; N 21,82

ЯМР д 8,36 /с.1Н, На/. 8,19 /С, 1Н,

Н2/ 6,23/дд, 1Н, Hi 5,01 /т, 1Н, J 5,54, ОН5/, 4,12 /м, ЗН, Н4 СН2/ 3,52 /м, 2Н. Н5/, 2,37 /м, 2Н/ Н2/2.04 /м, 2Н, Нз /, 1,61 / б, 2Н. СН2/.

П р и м е р 2. 6-хлоропурин-9-у#-0-2 ,

з -дидеоксирибофуранозид

Синтез 6-хлоропурин-9-/3-О-2|,3|-диде- оксирибофуранозида осуществляют по методике примера 1, за исключением того, что 6-хлопурин (Sigma Chemicals, St Louis

М0)растворяют в 5 мл каждого из диметил- формамида и диметоксиэтана.

После отфильтровывания твердого вещества фильтрат доводят до примерно 5 мл в вакууме с последующим растворением в

100 мл воды. Полученный продукт хроматог- рафируют на колонке со смолой XAD-2 (2,5 х х20 см). После лромывки колонки 500 мл воды, продукт элюируют метанолом. Про- дуктосодержание фракции объединяют и

прибавляют 20 мл сухого силикагеля. Весь раствор удаляют в вакууме. Сухой силика- гель наносят на верхнюю часть колонки с силикагелем, доведенную до равновесного состояния смесью хлороформ; метанол (9 ;

;1 по объему), продуктсодержащие фракции, в которых нет диокситимидина, обьеди- няют. После удаления растворителя в вакууме осадок растворяют в этаноле, филь- 1 труют с дальнейшим растворением в воде и

лиофилизуют. Полученный продукт дополнительно очищают хроматографией на колонке, содержащей полигосильную Cm смолу, в смеси из метанола и воды (8 ; 2 по объему). После удаления растворителя в вакууме продукт растворяют в воде и лиофилзуют с выходом 0,199 г б-хлоропурин-9-p-D- 2, З -дидеоксирибофуранозида (т.пл. 100°С)

Вычислено, %: С 47,16; Н 4,35; N 22,00; CI 13,92,

CioHnCIN402

Найдено, %: С 47,10; Н 4,35; N21,94;CI 13,86.

П р и м е р 3. 6-Этиламинопурин-9-/Й 21, з -дидеоксирибофуранозид .

(2,69 ммоль, 0,5 г) 6-этиламинопурина (приготовленного нуклеофильным замещением хлорной группы у 6-хлорпурина (Sigma Chemicals, St Louis МО) аминогруппой эти- ламина) и 3,33 ммоль, 0,755 г (3-детоксити- мидина) соединяют вместе с 50 мл 10 мМ калиевофосфатного буфера с рН 6,8, содержащего 0,04% азида калия. Прибавляют очищенную тимидинфосфорилазу (400 м.ед.), и пуриннуклеозидфосфорилазу (700 м.ед) и полученную суспензию перемешивают при 37°С. Через 48 часов добавляют еще 700 ед. пириннуклеозидфосфорилазы и 400 ед. тимидинфосфорилазы, и реакционную смесь перемешивают при 37°С. Через 5 дней реакционную смесь фильтруют и наносят на колонку с гидроксидной смолой AG-I- Х2 (2,5 х 10 см). Полученный продукт элюируют водной промывкой и хроматогра- фируют на амберлитовой смоле XAD-2 (2,5 - 20 см). После нанесения образца колонку промывают большим объемом воды. Продукт элюируют метанолом. После удаления растворителя продукт повторно раствори- ют в воде и ацетоне, затем лиофилизуют с выходом 0,299 г 6-этиламинопурин-9-/ -О- 2,3 -дидеоксирибофуранозида. который анализируют как 0,2 М воды и 0,1 оцетона.

(т.пл. ,45°С/0,5ДМФ/)

Вычислено, %: С 57,17; Н 6,64; N 25, 68

Ci2Hi7N502 0,2H20 0,1СзН60

Найдено, %: С 54,13; Н 6,69; N 25,75.

П р и м е р 4. 6-этилметиламинопурин-9- /3-D-21, З -дидеоксирибофуранозид .

Методика синтеза 6-этилметиламино- пурин-9-/ -0-2 ,3 , дидеоксирибофуранозида аналогична примеру 2. Реакционную смесь фильтруют, фильтрат наносят на колонку с дауэкс 1-гидроксидом (2,5 - 10 см). Продукт элюируют 90% раствором метанола в воде (по объему) и хроматографируют на амберлитовой смоле XAD-2 (2,5 х 20 см) после удаления растворителя до примерно 5 мл и повторного растворения в 100 мл воды. По- еле нанесения образца .колонку промывают большим объемом воды, полученный продукт элюируют 95% раствором этанол-вода (по объему). Продуктсодержащие фракции

объединяют и 20 мл сухого силикагеля при- бавляют. Весь растворитель удаляют в вак- куме. Сухой силикагель наносят на верхнюю часть колонки с силикагелем (4.8 х 20 см), доведенную до равновесного состояния смесью хлороформ:метанол (98 ; 2, по объему). Продуктсодержащие. фракции объединяют и после упаривания растворителя в вакууме растворяют первоначально в этаноле и фильтруют. После удаления растворителя и повторного растворения в воде раствор лиофилизуют с получением 0,3 6- этилметиламино-9-Д-0-2 , з -дидеоксирибо- фуранозилпурина, который анализируют как 0,05 гидрат (т.пл. 30°С).

Вычислено, %:С 56,12; Н 6,92; N 25,17.

Ci3HigN502 0,05Н20

Найдено, %: С 56,12; Н 6,94; N 25,14.

ЯМР: d 8,36/с, 1Н, Н8/, 8.19/с. 1Н,Н2/ 6,23 /дд. 1Н, Н1/5.05/Т. 1Н, ,58, ОН5/ 4,09/м. 1Н, Н4/ 4,08 /м, 2Н, СН2/ 3,51/м, 2Н, Н5/, 3,33 /с, ЗН, СНз/, 2,41 м. 2Н, Н2/, 2,03/м, 2Н, Нз/ 1,14 т, ЗН, J 7,01. СНз/

П р и м е р 5. 6-иодопурин-9-/ -О-2 ,3 -ди- деоксирибофуранозид .

6-иодопурин (0,624 г, 2,54 ммоль, Sigma Chemicals, St Louis МО) и 3 -диокситимидин (0,71 г, 3,13 ммоль) смешивали с 700 мл 10 мМ калийфосфатного буфера с рН 6,68, содержащего 0,04% азида калия. Прибавляют очищенную тимидинфосфорилазу (2,000 ед.) и пуриннуклеозидфосфорилазу (7,000 м.ед), и полученную суспензию перемешивают при 35°С. Через 48 ч реакционную смесь фильтруют, и фильтрат сушат в вакууме. Полученный осадок растворяют в 95% растворе этанола с водой (по объему), и после прибавления до примерно 20 мл силикагеля, растворитель удаляют в вакууме. Сухую двуокись кремния наносят на верхнюю часть колонки с силикагелем (2,8 X 50 см), и полученный продукт элюируют смесью метанол: хлороформ (5 ; 95, по всему объему). Фракции, содержащие только продукт, соединяют, а растворитель удаляют в вакууме Осадок повторно растворяют в этаноле и фильтруют через 0,22 мкм фильтр. После удаления большей части этанола и прибавления примерно 25 мл воды, полученное вещество лиофилизуют с выходом 0,088 г 6-иодопурин-9-/3-0-2 , З -дидеоксирибофу- ранозида, который анализируют как 0,2 гидрат (т.пл. 151 - 153°С).

Вычислено, %:С35,15; Н 3,46; N 15,77.

СюНц1 ЬЮ2 0,2 Н20

Найдено %: С 35,31; Н 3.31; N 15,83.

Примерб. 6-Циклопропилметилами- нопурин-9-/3-0-2 , З -дидеоксирибофуранозид.

6-Циклопропилметиламинопурин получают нуклеофильным замещением хлорной группы 4 6-хлоропурина (Sigma Chemicals, St Louis МО) аминогруппой цик- лопропилметиламина (Sigma Chemicals, St Louis МО) 6-циклопропилметиламинопу- рин (2,64 ммоль, 0,50 г) растворяют в 5 мл диметилформамида. После охлаждения до комнатной температуры прибавляют з -де- окситимидин (3,98 ммоль, 0,90 г) вместе с 30 мл 10 мМ калийфосфатного буфера с рН 6,8, содержащего 0,04% азид калия. Прибавляют очищенную тимидинфосфорилазу (10,000м.ед)ипуриннуклеозидфосфорилазу (20,000 м.ед.), абсорбируемых в 10 мл DEAE целлюлозе (Whatman). Полученную суспензию перемешивают при 35°С. Через 8 часов реакционную смесь фильтруют, фильтрат наносят на систему из сопряженных колонок. В первой колонке находится смола AG- I-X2 (ОН-форма), 2,5 х 10 см, в то время как во второй колонке - амберлитовая смола XAD-2 (2,5 х 20 см). После нанесения образца колонку промывают 500 мл воды и продукт элюируют метанолом. Затем продукт подвергают флэшхроматографии в колонке с силикагелем, 5 х 20 см, используя смесь хлороформ: метанол (9 : 1 по объему). Растворитель удаляют в вакууме, и полученную смолу помещают во флакон с ацетоном. После лиофилизации получают 0,588 г 6-цикло- пропилметиламинопурин-9-/3-0-2 , 3-дидеоксирибофуранозида, который ана- лизи- руют как 0,15 воды и 0,15 ацетона.

Вычислено, %: С 57,71, Н 6,77; N 23.29.

CnHigNsOa 0,15Н2-0,15СзН60

Найдено, %: С 57,73, Н 6,94; N 23,39

П р и м е р 7. 6-Изопропиламинопурин- 9-/3-D-21, З -дидеоксирибофуранозид.

Синтез 6-изопропиламинопурин-9-/2-0- 21, з -дидеоксирибофуранозида осуществляют по методике примера 1, за исключением того, что 6-изопропиламинопурин (приготовленный из 6-хлоропурина, Sigma Chemicals. St Louis МО и изопропиламина) растворяют в 5 мл каждого из диметилформамида и диметилсульфоксида.

После лиофилизации, 6-изопропилами- нопурин-9- -0-21, з -дидеоксирибофурано- зид(0,52 г) анализируют как 0,2 гидрат(т.пл. 55 - 57°С)

Вычислено, %: С 55,58; Н 6,96; N 24,93.

Ci3Hi9N502 0,2Н20.

Найдено, %: С 55,54; Н 6,96; N 25,01.

ПримерЗ. Тиамиприн-9-/Ј-О-2 , з -ди- деоксирибофуранозид

Тиамиприн (Burroughs Wellcome Co, Research Triangle Park NC) (0,05 г) растворяют в 2,5 мл диметилсульфоксида и 15 мл диметоксиэтана и смешивают с 3 -диокситимиди- ном (0,8 г) в 30 мл калийфосфатного буфера с рН 6,8. Прибавляют очищенную тимидинфосфорилазу (1600 м.ед.) и пуриннуклеозидфосфорилазу (70,000 м.ед.) и полученную суспензию перемешивают при 35°С. Через 96 часов реакционную смесь фильтруют и объем сгущают в вакууме до сиропа Прибавляют воду (25 мл) и раствор выдерживают в течение ночи при 3°С. Преципитат собирают фильтрацией, затем суспендируют в 5 мл диметилформамида и фильтруют. К фильтрату прибавляют 15 мл метанола, а затем раствор выдерживают при температуре - 20°С. Через 5 дней твердое вещество собирают фильтрованием, растворяют в 65% растворе метанола с водой (по объему) и хроматографируют на гидроксидной смоле AG-I-X2. Продукт элюируют 65% раствором метанол: вода (по объему). После удаления растворителя в вакууме, твердое вещество растворяют в 20 мл смеси хлороформ: метанол (9 : 1) и хроматографируют на пластинке из силикагеля (3 х 50 см), доведенной до равновесного состояния смесью хло- роформ:метанол (9 : 1 по объему). Продукт- содержащие фракции объединяют и растворитель удаляют в вакууме. Остаточный сили- кагель выделяют из продукта растворением

в 95% растворе этанола с водой( по объему) и фильтруют через 0,22 мкм фильтр, Этанол упаривают, и прибавляют примерно 200 мл воды. Полученную суспензию лиофили- зуют с выходом 0,056 г тиэмиприн-9-/5-0-2,

3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют как 0,4 гидрат, содержащий 0,7 эквивалентов метанола (т.пл. 130°С, частичное плавление при 110°С).

Вычислено, %: С 41,84; Н 4,68; S7,60;N

26,55.

Ci4Hi6SNeO/rO,4H20 -OJCH40 Найдено, %: С 41,93; Н 4,43; S 7,48; N 26,34,

П р и м е р 9. 2-Амино-6-н-пропоксипуРИН-9-/5-0-21, 3 -дидеоксирибофуранозид.

(0,21 г) 2-амино-6-н-пропорксипурина (полученного нуклеофильным замещением хлорной группы в 2-амино-6-хлороприне (Aldrich Chemical Co, Milwaukee Ti) алкоксильным анионом при реакции между гидридом натрия и пропанолом и (0,29 г) 3 -деокситимидина соединяют в 100 мл калий- фосфатного буфера, рН 6,8, содержащего 0,04% азида калия. Прибавляют очищенную

тимидинфосфорилазу (1200 м.ед.) и пурин- нуклеозидфосфорилазу (8400 м.ед) и полученную суспензию перемешивают при 35°С. Через 48 часов реакционную смесь фильтруют, фильтрат хроматографируют на

колонке с гидроксильной смолой AG-I-X2 (2х х 25 см), Полученный продукт элюируют 90% раствором метанола с водой (по объему). Растворитель удаляют в вакууме, и остаток растворяют в метаноле. Прибавляют 10 мл сухого силикагеля, и метанол удаляют в вакууме. Высушенный силикагель наносят на колонку с силикагелем (2,5 х 30 см), доведенную до равновесного состояния в смеси хлороформ: метанол (9 : 1), которая также является растворителем для элюирования. Фракции, содержащие только целевой продукт, соединяют, а растворитель удаляют в вакууме. Остаточный силикагель удаляют, а продукт высушивают согласно примеру 8. Получают 0,132 г 2-амино-6-н-пропоксипу- рина-9-/3-О-2 , З1--дидеоксирибофуранози- да, который анализируют как 0,2 гидрат (т.пл. 70°С),

Вычислено, %: С 52,91; Н 6,56; N 23,73.

Ci3HigN503 0,2Н20

Найдено, %: С 52,52; Н 6,62; N 23,49.

П р и м е р 10. 6-Этилтиопурин-9-/3-О-2 , З -дидеоксирибофуранозид (5,5 ммоль, 1 г) 6-этилтиопурина, полученного от Sigma Chemicals Co, St Louis МО (4,47 ммоль) З1- деокситимидина, суспендируют в 50 мл 15 мМ калийфосфатного раствора с рН 7,2. Прибавляют очищенные тимидинфосфо- рилазу (7890 м.ед.) и пуриннуклеозид- фосфорилазу (1980 м.ед.) и суспензию перемешивают при 35°С. Через 144ч реак- ционную смесь фильтруют и фильтрат выдерживают при - 20°С. После размо- раживания фильтрат доводят до рН 10,7 гидроксидом аммония и хроматографируют на колонке со смолой из доуэкса-1-формиата (2,5 х 8 см). Затем элюируют 30% раствором н-пропанола с водой (по объему). Фракции, содержащие продукт объединяют, а растворитель удаляют. Остаток растворяют в 30% растворе н-пропанола с водой (по объему) и хроматографируют на колонке (50 х 30 см) Bio Rad P - 2. Продукт элюируют из колонки 30% раствором н-пропанола с водой (по объему). Продуктсодержащие фракции объ- единяют, а растворитель упаривают в вакууме с выходом 0,427 г 6-этилтиопурин- 9-/J-D-21. з -дидеоксирибофуранозида, кото- рый анализируют как 0,5 гидрат.

Вычислено, %: С 49,81; Н 5,92; N 19,36; S 11,44.

CiaHi6SN402 0,5Н20.

Найдено, %: С 49,63; Н 5,96; N 19,28; S 11,06.

Данные ЯМР:с58,71 /с, 1Н, На/.8,67/с, 1Н, Н2/, 6,33 /тр. 1Н, H /M 4,1/, 2Н, ОН,

HV/3.4-3.6/M.2H.51 СН2/. 1.8-2.4/М.4Н, 2 иЗ1 СН2/ 1,5/тр. ЗН. СНз/.

П р и м е р 11. 2-Амино-6-бензилтиопу- рин-9- -0-2 , 3 -дидеоксирибофуранозид. 2-Амино-6-бензилтиопурин (1,9 ммоль. 0,5 г), полученный от Sigma Chemicals. Co. St Louis МО, и 3-деокситимидин (2,0 ммоль, 0,543 г) растворяют в 20 мл 10 мМ калий-фосфатного буфера, рН 7 , содеражащего 0,04% азид калия. Прибавляют очищенные тими- динфосфорилазу (2,000 м.ед.) и пуриннукле- озидфосфорилазу (2,900 м.ед.) и полученную суспензию перемешивают при 35°С. Через 3 дня прибавляют 80 мл 10 мМ калийфосфатного буфера, рН 7. Через день реакционную смесь фильтруют. Полученную лепешку растворяют в 90% растворе метанола с водой (по объему), фильтруют, фильтрат хроматографируют на колонке 2,5 х 10 см с дауэкс-1-гидроксидом. Продукт элюируют из колонки 90% раствором метанола с водой (по объему). Фракции, содержащие продукт, объединяют и после лиофилизации получают 0,086 г 2-амино-6-бензилтиопу- рин-9-/3-0-2 , з -дидеоксифуранозида.

Вычислено, %: С 57,13; Н 5,36; N 19,59; S 8,97.

C17H19SH502

Найдено, %: С 57,02; Н 5,39; N 19,51; S 8,89.

Данные ЯМР: б 8,18 / С, 1Н, Не/7,3 /м, 5Н,0/, 6,6 /с, 2Н, NH2/, 6,08/ дд. 1Н1 /, 4,93 / шир. 1Н 5 ОН/, 4,45 /шир. 2Н, СН2/, 4,08 /м, 1Н, 4HV/, 3,43 - 3,65/м, 2Н 2,35/м, 2Н, 2 СИ2/ 2,0 /м. З1 СН2/

П р и м е р 12. 6-Этоксипурин-9-/2-0-2 , З -дидеоксирибофуранозид

6-Этоксипурин (3,0 ммоль, 0,5 г Sigma. Chemicals Co, St Louis М0)и 3-деокситимидин (3,3 ммоль 0,75 г) суспендируют в 25 мл 10 мМ калийфосфатного буфера с рН 6,8, содержащего 0,04% азид калия. Прибавляют очищенные тимидинфосфорилазу (800 м.ед.) и пуриннуклеозидфосфорилазу (1200 м.ед.) и полученную суспензию перемешивают при 35°С. Через 24 часа прибавляют 85 мл 10 мМ калийфосфатного буфера, рН 6,8 и реакционную смесь перемешивают в течение 5 дополнительных дней при 35°С. Выделившийся осадок выделяют фильтрованием и фильтрат хроматографируют на колонке 2,5 х 10 см с дауэкс-1-гидроксидом. Полученный продукт элюируют 90% раствором метанола с водой (по объему), и фракции, содержащие указанный продукт, объединяют. После удаления растворителя в вакууме растворяют в 30% растворе н-пропанола и воды (по объему) и хроматографируют на колонке со смолой Bio Rad P-2.

Фракции, содержащие продукт, объединяют и после лиофилизации получают 0,225 г б-этоксипурин-9-/3-0-2 , з -дидеоксирибофу- ранозида, который анализируют 0,15 гидрата.

Вычислено. %: С53.68; Н 6,15; N 20,98.

(изНпМбОг 0,15 Н20

Найдено, %: С 54,05; Н 6,15; N 20,88.

Данные ЯМР: д 8,6 /с, 1Н, Не/, 8,5 / с, 1Н, Н2/, 6,3 /дд, 1Н, Hi /, 4,97 / тр. 1Н, 51 ОН/, 4,6 /м. 2Н,-СН2-/, 4,1 /м, 1 Н, , 3,53 /м, 2Н- б СН2/. 2,41 /м, 2Н 21 СН2/, 2,03 /м, 2Н. З1 СН2/, 1,4/тр. ЗН, J 0,035 Гц, СНз/.

П р и м е р 13. 6-Диметиламинопурин-9- /J-D-21, з -дидеоксирибофуранозид

6-Диметиламинопурин (6,13 ммоль, 1 г Sigma Chemicals Co, St Louis МО) и 3-деок- ситимидин (4,44 ммоль, 1 г) суспендируют в 50 мл 1Р мМ калийфосфатном буфере рН 7,0, содержащего 0,04% азида калия. Прибавляют очищенные тимидинфосфорилазу (2000 м.ед.) и пуриннуклеизидфолсфорилазу (3000 м.ед.) и полученную суспензию перемешивают при 35°С. Через 120 часов реакционную смесь фильтруют и фильтрат хроматографируют на колонке со смолой из дауэкс-1-плдроксида (2,5 х 8 см), используя в качестве элюента 90% раствор метанола и воды (по объему). Фракции, содержащие указанный продукт, объединяют, а растворитель удаляют в вакууме. Остаток растворяют в 25 мл 30% раствора н-пропанола и воды (по объему) и хроматографируют на колонке со смолой Bio Rad P-2 с водой (по объему). Фракции, содержащие продукт, объединяют, а растворитель удаляют в вакууме. Остаток растворяют в 30 мл деионизо- ванной воды и хроматографируют на колонке с сефадексов G-10 (5 х 90 см). В- качестве элюента используют воду. Соответствующие фракции объединяют и после лиофилизации получают 6-диметиламино- пурин-9-/ -0-2 , 3 -дидеоксирибофуранозид, который анализируют как 0,3 гидрат (т.пл. 162°С)

Вычислено, %:С 53,64; Н 6.60; N 26,06 Ci2HiyN502 0,ЗН20 Найдено, %: С 53. 63; Н 6,63; N 25,8. Пример14. 6-Гидрооксиэтиламинопу- рин-9-уЗ-0-2 , З -дидеоксирибофуранозид.

6-Гидроксиэтиламинопурин (2,8 ммоль, 0,5 г, Sigma Chemicals Co, St Louis МО) и 3-деокситимидин (3,30 ммоль, 0,76 суспендируют в 75 мл 10 мМ калийфосфатного буфера, рН 6,8. содержащего 0,04% азида калия. Прибавляют очищенные тимидин- фосфоридазу (400 м.ед.) и пуриннуклеозид- фосфорилазу (700 м.ед.) и полученную суспензию перемешивают при 35°С. Через 8 дней добавляют 600 м.ед. тимидинфосфорилазы и 1050 м.ед. пуриннуклеозидфосфо- рилазы. Через день реакционную смесь фильтруют и фильтрат наносят на колонку 2,5 х 10 см, с дауэкс-1-гидроксидом. Указанный продукт элюируют метанолом. Фракции, содержащие продукт, объединяют и упаривают в вакууме. Остаток затем наносят на колонку 2,5 х 50 см с силикагелем и элюируют под давлением смесью хлороформ;метанол (8 : 2). Фракции, содержащие продукт, объединяют и после лиофилизации получают 6-гидроксиэтиламинопурин-9-/ - D-2 , З -дидеоксирибофуранозид, который анализируют как 0,65 гидрат (т.пл. 153°С).

. Вычислено, %: С 49,53; Н 6,34; N 24,7. Ci2Hi N405 0,65Н20 Найдено, %: С 49,83; Н 6,07; N 23,7. П р и м е р 15. 6-Циклопропиламинопу- PHH-9-/J-D-2 , 3 -дидезоксирибофуранозид.

6-Циклопропиламинопурин (полученный из 6-хлоропурина (Sigma Chemicals Co, St Louis МО) и циклопропиламина) (2,86 ммоль, 0,5 г) и 3-деокситимидин (4,30 ммоль, 1 г) растворяют в 10 мл смеси диметилсульфоксид: N, М-диметилформамид (1 : 1) и далее разбавляют 30 мл 10 мМ калий- фосфатного буфера с рН 6,8, содержащего 0,04% азида калия. Прибавляют тимидинфосфорилазу (10,000 м.е.) и пуриннук- леозидфосфорилазу (20,000 м.ед.), абсорбируемые в 10 мл DEAE-смолы (Whatman), и полученную суспензию пере: мешивают при 35°С. Через 8 ч реакционную смесь фильтруют, и затем фильтрат наносят

на систему из сопряженных колонок. Первая колонка заполнена дауэкс-1- гидрокси- дом (2,5 х 10), в то время как вторая колонка содержит амберлитовую смолу XAD-2 (2,5 х х20). После нанесения образца колонки промывают большим объемом воды и полученный продукт элюируют метанолом. Фракции, Содержащие указанный продукт, соединяют и после лиофилизации получают 0.54 г 6-циклопропиламинолурин-9-/3-0-2 ,

3 -дидеоксирибофуранозид, который анализируют как 0,55 гидрат (т.пл, 63 - 65°С). Вычислено, %: С 54,75; Н 6,40; N 24,55. Ci3Hi N202 0,55Н2О Найдено, %: С 54,67; Н 6,43: N 24,57.

П р и м е р 16. 6-Циклопропиламинопу- рин-9-/ -0-2 , З -дидеоксирибофуранозид,

6-Циклопентиламинопурин (полученный из 6-хлоропурина Sigma Chemicals, St LouisMOn циклопентамиламина) (2,49 ммоль

0,56 г) растворяют в 5 мл М, М-диметилфор- мамида и 5 мл диметилсульфоксида. Прибавляют 3 -деокситимидина (3,94 ммоль, 0,894 г) вместе с 30 мл 10 мМ калийфосфатного буфера, рН 6,8, содержащего 0,04% азида

калия. Уксусной кислотой рН доводятдо 6,8. К реакционной смеси прибавляют очищенные тимидинфосфорилазу (10,000 ед.) и пу- риннуклеозидфосфорилазу (20,000 м.ед,), соединенные с DEAE-целлюлозой (Whatman). Полученную суспензию перемешивают при 35°С в течение 8 ч, фильтруют и фильтрат выдерживают при 20°С в течение ночи. После оттаивания фильтрат наносят на колонку 2,5 х 10, наполненную дауэкс-1-гид- роксидной смолой. Продукт элюируют водой. Фракции, содержащие продукт, объединяют и хроматографируют на колонке, содержащей смолу XAD-2 (2,5 - 20 см). Затем продукт элюируют 350 мл воды, а далее метанолом. Фракции, содержащие продукт, растворяют в воде и после лиофилизования получают 0,459 г 6-циклопентиламинопу- рин-2 ,3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,05 гидрата (т.пл. 88°С).

Вычислено, %: С 59,21; Н 6,99; N23,02.

Ci5H2iN502 0,05Н20

Найдено, %: С 59 24; Н 7,05; N 22,95.

Пример17. 2-Амино-6-метоксипурин- 9-/2-D-21, з -дидеоксирибофуранозид.

2-Амино-6-метоксипурин (3,0 ммоль, 0,5 г полученного из 2-эмино-6-хлорпурина (Aldrlch Chemical Co, Milwaukee Wl и мета- нола), и 3-деокситимидин (4,50 ммоль, 1 г) растворяют в 10 мл смеси диметилсульфок- сид 11,11-диметилформамид 1 :1 с последующим разбавлением 30 мл 10 мМ калийфосфатного буфера с рН 6,8, содержащего 0,04% амида калия. К реакционной смеси прибавляют очищенные тимидинфосфорилазу (10,000 м.ед.) и пуриннуклеозид- фосфорилазу (20,000 м.ед.), абсорбируемые на 10 мл DEAE-смоле, и полученную суспензию перемешивают при 35°С. Через 8 ч ре- акционную смесь фильтруют и фильтрат наносят на колонку 2,5 х 10см, содержащую доуэкс - 1-гидроксид. Фракции, содержащие продукт, сгущают и доводят до объема 70 мл. Указанную пробу наносят на колонку 2,5x20 см, заполненную амберлитовой смолой XAD-2. Колонку промывают большим объемом воды, а продукт элюируют метанолом. Фракции, содержащие продукт, объединяют и после лиофилизования получают 2-амино-б-метоксипурин-9-/3-О-2 , 3 -дидеоксирибофуранозида.

Вычислено, %: С 49.81; Н 5,70; N26,40;

CiiHi5N50.j

Найдено, %: С 49,70; Н 5,72; N 26,34.

П р и м е р 18. 6-н-Пропоксипурин-9-/ - D-21, 3-дидеоксирибофуранозид.

6-н-Пропоксипурин (0,5 г, 2.8 ммоль Sigma Chemicals Co. St Louis МО) и 3-деокситимидин (0,96 г. 4,2 ммоль) раглвоояют в 5 мл диметилсульфоксида и 5 мл N. N-диме- тилформамида. В реакционную смесь прибавляют 30 мл ММ калийфосфатного буфера, рН 6,8,содержащего 0,04% азида калия, и очищенные тимидинфосфорилаэу (10,000 м.ед.) и пуриннуклеозидфосфорила- зу (20,000 м.ед.), абсорбируемые в 10 мл DEAE-целлюлозной смоле, и полученную суспензию перемешивают при 35°С в течение 7 ч. Смолу удаляют из реакционной смеси центрифугированием и надосадочную жидкость наносят на колонку со смолой AGI- Х2 (ОН форма), 2,5 х 10 см, соединенную с колонкой на смоле XAD-2, 2,5 х 20 см. Указанные колонки промывают 500 мл воды и полученный продукт элюируют метанолом. Продукт разделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем, Зх 50 см. используя смесь хлороформ: метанол (9 : 1 по объему). После лиофилизации получают 0,554 г 6-н-пропоксипурин-9-/Н 2 , З -дидеоксири- бофуранозида, который анализируют в виде 0,3 гидрата.

Вычислено, %: С 55,04; Н 6,61; N 19,75;

Ci3Hi8N403 0,ЗН20

Найдено, %: С 55,05; Н 6,61; N 19,72

Пример19. 6-н-Бутоксипурин-9-/ -0- 2 ,-3 -дидеоксирибофуранозид

6-н-Бутоксипурин (0,5 г 2,6 ммоль, Sigma Chemicals Co, St Louis МО) и 3-деокситимидин (0,70 г, 3,1 ммоль) суспендируют в 100 мл 10 мМ калийфосфатного буфера рН 6,98, содержащего 0,04% азида калия. К реакционной смеси прибавляют очищенные пуриннуклеозидфосфорилазу (3,500 м.ед.) и тимидинфосфорилазу (800 м.ед.) и полученный раствор перемешивают при 32°С. Через 7 дней реакционную смесь фильтруют и фильтрат наносят на колонку, содержащую смолу AG-I-X2 (ОН-форма) 2,5 х 10 см. Продукт элюируют 90% водным раствором метанола. Растворитель удаляют в вакууме из указанного продукта и остаток разделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем, 2,5 х 80 см, используя смесь хлороформ: метанол (8,2 по объему). Продукт растворяют в воде и наносят на колонку, содержащую смолу XAD-2. 2.5 х 20 см. Колонку промывают 500 мл воды, а затем метанолом. После лиофилизации получают 0,276 г б-н-бутоксипурин-д- О 1, З1-дидеоксирибофуранозида (т.пл. 55°С).

Вычислено, %: С 57,72: Н 6,90: N 19,17. CuH2oN j03

Найдено, %: С 57,86; Н 7,29; N 18,83. Пример 20. 6-Циклопропилметокси- пурин-9-у9-0-2 , 3 -дидеоксирибофуранозид.

6-Циклопропилметоксипурин получают нуклеофильным замещением хлорной группы у 6-хлорпурина (Sigma Chemicals Co, St Louis МО) алкоксильным анионом, образованным при взаимодействии гидрида и цик- лопропилметилового спирта.

б-Циклопропилметоксипурин (0,505 г, 26,5 ммоль) и 2,3-дидеокситимидин (0,908 г, 40,1 ммоль) подвергают взаимодействию и разделению на смоле AG I-X2 (ОН-форма) и XAD-2, как описано в примере 18. Фракции, содержащие продукт, разделяют флэш-хроматографией в колонке с силикагелем, 3 х 50 см, используя смесь ацетонитрил : вода (98 : 2, по объему). После лиофилизации получают 0,496 г 6-циклопропилметоксипу- РИН-9-Д-О-21, З -дидеоксирибофуранозида , Вычислено, %: С 57,92; Н 6,25; N 19,30. С14Н1в№Оз

Найдено, %: С 57,99; Н 6,28; N 19,27, Пример21. 6-Циклопентилоксипурин- 9-/5-D-21, З -дидеоксирибофуранозид.

6-Циклопентилоксипурин получают нуклеофильным замещением хлорной группы у 6-хлорпурина (Sigma Chemicals Co, St Louis М0)лкоксильным анионом, полученном при взаимодействии гидрида натрия и циклопентанола.

6-Циклопентилоксипурин (0,506 г 2,48 ммоль) и 3-деокситимидин (0,856 г, 3,78 ммоль) подвергают взаимодействию и разделяют на смоле AG-I-X2 (ОН-форма) и XD-2 по методике примера 18. Растворитель удаляют в вакууме из фракций, содержащих продукт, и остаток разделяют флэш-хрома- тог рафией на колонке с силикагелем, 3 х 50 см, используя смесь хлороформ: метанол (95 : 5, по объему). После лиофилизации вы-, ходит 0,385 г б-циклопентилоксипурин-9-/3- D-2 , 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,15 гидрата.-

Вычислено, 58,68; Н 6,66; N 18,257 С15Н2о№Оз 0,15Н20 Найдено, %: С 5 8,61; Н 6,53; N 18,25. П р и м е р 22, 6-Циклогексилоксипурин- 9-/2-D-21, з -дидеоксирибофуранозид.

6-Циклогексилоксипурина получают нуклеофильным замещением хлорной группы в 6-хлорпурине (Sigma Chemicals,- St Louts МО) алкоксильным анионом, образуе- мым при взаимодействии между гидридом натрия и циклогексанолом.

6-Циклогексилоксипурин (0,50 г, -2,29 ммоль) и 3-деокситимидин (0,776 г, $А2 ммоль) хроматографируют на колонке со смолой AG-I-X2 (ОН-форма) и XAD-2 по методике, описанной в примере 18, за исключением того, что дополнителььно к 5 мл диметилсульфоксида и 5 мл N, N-диметилформамида прибавляют 10 мл глима и используют 70 мл 10 мМ калийфосфатного буфера, рН 6,8, содержащего 0,04% калийазида. После лиофилизации выходит 0,102 г 6-циклогексилоксипурин-9-/3-0-2 , З1- дидеоксирибофуранозида (т.пл. 105°С), который анализируют в виде 0,2 гидрата.

Вычислено, %: С 59,59; Н 7,01; N 17,40.

С1бН22М4Оз 0,2Н20.

Найдено. %: С 59,69; Н 6,93; N 17,27.

П р и м е р 23.6-Циклобутиламинопурин- 9-/3-D-21, З -дидеоксирибофуранозид.

6-Циклобутиламинопурин (0,510, 2,62 ммоль) и 3-деокситимидин (0,896 г, 3,96 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографируют на колонке со смолой AG-I-X2 (ОН- форма) и смолой XAD-2 по методике, описанной в примере 18. Растворитель удаляют из фракций, содержащих продукт, и остаток разделяют флэш-хроматографией на колонке со силикагелем, 3 х 50 см, используя смесь хлороформ: метанол (9 ; 1). После лиофилизации выходит 0,524 г 6-цик- лобутиламинопурин-9-уЗ-О-2 , з -дидеокси- рибофуранозида (т.пл. 96 - 98°С).

Вычислено, %: С 58,12; Н 6,62; N 24,20.

C14H19N502

Найдено, %: С 58,19; Н 6,65; N 24,16.

Пример 24. 6-Диэтиламинопурин-9- /3-D-21, З1 -дидеоксирибофуранозид.

б-Диэтиламинопурин получают нуклеофильным замещением хлорной группы в 6- хлорпурине (Sigma Chemicals, St Louis МО) аминогруппой диэтиламина.

6-Диэтиламинопурин (0,24 г,1,28 ммоль) и 3-деокситимидин (0,463 г, 2,04 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографируют на колонке с AG-I-X2 (ОН-форма) и XAD-2 по методике, описанной в примере 18. Растворитель удаляют в вакууме из фракций, содержащих продукт, а остаток разделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем, 5 х 20 см, используя хлороформ, метанол (9 : 1 по объему). Растворитель удаляют в вакууме из фракций, содержащих продукт, и остаток разделяют флэш-хроматографией на второй колонке с силикагелем 2,5 х 50 см, используя этилацетат. Полученную смолу помещают во флакон с ацетоном и после лиофилизации получают 0,98 г б-диэтиламинопурин-9- -D- 2 з -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,25 воды и 0,20 ацетона.

Вычислено, %: С 57,03; Н 7,44; N 22,78.

Ci4H2iNs02 0.2СзНеО 0,25Н20

Найдено, %: С 57,20; Н 7,39; N 22,72.

П р и м е р 25. 6-Пирролидинпурин-9-/ - D-2 , 3 -дидеоксирибофуранозид.

6-Пирролидинпурин получают нуклео- фильным замещением хлорной группы в 6- хлорпурине аминогруппой пирролидина.

6-Пирролидинпурин (0,500 г, 2,64 ммоль) и 3 -диокситимидин (0,901 г, 3,98 ммоль) растворяют в смеси из 5 мл диметил- сульфоксида и 5 мл N, N-диметилформами- да. В реакционную смесь прибавляют 30 мл 10 мМ калийфосфатного буфера, рН 6,8, содержащего 0,04% азида калия, и очищенные пуриннуклеозидфосфорилазу (20,000 м.ед.) и тимидинфосфорилазу (10,000 м.ед.), асборбируемые в 10 мл DEAE-целлюлозной смолы,и затем перемешивают в течение 7 дней при 35°С. Смолу удаляют центрифугированием и надосадочную жидкость наносят на колонку со смолой AGI-X2 (ОН-форма), 2,5 х 10 см, которая соединена с колонкой, заполненной XAD-2, 2,5 х 20 см, Колонки промывают 500 мл воды и полученный продукт элюируют метанолом. После лиофилизации выходит 0,385 г 6-пирроли- динпурин-9-/5-0-2 , з -дидеоксирибофурано- зида, который анализируют в виде 0,05 гидрата (т.пл, 158- 159°С).

Вычислено, %: С 57,93; Н 6,63; N 24,13.

Ci4Hi9N502 0,05Н20

Найдено, %: С 57,92; Н 6,67; N 24,11

П р и м е р 26. 6-Морфолинопурин-9-/3- D-21, 3 -дидеоксирибофуранозид

6-Морфолинопурин получают нуклео- фильным замещением хлорного радикала в 6-хлорпурине (Sigma Chemicals, St Louis МО) аминогруппой морфолина.

6-Морфолинопурин (0,501 г, 2,44 ммоль) 3 -деокситимидин (0,842 г, 3,72 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографи- руют на колонке с AGI-X2 (ОН-форма) и XAD-2 по методике, описанной в примере 18. После лиофилизации выходит 0,292 г 6- морфолинопурин-9-/2-0-2 , 3 -дидеоксири- бофуранозида, который анализируют в виде 0,2 гидрата (т.пл. 97°С)

Вычислено, %: 54,43; Н 6,33; N 22,67.

СмЖэМбОз 0,20 НаО

Найдено. %: С 54,48; Н 6,28; N 22,52.

П р и м е р 27. 6-у, у-Диметилаллилами- нопурин-9-/3-О-2 , з -дидеоксирибофурано- зид.

6-у, у-Диметилаллиламинопурин (0,500 г, 2,46 ммоль Sigma Chemicals, St Louis МО) 3 -диокситимидин (0,752 г, 3,32 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографи- руют на колонке со смолой AGI-X2 (ОН-форма) по методике, описанной в примере 18. Растворитель удаляют в вакууме из фракций, содержащих продукт, а остаток разделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем. 3 х 50 см. используя смесь

хлороформ; метанол (95 . 5, по объему) Фракции, содержащие продукт, зятем наносят на колонку с XAD-2, 2.5 х 20 см. и элюируют из метанола. Полученную смолу помещают во флакон с ацетоном и после лиофилизации получают 0.455 г 6-у у-диме- тилэллиламинопурин-9-/3-В-2 . 3 -дидеокси- рибофуранозида, который анализируют в виде 0,45 воды и 0,20 ацетона.

Вычислено, %: С 57,99; Н7,21; N21,68 Ci5H2iN502 0,45Н20 0,2С3НбО Найдено, %: С 57,77; Н 6,91, N21.41. П р и м е р 28. 6-Фурфуриламинопурин- 9-/J-D-21, З -дидеоксирибофуранозид.

6-Фурфуриламинопурин (0,50%. 2,33 ммоль) (Sigma Chemicals, St Louis МО) и 3-деокситимидин (0,754 г,0 3,33 ммоль). подвергают взаимодействию и хроматогра- фируют на колонке с AGI-X2 (ОН-форма) и

колонке с XAD-2 по методике, описанной в примере 18. Растворитель удаляют в вакууме из фракций, содержащих продукт, и остаток разделяют флэш-хроматографией в колонке с силикагелем, 5 х 50 см, используя

смесь хлороформ: метанол (9 1, по объему). После лиофилизации выходит 0,303 г 6-фур- фуроламинопурин-9-/ -О-2 , 3 -дидеоксири- бофуранозида, который анализируют в виде 0.2 гидрата.

Вычислено. %: С 56,49; Н 5,50. N 21.96

CisHi7N503 0.2Н20 Найдено, %: С 56,50; Н 5,53; N 21,97. П р и мер 29. 6-Бензилмеркаптопурин- 9-/3-D-21, з -диде9ксирибофуранозид

6-Бензилмеркзптопурин (0,501 г 2,7

ммоль, Sigma Chemicals, St Louis МО) и 3- деокситимидин (0,704 г, 3,11 ммоль) подвергают взаимодействию по методике, описанной в примере 18, за исключением

того, что для растворения пуринового основания используют 10 мл глима. Растворитель удаляют в вакууме из фракций, содержащих продукт, и остаток разделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем, 3 х 50 см, используя смесь хлороформ: метанол (95 : 5, по объему) Полученный продукт помещают во флакон с этанолом и после лиофилизации получают 0,304 г 6-бензилмеркаптопурин-9-/3-0-2 ,

3-дидеоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0.05 воды и 0,05 этанола (т.п/i. 81 -83°С)

Вычислено, %: С 59.43 Н 5 37: N 16,31; 39,28.

Ci7Hi8N402S 0.05Н20 O.OSCaHeO

Найдено, %: С 59.49; Н 5,38, N 16,32, S 9,30.

П р и м е р 30. 6-Анилинопурин-9-/ -0-2 . 3 -дидеоксирибофуранозид

6-Анилинопурин (0,500 г, 2,37 ммоль, Sigma Chemicals, St Louis МО) и 3-деоксити- мидин (0,752 г 3,32 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографируют на колонке с AGI-X2 (ОН-форма) по методике, описанной в примере 18. Растворитель удаляют в вакууме из фракций, содержащих продукт и остаток разделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем 2,5 х 50 см, используя смесь растворителей хло- форм: метанол (95 : 5. по объему). После лиофилизации получают 0,470 г 6-анилино- пурин-9-/5-0-2 , з -дидеоксирибофуранози- да, который анализируют в виде 0,05 гидрата (т.пл, 170 - 172°С),

Вычислено, %: С 61,55; Н 5,52; N 22,43. C16H17N502 0.05Н20 Найдено, %: С 61,57; Н 5,55; N 22,43. П р и м е р 31. 2-Амино-6-этоксипурин 9-yS-D-2 , з -дидеоксирибофуранозид.

2-Амино-б-этоксипурин (0,5 г, 2.8 ммоль, полученный нуклеофильным замещением хлорной группы в 2-амино-б хлорпурина, (Aldrich Chemical Co, Milwaukee Wi) алкок- сильным анионом в результате взаимодей- ствия гидрида натрия и этанола) и З -деокситимидин (0,950, 4,19 ммоль), подвергают взаимодействию и хроматографируют на колонках с AGI-X2 (ОН-форма) и XAD-2 по методике, описанной в примере 18. Растворитель удаляют в вакууме из фракций, содержащих продукт, а остаток разделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем, 5x20 см, используя смесь хлороформ: метанол (9 :1, по объему). После лиофилизации получают 0,443 г 2 -амино-6- этоксипурин-9-/2-О-2 , З -дидеоксирибофу- ранозида, который анализируют в виде 0,3 гидрата (т.пл. 150°С, частичное плавление при 65°С).

Вычислено, %: С 50,63; Н 6,23; N 24,60. Ci2Hi7N503 0,ЗН20 Найдено, %: С 50,77; Н 6,21; N 24,63. П р и м е р 32. 2,6,8-Триаминопурин-9- /3-D-2 , 3 -дидеоксирибофуранозид.

2,6,8-Тиаминопурин (0,500 г, 3,0 ммоль) и 3-доекситимидин (1,02 г, 4.50 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографируют на колонках с AGI-X2 (ОН-форма) и XAD-2, как описано -в примере 18. После лиофилизации выходит 0,148 г2,6,8-триами- нопурин-9-/3-0-2 , 3 -дидеоксирибофурано- зида, который анализируют в виде 0,7 метанола (т.пл. 154°С).

Вычислено, %: С 44,76; Н 6,24; N 34,08. CroHisNyOa 0.7СН40 Найдено, %: С 44,51; Н 5,95; N 33,78. Пример 33. 2-Амино-6-бензиламино- пурин-9-/2-0-2, З -дидеоксирибофуранозид.

2-Амино-6-бензиламинопурин (0.2 г, 0,8 ммоль), полученный нуклеофильным замещением хлорного радикала в 2-амино-6- хлорпурине (Aldrich Chemical Co, Milwaukee WI бензиламином) и 3 -деокситимидин (0,282 г, 1,2 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографируют на колонках с AGI-X2 (ОН-форма) и XAD-2 - по методике, описанной в примере 18, за исключением того, что используют меньшее количество пуриннукулеозидфосфорилазы (10,000 м.ед.) и тимидинфосфорилазы (5,00 м.ед.), После лиофилизации получают 0,182 г 2- амино-6-бензиламинопурин-9-/ -0-2 . 3 -ди- деоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,60 метанола (т.пл. 92 - 94°С).

Вычислено, %:58,78; Н 6,28; N 23,37,

С1уН2оМб02 0.60СН/Ю

Найдено, %: С 58,60; Н 6,06; N 23,48.

Пример 34, 2-Амино-6-циклопропила- минопурин-9-/ -0-2 , 3 -дидеоксирибофуранозид.

2-Амино-6-циклопропиламинопурин (0,495 г, 2,1 ммоль, полученный нуклеофильным замещением хлорного радикала у 2- амино-6-хлорпурина (Aldrich Chemical Co, Milwaukee WI) циклопропиламином) и 3 -деокситимидин (0,73 г 3,2 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографируют на колонках с AGI-X2 (ОН-форма) и XAD-2 - по методике, описанной в примере 18. После лиофилизации. получают 0,419 г 2-амино-6- циклопропиламинопурин-9-/3-0-2 , 3 -диде- оксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,3 гидрата (т.пл. 82 - 84°С).

Вычислено, %: С 52,80; Н 6,34; N.28.42.

Ci3HieN602 0,ЗН20

Найдено, %: С 52,83; Н 6,35; N 28,44.

Пример 35. 2-Амино-6-метиламинопу- РИН-9-/3-0-21, З -дидеоксирибофуранозид.

2-Амино-6-метиламинопурин (0,5 г 3,0 ммоль, полученный нуклеофильным замещением хлорного радикала у 2-амино-6- хлорпурина (Aldrich Chemical Co, Milwaukee wi)мeтилaминoм) и 3 -деокситимидин (0,893 г, 3,9 ммоль) суспендируют в 100 мл 10 мМ калийфосфатного буфера, рН 6,8, содержащего 0,04% азид калия. В реакционную смесь прибавляют очищенные пуриннукле- озидфосфорилазу (2,880 м.е, д) и тимидин- фосфорилазу (1.200 м.ед.) и реакцию проводят при перемешивании при 33°С в течение 72 часов. Реакционную смесь наносят на колонку с AGI-X2 (ОН-форма) 2,5 х 10 см и полученный продукт вымывают 90% водным раствором метанола. Растворитель удаляют в ваккуме и остаток разделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем, 2,5 х 30 см, используя хлороформ:

:метанол (97 : 3 по объему). После лиофили- зации получают 0,3 г 2-амино-6-метилами- нопурин-9- -0-21, з -дидеоксмрибофурано- зида, который анализируют в виде гидрата (т.пл. 95°С, частичное плавление при 75°С).

Вычислено. %: С 48,66; Н 6,24; N 30.95.

CiiHieN602 0,4Н20

Найдено, %: С 48,57; Н 6,27; N 30,77.

П р и м е р 36. 2-Амино-6-н-пропиксипу- РИН-9-Д-0-21, з -дидеоксирибофуранозид.

2-Амино-6-нупропоксипурин (0,21 г, 1,11 ммоль, полученный нуклеофильным замещением хлорного радикала у 2-амино-6- хлорпурина (Aldrich Chemical Co, Milwaukee WI) алкоксильным анионом в результате взаимодействия гидрида натрия и н-пропа- нола) и з -деокситимидин (0,293 г, 1,3 ммоль) суспендируют в 100 мл 10 мМ калийфосфат- ного буфера, рН 7, содержащего 0,04% азида калия. К реакционной смеси прибавляют очищенные пурин ну клеозидфосфорилазу (2,880 м.ед.) и тимидинфосфорилазу (1200 м.ед.) и затем перемешивают при 33°С в течение 48 ч. Реакционную смесь наносят на колонку с AGI-X2 (ОН-форма) 2,5 х 5 см, и элюируют 90% водным раствором метанола. Растворитель удаляют в вакууме и остаток разделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем 2,5 х 30 см, используя смесь хлороформ:метанол (9 : 1, по объему). После лиофилизации получают 0,132 г 2-амино-б-н-пропоксипурин-9-/ -О-2 , 3 -ди- деоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,2 гидрата (т.пл. 70°С).

Вычислено, %: С 52,59; Н 6,59; N 23,59.

С1зН1эМ50з 0,2Н20

Найдено, %; С 52,52; Н 6,62; N 24,49.

П р и м е р 37. 6-Бензиламинопурин-9- /3-D-21, З -дидеоксирибофуранозид.

6-Бензиламинопурин (1 г, 4,44 ммоль, Sigma Chemicals, St Louis МО) и з -деокси- тимидин (1,0 г. 4,4 ммоль) суспендируют в 50 мл 15 мМ калийфосфатного буфера, рН 7,2. В реакционную смесь прибавляют очищенные пуриннуклеозидфосфорилазу (2,000 м.ед.) и тимидинфосфорилазу (7, 900 м.ед) и перемешивают при 25°С. Через 1 прибавляют 6 мл диглима, и перемешивают при 37°С в течение 65 дней. Полученный фильтрат доводят до рН 10,5 гидроксидом аммония, затем наносят на колонку с AGI-X2 (форма- формиата), 2x6 см. Полученный продукт элюируют 30%-м водным раствором пропа- нола. Затем продукт хроматографируют на колонке Р-2, 2,5 х 90 см, вымывают 30% водным раствором пропанола и после лиофилизации получают 0,063 г 6-бензиламино- пурин-9-/5М 2 , З1 -дидеоксирибофуранози- да, который анализируют в виде 0,5 гидрата (т.пл. 65°С).

Вычислено, %: С 61,06; Н 6.03; N 20.94. Ci7HigN502 O.SHzO Найдено, %: С 61,29; Н 6,21; N 20.69. Пример 38. 6-Изопропоксипурин-9-/3- 5 D-21. З -дидеоксирибофуранозид.

6-Изопропоксипурин (0,5 г 2,8 ммоль, Sigma Chemicals, St Louis МО) и 3 -деокси- тимидин (0,95 г, 4,2 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографируют на 0 колонках с AGI-X2 (ОН-форма) и XAD-2 по методике, описанной в примере 18. Растворитель удаляют в вакууме из фракций, содержащих продукт, и остаток растворяют в 30% водном растворе пропанола. Хроматог- 5 рафируют на колонке с G - 10,5 х 90, элюируют 30% водным раствором пропанола с выходом смолы, которую переносят для лиофилизации во флакон с ацетоном. После лиофилизации получают 0,313 г 6-изопро- 0 поксипурин-9-Д-0-2 , з -дидеоксирибофура- нозида, который анализируют в виде 0,2 воды и 0,2 ацетона (т.пл. 75°С).

Вычислено, %: С 55,65; Н 6,73; N 19,09. С1зН1вМ4Оз 0,2СзНеО 0,2Н20 5 Найдено, %: С 55,65; Н 6,59: N 19,12.

Пример 39. 6-н-Пропиламинопурин- 9-/3-D-21, з -дидеоксирибофуранозид.

6-н-Пропиламинопурин (0,500 г, 2,81 ммоль, Sigma Chemicals, St Louis МО) и З1- 0 деокситимидин (0,957 г, 4,26 ммоль) подвергают взаимодействию и хроматографируют на колонках с AGI-X2 (ОН-форма) и ХО-2 по методике, описанной в примере 18 за исключением того, что 5 мл диметилсульфокси- 5 да заменяют дополнительной порцией 5 мл N, N-диметилформамида. Растворитель удаляют в вакууме из фракций, содержащих продукт, и остаток разделяют флэш-хроматографией на колонке с силикагелем, 3 х 50 0 см, используя смесь хлороформ : этанол (9 : :1 по объему). После лиофилизации получают 0,499 6-н-пропиламинопурин-9-/ -О-2 . з -ди- деоксирибофуранозида, который анализируют в виде 0,7 гидрата.

5Вычислено, %: С 53,85; Н 7,09; N 24,15.

Ci3HigN502 0,7Н20 Найдено, %: С 53,93; Н 7,08; N 24.18. Пример 40. 6-Циклогексиламинопу- рин-9-Д-О-2 , 3 -дидеоксирибофуранозид. 06-Циклогексиламинопурин получают

нуклеофильным замещением хлорной группы 6-хлорпурина циклогексиламином.

6-Циклогексиламинопурин (1,0 г, 5 ммоль) и 3-деокситимидин ( 607 г, 9,1 5 ммоль) растворяют в 25 мл 2-метоксиэтиле- нового простого эфира и 500 мл 10 мМ калий- фосфатного буфера, рН 7,2. Прибавляют -очищенные пуриннуклеозидфосфооилазу (5,000 м.ед.) и тимидинфосфорилазу

(5.000 м.ед.) и тимидинфосфорилазу (3850 м ед.) и реакционную смесь перемешивают при 37°С в течение 7 дней. Затем реакционную смесь наносят на колонку со смолой XAD-2 и тщательно промывают водой. Продукт элюируют 90% водным раствором метанола. Фракции, поглощающие УФ, сгущают и наносят на колонку со смолой AGI-X2 (ОН-форма) 2 х 12 см и элюируют 30% водным раствором метанола. Продукт тщательно дополнительно хроматографиру- ют на колонках с Р-2, 2,5 х 90 см, и с С-10, 2,5 х 90 см и вымывают продукт из каждой колонки 30% водным раствором пропанола. После лиофилизации получают 0,093 г 6- циклогексиламинопурин-9-/5-0-2 . 3 -диде- оксирибофуранозида (т.пл, 70 - 92°С).

Вычислено, %: С 60,55; Н 7,30; N 22,07.

С1бН23№02

Найдено, %: С 60,37; Н 7,39; N 21.94.

П р и м е р 41. 6-Метиламинопурин-9-/3- D-2 3-дидеоксирибофуранозид.

6-Метиламинопурин (4, 31 ммоль, 1 г, полученный от Sigma Chernlcal Co, St Louis МО) и 3-деокситимидин (4,40 ммоль, 1 г суспендируют в 50 мл 10 мМ калийфосфат- ного буфера, рН 7 , содержащего 0,04% азида калия. В реакционную смесь прибавляют очищенные тимидинфосфорилазу (2,000 м.ед. ) и пуриннуклеозидфосфо- рилазу (2,4000 м.ед.) и полученную суспензию перемешивают при 35°С. Через три дня реакционную смесь выдерживают при -20°С. После оттаивания смесь фильтруют и фильтрат наносят на колонку 2,5 х 10 см, заполненную дауэкс-1-гидроксидом, Продукт элюируют из колонки 90% раствором метанола в воде (по объему). Фракции, содержащие продукт, хроматографируют дважды на колонке 5 х 90 см со смолой Bio Rad Р-2, используя 30% раствор н-пропано- ла в воде (по объему), фракции, содержащие продукт, сгущают и после лиофилизации получают 0,391 г 6 метиламинопурин-9-/ -0- 2 , 3 -дидеоксирибофуранозида, который анализируют в воде 0,1 гидрата.

Вычислено, %: С 52,62; Н 6,10; N 27,89.

CnHisNsOa -0,1H20

Найдено, %: С 62,75; Н 6,16; N 28,01.

Данные ЯМР - анализа: 34/с, 1Нв/, 8,12/с, 1Н, На/, 7,72/шир. 1Н, NH/, 6,23 / дд, 1Н, Hi/, 5,06/т., 1Н. , 4,10/м, Ж. Н4/, 3.58/-3.69./М.. 1Н, 5 СН2/, 3,45 - 3,55/м, Hi, 5(СН2/, 2,95/шир. ЗН, СН3/, 2,40/м, 2Н, и 2.07/м. 2Н, 3 СН2/

Активирусная активность.

6-Циклопропиламинолурин-9-у -0-2 , З1- дидеоксирибофуранозид и 6-метиламино- пурин-9- -0-2 , 3 -дидеоксирибофуранозид

испытывали на активность против ВИЧ, в результате чего установлена активность против ВИЧ при концентрации 1 мкмоль. П р и м е р 42. б-/Циклопропилметиламино/-9-(2Д, 5.5.-тетрагидро-5-) (пивалои- локси/метил)-2-фурил)-9Н-пурин.

Соединение по примеру 6,6-/циклопро- пилметиламино/-9- 2Д, 55)-тетрагидро-5- (оксиметил)-2-фурил -9Н-пурин (0,322 г, 1,1

ммоля) растворяют в 50 мл ацетонитрила, добавляют 4-метиламинопуридин (10,5 мг, 0,1 ммоля) и триэтиламин (620 мкл, 4,4 ммоля) и колбу затем подвергают резкому охлаждению в ванне со льдом. Триметилуксусный ангидрид (450 мкл, 2,2 ммоля) растворяют в 10 мл ацетонитрила и добавляют каплями в колбу в течение 15 мин Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 24 ч. Дополнительные аликвоты триэтиламина (620 мкл, 4,4 ммоля) и пи- валоилхлорида (250 мкл, 2,0 ммоля) добавляют за 24 ч, 48 ч, 72 ч и 98 ч, После 120ч перемешивания при комнатной температуре добавляют дополнительно пивалоилхлорид (500 мкл, 4 ммоля) и триэтиламин (1,24 мкл, 8,8 ммоля) и реакционную смесь нагревают с обратным холодильником 16 ч. Реакционную смесь резко охлаждают метанолом, а растворители удаляют в вакууме.

Остаток суспендируют в 25 мл этилацетата и удаляют соли фильтрованием. Растворитель отгоняют в вакууме и остающийся материал хроматографируют на Хроматроне с 2 мл пластинкой из силикагеля, с применением смеси гексана с ацетоном (7 : 3); фрак- цию, содержащую целевой продукт, дополнительно очищают элюированием из колонки с силикагелем (2,5 х 40 см), используя смесь дихлорметана с метанолом (98 :2).

Лиофилизация позволила получить 0,218 г

6-/циклопропилметиламин/-9-(2Д, 55)-тетрагидро-5- /пивалоилокси/метил/-2-фурил1

-9Н-пурина, в виде масла (52%-ный выход).

Вычислено, %: С 60,38; Н 7,33; N 18,35.

Ci9H27N503 0,25Н20

Найдено, %: С 60,49; Н 7,33; N 18,38. Данные ЯМР, 1Н ЯМР/200 МГц, диме- тилсульфоксид д 8,26 /явный сиглент, 2Н, Н2 и На/, 6,25 / мультиплет, 1Н, 1Hi /,4,25/

широкий 1Н, Н41, 4,16/ мультиплет 2Н, НБ и Нв11/, 3,36/ синглет, ЗН, М-СНз/, 3,21/ широкий,...,1Н, N-CHCH2CH2/; 2,48 / широкий, 2Н, Нз и Нз /; 2,11/ мультиплет. 2Н, На и Н2 /, 1,08 / синглет, 9Н, с/ СНз/з/.

0,84 и 0,70/ 2 мультиплет, 2Н каждый, N- СН/СН2//СН2/.

П р и м е р 43. . 55/-5-/Ацетокси- метил/-тетрагидро-2-фурил -б-циклопропи- лметиламино -9Н-пурин

6-/Циклопропилметиламино/-9Н-(2Р, 55)-тетрагидро-5-/оксиметил/ -2-фурил - 9Н-пурин (0,290 г, 1 ммоль/, 4-диметилами- нопиридин (10,2 мг, 0,1 ммоля) и триэтиламин (620 мкл, 4,4 ммоля) растворяют в 50 мл ацетонитрила. Колбу подвергают резкому охлаждению в ванне со льдом и добавляют ацетилхлорид (1500 мкл, 2,1 ммоля). Реакционную смесь доводят до комнатной температуры и перемешивают 4 ч. Добавляют дополнительные аликвоты триэ- тиламина (620 мкл, 4,4 ммоля) и ацетилхло- рида (150 мкл, 2,1 ммоля) и реакционную смесь перемешивают всю ночь. Реакционную смесь охлаждают метанолом и растворители выпаривают в ваккуме. Остаток суспендируют в 25 мл этилацетата и соли удаляют фильтрованием. Растворитель выпаривают в вакууме и остающийся материал хроматографируют на хроматроне (4 мм пластинка из силикагеля) с применением смеси гексана с ацетоном (7 : 3). Лиофили- зация дает 0,174 г 9-(2Ј, 53)-5-(ацетоксиме- тил-тетрагидро)-2-фурил -6-/циклопропил- метиламино/ -9Н-пурина в виде масла (выход 51%),

Вычислено, %: С 56,31; Н 6,53; N 20,52.

Ci6H2iN503 0,55Н20

Найдено, %: С 56,26; Н 6,50; N 20,50.

Данные ЯМР, 1Н ЯМР /200 МГц, диме- тилсульфоксид-de) б 8,31 и 8,29 / 2 синглет, 2Н, Н и Не/, 6,29/мультиплет, 1Н, Hi / 4,32/широкий, 1Н, Из /, 4,16 /мультиплет, 2Н, Hs и Н5П/, 3/6 3,38 / синглет, ЗН, N- СНз/, 3,25/ широкий/ 2Н, N-CbL CH2 СН2/, 2,5 / широкий, 2Н, Нз1 и , 2,14 /мультиплет, 2Н, Н2 и Н2 /, 2,98 / синглет, ЗН, СНзСОО/, 0,88 и 0,73/2 мультиплет, 2Н каждый, N-CH СЫ2 СН2/

П р и м е р 44. 6-/Циклопропилметила- мино/-9-(2Р., )-5-/(гексаноилокси)-ме- тил/-тетрагидро-2-фурил -9-пурин.

6-/ Циклоп роли л метилами но , 53/тетрагидро-5-/оксиметил/-2-фурил1-9Н- пурин (0,503 г, 1,7 ммоля) триэтиламин (2.0 мл, 14 ммолей) и 4 метиламинопиридин (10 мг, 0,1 ммоля) растворяют в 50 мл ацетонитрила. Добавляют гексаноилхлорид (980 мкл, 7,0 ммолей) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 3 ч. Реакционную смесь охлаждают метанолом и растворители выпаривают в вакууме. Остаток растворяют в 25 мл этилацетата и нерастворившиеся соли удаляют фильтрованием. Остаток после выпаривания этилацетата растворяют в метаноле и пропускают через колонку (4,8 х 13 см) с силикагелем. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяют, концентрируют и хроматографируют на хроматроне (4 мм пластинка из си ликагеля) с применением смеси гексаня с ацетоном (8 : 2). Продукт допопнптплыю очищают на хроматроне (2 мм пластинка из 5 силикагеля) с применением смеси хлороформа с ацетоном (99 : 1). Лиофилизация дает 0,268 г 6-/циклопропилметиламино-9- (2R, 53)5-/(гексаноилокси)-метил/- тетра- гидро-2-фурил -9Н-пурина в виде масла

0 (40%-ный выход).

Вычислено. %: 61.71; Н 7,56; N 17,99. C2oH29N503 ЮН20 Найдено, %: С 61,81; Н 7,58; N 17,92. Данные ЯМР 1Н ЯМР /300 ГМц, диме5 тилсульфоксид-de/ д 8,30 и 8,28/ 2 синглет, 2Н, Н2 и На/; 6,28 / мультиплет, 1 Н, Дж 6,3 Гц, Дж 4,2 Гц, Hi/; 4,30 ;/ широкий 1Н, Н/ 4,23 / мультиплет, 2Н, Н5 и Нг, /, 3,38 / синглет, ЗН, N-СНз/; 3,24 / мультиплет 1Н,

0 N-CH.CH2 СН2/; 2,51 /широкий 2Н. Нз и . 2,22 / мультиплет, Н2 и 2.14 / мульти- плет2Н,ООСОН2СН2/СН2/ СНз/, 1,45/виды мы и пентет, 2Н, Дж 7,3 Гц, ООССН2СН2/СН2/2СНз/: 1,20 / мульти5 плет, 4Н, ООССН2/СН2/СН2/2СН3, 0,88 и 0,73 /2 мультиплет, 2Н каждый, N-CH СН2СН2/и 0,82/триплет, ЗН, Дж 6,8 Гц, ООССН2СН2/2СНз/.

Пример 45. 6/Циклопропилметилами0 но/-9- 2Р, 53)-5-/нонаноилокси/.

6-/Циклопропилметиламино/-9-(2Н, )-5/оксиметил/-2фурил -9Н пурин (0,998 г, 1,7 ммоля), 4-диметиламинопиридин (10 мг, 0,1 ммоля) и триэтиламин (2,0 мл. 14

5 ммолей) растворяют в 50 мл ацетонитрила Добавляют нонаноилхлорид (2.26 мл. 7.0 миллимолей) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 3 ч. Реакционную смесь охлаждают метанолом и

0 растворители выпаривают в вакууме. Остаток растворяют в 25 мл этилацетата и нерастворившиеся соли удаляют фильтрованием. После выпаривания этилацетата остаток растворяют в метаноле и пропускают

5 через колонку (4,8 х 13 см) с силикагелем. Фракции, содержащие целевой продукт, соединяют, концентрируют и хроматографируют на хроматроне (4 мм пластинка из силикагеля) с применением смеси гексана с

0 ацетоном (80 : 20). 2 отдельных последовательных пропуска на хромагроне (4 мм пластинка из силикагеля) с применением смеси хлороформа с ацетоном (80 20) Две отдельные последовательные очистки на Хроматро5 не с использованием смеси хлороформа и ацетона (95 ; 5) и смеси гексана с ацетоном (85 : 15) с последующей лпофилизацией дали 0,236 г 6-/циклопропилметиламино/-9-{(2Ј 53)-/(5-нонаноилокси)-метил/-тетрагидро2-фурил -9Н-пурина в виде масла (выход 32%).

Вычислено, %: С 63,91; Н 8,23; N 16,20,

C23H35N503 0.15Н20

Найдено, %: С 63,73; Н 8,05; N 16,05. Данные ЯМР; 1Н ЯМР/300 МГц, диме- тилсульфоксид de/ 5 8,29 и 8,28/2 синглет, 2Н, № и Не/ 6,28/ двойной дуплет 1Н, Дж, 4,5 Гц, Дж 5,9 Гц, Hi/,4,21 /широкий, 1Н, Н4/ 4,17 /т, 2Н, Hs1 и . 3,38/ S, ЗН, N-СНз/. 3,24/b,1H, N-CHCHzCHa/i 2,51 широкий/ 6,2 Н, Нз1 и Нз /: 2,24/ мультиплет, 2Н, На и Н2 /, 2,16 / мультиплет, 2Н, ООССН2СН2/ СН2/5 СНз/. 1,45/ широкий 2Н. СООСН2-/СН2/-5 СИ//- 1,22 /широкий, ЮН, ООССН2СН2/СН2/5СНз/ 0,88 и 0,72 /2 мультиплет 2Н, каждый, N-CHCHaChte/, 0,83 триплет, ЗН Дж 6.7 Гц, ООССН.2СН2/СН2/5СНз/.

Пример 46. 6-/Циклопропилметила- мино/-9-{2 В, 55)-5/-гектаноилокси/-метил- тетрагидро-2-фурил -ОН-пурин.

6-/Циклоп ропил метил амино/-9-(2Л, Б тетрагидро-б /оксиметил/ -фурилЗ-ЭН- пурин (0,310 г, 1,1 ммолей), 4-диметилами- нопиридин (10 мг, 0,1 ммоля) и триэтиламии (1,0 мл, 7 ммолей) растворяют в 50 мл ацето- нитрила. Добавляют гептаноилхлорид (800 мкг, 5,0 ммолей) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 6 ч. Реакционную смесь охлаждают метанолом и растворители выпаривают в вакууме. Остаток растворяют и пропускают через колонку (4,8 х 13 см) с силикагелем. Фракции, содержащие продукт, соединяют, концентрируют и помещают на препаративные пластинки (20 х 20 х 0,2 см) и силикагеля. Пластинки проявляют смесью хлороформа с ацетоном (80 : 20), Продукт соскабливают с препаративной пластинки (Rf 0,5) и элюируют из силикагеля этанолом. После выпаривания растворителя продукт допол- нительнЪ очищ ают на хроматроне (2 мм пластинка из силикагеля) смесью гексана с ацетоном (80 : 20). Лиофилизация позволяет получить 0,227 г 6-/циклопропилметилами- но/-9-(2Р., 55)5-(гектаноилокси)метил/- тетрагидро-2-фурил -9Н-пурина в виде масла (выход 51%).

Вычислено, %: С 62,54; Н 7,80; N 17,36.

C2iH3iNg03 0.10Н20

Найдено, %; С 62,56; Н 7,79; N 17,28.

Данные ЯМР: Н ЯМР/200 МГц, диме- тилсульфоксид-йб/ 5 8,27 и 8,26/ 2 синглет, 2Н, Н2 и На/, 6,26/ мультиплет, 1Н, Hi/: 4,26 / широкий 1Н, Н4/, 4,15 / мультиплет, 2Н, Hs1 и Н5 3,36/ синглет, ЗН, М-/СНз/; 3,24 /широкий, 1Н. N-CH, СН2, СН2/; 2,48/ широкий, 2Н, Из и . 2,17/мультиплет-4Н,

Н2 и На ООССН2/СН2/4 СНз/; 1,42 / широкий, 2Н, ООССН2СН2/СН2/2СНз/; 1,19/ широкий 6Н, ООСС/СН2/2-/СН2/3, СНз/, 0,85 и 0,71 /2 мультиплет, 2 Н каждый, N-CH

СН2СН2/; и 0,80 / триплет ЗН, J - 6,9 Гц, ООС / СН2/5СН.З/

П р и м е р 47. б /Циклопропилметила4- мино/-9-(2 55)-5-/(метоксиацетокси)-ме- тил/-тетрагидро-2-фурил -9Н-пурин,

6-/Циклоп роли л метил амин о/-9-(2R, 55Г)тетрагидро-5-/оксиметил-2-фурил -9Н- фурил (0,319 г, 1,1 ммоля), 4-диметиламино- пиридин (10 г, 0,1 ммоля)итриэтиламин (1,0 мл, 7 ммолей) растворяют в 50 мл ацетонитрила. Добавляют метоксиацетилхлорид (460 мкм, 5,0 ммолей) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 6 ч. Реакционную смесь охлаждают метанолом и растворители выпаривают в вакууме.

Остаток растворяют в ацетоне и пропускают через колонку (4,8 х 13 см) с силикагелем. Элюент, поглощающий ультрафиолетовое излучение, концентрируют и разделяют на хроматроне (4 мм пластинка из силикагеля)

с применением смеси хлороформа с ацетоном (95 : 5). Растворители удаляют в вакууме, а остаток дополнительно очищают на препаративной пластинке из силикагеля (20 х 20 х 0,2 см). Для проявления используют смесь хлороформа с ацетоном (70 ; 30). Продукт соскабливают с препаративной пластинки и элюируют из силикагеля этанолом. Лиофилизация дает 0,217 г 6-/цикло- пропмламинометиламино/9-(2Ј, 55)-/(метоксиацетокси)-метил/-тетрагидро-2-фурил - 9Н-пурина в виде масла (53%-ный выход). Вычислено, %: С 55,26; Н 6,52; N 18,95. Ci7H23Ns04 0.45Н20 Найдено, %: С 55,17; Н 6,38; N 18,34.

Данные ЯМР: 1Н ЯМР /200 МГц, диме- тилсульфоксид de / (5 8,30 и 8,26 / 2 синглет, 2Н, Н2 и Нз/ 6,27/ явный триплет, 1Н, Hi /, 4,31 /широкий 1Н, ИА /, 4,21/ широкий 2Н, Hs и Нв /, 3,99/ явный дублет. 2Н,

ООССНаОСНз/. 3,37/ синглет ЗН, М-СНз/ 3,25 / синглет, ЗН, ООССН2ОСНз/, 3,19 / широкий 1Н, N-CH.CH2CH2/, 2,46 / широкий, 2Н, Нз и , 2,12 /мультиплет, 2Н, Н2 и Нл/; 0,87 и 0,73/2 мультиплет, 2Н каждый,

N-(fH CH2-CH/2.

П р и м е р 48. б-/Циклопропиламино/- 9-// 2Д, 5.S./-5-// изобутироилокси/метил/- тетрагидро-2-фурил/9-Н-пурин.

6-/Циклопропилметиламино/-9-//(2Р,

55)тетрагидро-5-/оксиметил/-2-фурил/-9Ц -пурин (0,321 г, 1,1 ммоля), 4-диметиламино- пиридин (10 мг, 0,1 ммоля) и триэтиламин (1,0 мл, 7 ммолей) растворяют в 50 мл ацето- нитрила. Добавляют ангидрид изомасляной

кислоты (830 мкг, 5,0 ммолей) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 6 ч. Реакционную смесь охлаждают метанолом и растворители выпаривают в вакууме. Остаток растворяют в ацетоне и пропускают через колонку (4,8 х 13 см) с силикагелем Фракции, содержащие продукт, соединяют, концентрируют и помещают на препаративные пластинки из силикагеля (20 х 20 х 0,2 см), Пластинки проявляют в смеси хлороформа с ацетоном (80 : 20). Продукт соскабливают с препаративной пластинки (Rf 0,5) и элюируют из силикагеля этанолом. После выпаривания растворителя продукт дополнительно очи- щают на хроматроне (пластинка из силикагеля 2 мм) с применением смеси гексана с ацетоном (80 : 20). Лиофилизация дает 0,277 г 6-/циклопропилметиламино/-9-//2Н, 5S/- 5-//изобутироилокси/-метил/-тетрагидро- 2-фурил/-9Н-пурина в виде масла (выход 69%).

Вычислено, %: С 59,26; Н 7,07; N 19,20.

Ci8H25N503 0,ЗОН20

Найдено, %: С 59,30; Н 6,92; N 19,05. - Данные ЯМР; 1Н ЯМР /200 МГц дейте- рированный хлоформ/ д 8,39 и 7,99/ 2 син- глета,2Н, Н2И Не/6,31 /мультиплет, 1Н, Hi1 /; 4,38/ широкий 1Н, Щ1/ 4,30 / мультиплет 2Н, Hs1 и Hs /, 3,46 / синглет, ЗН. М-СНз/, 3,22 / широкий 1Н, NCH, CH2CH2/. 2,56 / широкий, ЗН . Нз1, Н3 и ООСН// СНз/2/ 2,11/ мультиплет, 2Н, Н2( и , 1,16/дуплет, 6Н, Дж 7,0 Гц ООСН/ СНз/2/; 0,98 и 0,76/ 2 мультиплета, 2Н каждый, N-CH CH.2 СН2/.

П р и м е р 49. 6-/Циклопропилметилами- l HO/-9-/ 2В, 5S.7 5-/пентаноилоксиметил/- тетрагидро-2-фурил-9Н-пурин.

6-/Циклопропилметиламино/-/()- тетрагидро-5-(оксиметил)-2-фурил/- 9Н-пу- рин (0,624 г, 2,1 молля), 4-диметиламино- пир идин (2,7 мг, 0,2 ммоля и триэтиламин (2,0 мл, 14 ммолей) растворяют в 100 мл ацетонитрила. Добавляют хлоранидрид ва- лерьяновой кислоты (1,08 мл, 8,9 ммолей) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 6 ч. Реакционную смесь быстро охлаждают метанолом и растворитель выпаривают в вакууме. Остаток растворяют в ацетоне и пропускают через колонку (4,8 х 13 см) с силикагелем. После выпаривания растворителя продукт дополнительно очищают на хроматроне (4 мм пластинка из силикагеля) с применением смеси гексана и ацетона (85; 15). Фракции, содержащие целевой продукт, соединяют, концентрируют и помещают на препаративные пластинки (120 х 20 х 6,2 см) из силикагеля.

Пластинки проявляют в смеси хлороформа и ацетона (80 : 20). Продукт соскабливают с препаративной пластинки и элюируют из силикагеля этанолом. Затем продукт очищают с помощью испарительной хроматографии в колонке (2,5 х 40 см) с силикагелем с применением смеси хлороформа с ацетоном (95 : 5). Лиофилизация приводит к получению 0,463 г 6-/циклопропилме- тиламино/-9-{(2 55}-5-/пентаноилоксиме- тил/-тетрагидро-2-фурил -9Н-пурина в виде масла (выход 58%).

Вычислено, %: С 60,38: Н 7,33: N 18.53

CigH27Ns03 0,25Н20

Найдено, %: С 60,66; Н 7,36: N 18.14.

ЯМР данные, 1Н ЯМР /300 МГц, диме- тилсульфоксид de /68.30 и 8,28/ 2 синглета. 2Н, Н2 и Hs// дуплет, дуплет, 1Н, Дж 4,1 Гц,Дж 6,3 Гц, Hi,4,29 / широкий Ж, , 4,18 / мультиплет, 2Н, Hs1 и , 3,38 /синглет, ЗН, М-СНз/; 3,25 /широкий, 1Н. N-CH. СН2, СН2/, 2,51 / широкий, 2Н, Нз , и Нз /, 2,22 / мультиплет, 2Н. ООССН.2СН2СН2СНз/, 2,13 / мультиплет, 2Н, Н21 и Н2 /, 1,44 / мультиплет, 2Н, СООСН2 СН2СН2СНз/. 1,23 / мультиплет, 2Н, ООССН2 СН2СН2СНз 0,89 и 0,74 / 2 мультиплета, 2Н каждый, N-CH СН.2СН2/. и 0,82 /триплет, ЗН, Дж 7.2 Гц ООССН2 СН2СН2СНз/

Пример 50. 6-/Циклопропилметила- мино/-9-/(2Р, 55)-5-/пропаноилокси/-мс- тил-1 /тетрагидро-2-фурил-9Н-пурин.

5- /Циклоп роли л мети лам и но /-9- /(, 5.5)-тетрагидро-5(оксиметил)-2-фу рил /-9 Н- пурин (0,369 г, 1,3 ммоля) -4-диметиламино- пиридин (10 мг, 0,1 ммоля) и триэтиламин (2,0 мл, 14 ммолей) растворяют в 50 мл ацетонитрила. Добавляют пропионилхлорид (450 мкл, 5,2 ммоля) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 2 ч. Реакционную смесь быстро охлаждают метанолом и растворитель выпаривают в вакууме.

К остатку добавляют этилацетат и нерастворившиеся соли удаляют фильтрованием. Затем фильтрат помещают в колонку (4,6 х 13 с мм) с силикагелем и элюируют метанолом, После выпаривания растворителя продукт элюируют на пластинке Хро- матрона (4 мм силикагель) с применением смеси гексана с ацетоном (75 : 25). Фракции, содержащие целевой продукт, соединяют, концентрируют и дополнительно хроматог- рафируют на хроматроне (2 мм пластинка из силикагеля), используют смесь хлороформа и ацетона (95 :5), содержащие продукт фракции помещают на препаративные пластинки из силикагеля (20 х 20 х 0,2 см), которые затем проявляют смесью хлороформа с ацетоном (85 . 15). Окончательной очистки достигают посредством третьей очистки на хроматроне (2 мм пластинка из силикагеля) с применением смеси гексана и ацетона (80: : 20). Лиофилизация приводит к образованию 0,178 г б-/циклопропилметиламино/-9- 2Д, 5 }-5-/пропаноилоксм-мет ил-1 - тетрагидро-2-фурил -9Н-пурина в виде масла (выход 39%).

Вычислено, %: С 58,51; Н 6,76; N 20,07,

С17Н2зМ50з 0,20Н20

Найдено, %: С 58, Н 6,78, N 19,90.

Н ЯМР /200 МГц, диметилсульфоксид- de Id 8,28 и 8,26/ 2 синглета, 2Н, Н2 и Не/. 6,26 / мультиплет, 1Н, Hi/ 4,28 / широкий, 1Н, Н4/, 4,14/ мультиплет, 2Н, Hs и ,3,36 /синглет, ЗН, N/-CH/3, 3,21 /широкий, 1Н, N-CHCH2CH2/ 2,48 / широкий, 2Н, Из и Нз /, 2,26 /квинтет, 2Н, Дж 7,7 Гц, ООССН2СН3/, 2,18/m, 2H, Н21 и , 0,96 /t, ЗН, J 7,5 Гц, ООССНаСНз/ и 0,84 и 0,70 / 2 мультиплета, 2Н каждый, N-CHCH2- СН2/.

П р и м е р 51. 6-(Цик/юпропилметилами- но)-9-((2, 55)-/(л-метилбензоилокси)ме- тил/тетрагидро-2-фурил)-9Н-пурин.

6-(Циклопропилметиламино-9-/(2Р, 5S)- тетрагидро-5-(оксиметил)-2-фурил/-9Н -пу- рин (0,295 г; 1,0 ммоля), 4-диметилзминопи- ридин (20 мг; 0,2 ммоля) и триэтиламин (2,0 мл; 14 ммолей) растворяют в50 мл ацетонит- рила. Добавляют n-метилбензоилхлорид и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 6 ч. Реакционную смесь быстро охлаждают метанолом и растворители выпаривают в вакууме Остаток суспендируют в этилацетаге и нерастворившиеся соли отфильтровывают. Фильтрат концентрируют и наносят на препаративные пластинки из силикагеля (20 х 20 х 0,2 см). Пластинки проявляют в смеси хлороформа с ацетоном (95 : 5). Продукт соскабливают с препаративной пластинки и элюируют из силикагеля этанолом. Продукт дополнительно очищают путем испарительной хроматографии на колонке (2,5 х 40 см) с силикагелем с применением смеси хлороформа с метанолом (98 : 2). Лиофилизация дает 0,330 г 6-/циклопропилметиламино/-9- /(2R., 55)-5-/(п-метилбензоилокси)-метил/- тетрагидро-2-фурил/-9 Н -пурина в виде масла (выход 78%).

Вычислено, %: С 63,89; Н 6,45; N 1-6,48. С22Н25М5Оз 0,20Н20 0,ЗОС2Н60 Найдено, %: С 64,10; Н 6,24; N 16,29. ЯМР данные: 1Н ЯМР / 200 МГц, диме- тилсульфоксид-de/ б 8,28 и 8,25/ 2 синглега, 2Н, Н2 и На/, 7,75 и 7,25 / 2 мультиплета, 2И каждый, ООССНбН, - СНз/. 6,28/ дуплет дуплет, 1Н.Дж 6,5Гц,Дж4.0Гц. Н2 /4,42

/широкий, ЗН Нд , Hs n Hs, 3,35/ синглет, ЗН, М-СНз/. 3,22 / широкий 1Н, N-CH СНаСН2/, 2,54 /широкий, 2Н, Нз и Нз / 2,35 / синглет ЗН, СОССНбН.4 - СНз/, 2,24

/мультиплет, 2Н, Н2 и Н2 /, 0,85 и 0,70 / 2 мультиплета 2Н каждый, N-CH СН2СН2/.

Пример 52. 6-/Циклопропилметила- мино/-9-(2Д, 55)-5-/(бензоилокси)метил/- тетрагидро-2-фурил/-9Н -пурин.

6-/Циклопропилметиламино/-9-/(2Н,

55)-тетрагидро-5(оксиметил)-2-фурил/-9Н- пурин (0,310 г 1,1 ммоля), 4 диметиламино- пиридин (27мг, 0,2 ммоля) и триэтиламин (1,1 мл, 8 ммолей) растворяют в 50 мл ацетонитрила. Добавляют бензойный ангидрид (0,92 г, 4,0 ммоля) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 6 ч. Реакционную смесь быстро охлаждают метанолом и растворители выпаривают в

вакууме. Остаток суспендируют в зтилаце- тате и нерастворившиеся соли удаляют фильтрованием. Фильтрат концентрируют и наносят на препаративные пластинки из силикагеля (20 х 20 х 0,2 см). Пластинки проявляют в смеси хлороформа с ацетоном (80 : :20). Продукт соскабливают с препаративной пластинки и элюируют из силикагеля этанолом. Продукт концентрируют, затем повторно наносят на препаративные пластинки из силикагеля (20 х 20 х 0,2 см). Эти пластинки проявляют в смеси дихлорметана с метанолом (90 : 10). Продукт соскабливают с препаративной пластинки и элюируют из силикагеля эталоном. Окончательная очистка достигается посредством испарительной хроматографии на колонке (2,5 х 90 см) с силикагелем с применением смеси дихлорметана с метанолом (90 : 10). Лиофилизация дает 0,342 г 6-(циклопропилметиламино)-9/(2R, )-5-/(бензоилокси)метил/-тетрагид- ро-2-фурил/-9Н-пурина в виде масла. (Выход 78%).

Вычислено, %: С 63,24; Н 5,96; N 17,56. C2iH23Ns03 0,ЗОН20

Найдено, %: С 63,23; Н 5,95; N 17,50.

ЯМР данные. 1Н ЯМР /200 МГц, диме- тилсульфоксид-do/ (58,29 и 8,25 / 2 синглета, 2Н, Н2 и Не/. 7,86, 7,61 и 7,47/ 3 мультиплета, 5Н общий, 00 CCeHs/, 6,29 /,

дуплет, дуплет, IH, Дж 6,5 Гц, Дж 4,0 Гц, Hi /. 4,45 /широкий, ЗН, Н4 , Hs11/. 3,35 /синглет, ЗН, М-СНз/, 3,20 /широкий, 1Н, N-CH, СН2 СН2/, 2,52 /широкий, 2Н, Нз и ,22 /широкий, 2Н, Н2 и Н2Ч/, 0,83 и

0,69 /2-мультиплета, 2Н каждый, N- СНСН2СН2/.

П р и м е р 53, 6-/Циклопропилметила- мино/-9-/(2В, 5)-тетрагидро-5-/(4-нитро- бензоил)окси/-метил-2-фурил/-9Н-пурин.

6-/Циклопропилметиламинопурин-9-/ (2R, 53)-тетрэгидро-5-(оксиметил)-2-фурил/- 9Н-пурин (0,3, 0,96 ммоля) растоворяют в 10 мл ацетонитрила. Добавляют триэтиламин (4,4 ммоля) и 4-диметиламинопиридин (0,0102 г, 0,086 ммоля) в 10мл ацетонитрила и содержимое охлаждают до 0°С. п-Нитро- бензоилхлорид (0,27 г, 2 ммоля) растворяют в 7 мл ацетонитрила и полученный раствор добавляют каплями, поддерживая температуру реакционной смеси на уровне 0°С при перемешивании. Спустя 90 мин, растворитель удаляют и остаток растворяют в метаноле. После добавления 25 мл сухого силикагеля растворитель удаляют в вакууме и содержимое хроматографируют на колонке (4,9 х 28 см), содержащей силикагель. Подвижную фазу представляет смесь хлороформа и метанола (95 : 5, соотношение объемов). Фракции, содержащие продукт, соединяют и последующее разделение про- зводят на хроматроне, снабженном 4 мм пластинкой из силикагеля. Подвижной фазой служила смесь гексана, ацетона (7 : 3, соотношение объемов). Фракции, содержащие продукт, соединяют и после лиофилизации получают 0,311 г 6-/цикло- пропилметиламино/-9-/(, 58)-тетрагид- ро-5/(4-нитробензоил)-окси/-метил-2-фур- ил-9Н-пурина.

Вычислено, %: С 57,53; Н 5,06; N 19,17;

C21H22N605

Найдено, %: С 57,50; Н 5,10; N 19,22.

ЯМР данные: 1ЯМР /2000 МГц, диме- тилсульфоксид-de/ б 8,05 - 8,29 /мульти- плет, 4Н / 0,8, 0,4 и 8,00 / 2 синглет, 2Н, Н2 и Нв /, 6,27 / мультиплет, 1Н, 1Hi /; 4,56 / широкий, 1 Н, Н / / мультиплет, 2Н, Hg и Hs /, 3,30 / синглет, ЗН. N-СНз/, 3,17 /широкий, 1Н, циклопропил СН/, 2,6 / широкий, 2Н, На и 2,14 / мультиплет, 2Н, Нз и Нз /, 0,87 и 0,79/2 мультиплета, 4Н. циклопропил СН2СН2/.

Пример 54. 6-(Циклопропилметилами- но-9-Х2Д, )-тетрагидро-5-(п-аминобензол- метил-2-фурил)-9Н-пурин.

6-/Цикропропилметиламино/-9-(2Ц, 55)-тетрагидро-5/п-нитробензоил-2-фурил /9Н-пурин (0,203 г, 0,463 ммоля) смешивают 10% палладием на активированном угле(0,1 г) и 4-диметиламинопиридином (0,0102 г, 0,086 ммоля) в метаноле (150 мл). Восстановление производят в атмосфере азота при давлении 9,4 кг/см2 (52 фунта/кв. дюйм) в течение 6 ч. После удаления твердых веществ фильтрат высушивают и остаток хроматографируют на силикагеле с подвижной фазой, представляющей смесь хлороформа и метанола (95 : 5). Фракции, содержащие продукт, соединяют и после удаления растворителя получают 0.127 г 6-/циклопро- пи л метил амин 0/9-/(2 R, )-тетрагидро-5- /п-аминобензоилметил/2-фурил/-9Н-пур- ин, который анализируют с использованием 5 0,5 эквивалентов воды. Выход 66% Т.пл. 63°С. Тонкослойная хроматография: Rf 0,69 (силикагель, хлороформ, метанол) 9 : 1 а о 6,4° (С - 0,5, диметилформамид); ультрафиолетовый анализ: Дтах(Јх 10) при 0 рН 7,275,5 нм (32,2).

Вычислено, %: С 60,42; Н 6,04; N 20,13.

C21H24N603 0.5Н20

Найдено, %: С 60,54; Н 6,06; N 20,01. Данные ЯМР: 1Н ЯМР / 200 МГц, диме5 тилсульфоксид-de/ б 8,28 и 8,26 /синглет, 2Н. Н2 и Н8/. 7,56 /дуплет, 2Н, чДж 8,6 Гц,0а, d /, 6,51 /дуплет. 2Н Дж ,0Ь, с /, 6,27 /мультиплет, 1Н, HI /, 5,96 /широкий, 2Н МН2 /, 4,32 /мультиплет ЗН, Щ , Hs

0 /, 3,36 /синглет, ЗН, N-СНз /3,2 /широкий, 1 Н, N-CH, СН2, СН2/, 2,48 /широкий, 2Н, Нз1 и 2,17 /мультиплет, 2Н Н2 и Н21 /, 0,86 и 0.71 /2-мультиплета, 2Н, каждый, N-CH. СН2, СН2/.

5 Пример 55. 6-/ Циклопропилметила- мино/-9-/(2Р, 55)-те.трагидро-5-//(аце- тил)окси/-метил/-2-фурил/-9 Н-пу рин.

6-/Циклопропилметиламино/-9-/(2Ј. 5,5)-тетрагидро-5-/оксиметил /-2-фурил /-9

0 Н-пурин (0,312 г, 1 ммоль), растворяют в 50 мл ацетонитрила. Добавляют триэтиламин (4,4 ммоля) и 4-диметиламинопиридин (0,1 ммоля) и реакционную смесь охлаждают в ванне со льдом. Добавляют ацетилхлорид

5 (2,1 ммоля) и реакционную смесь доводят до комнатной температуры. После перемешивания в течение 4 часов дополнительно до- бавляют триэтиламин (4,4 ммоля) и ацетилхлорид (2,1 ммоля). Реакционную

0 смесь перемешивают всю ночь при комнатной температуре. Добавляют метанол (50 мл) и растворитель удаляют в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и нерастворившиеся соли удаляют фильтрованием.

5 Продукт отделяют на хроматроне с применением смеси гексана с ацетоном (7 : 3) 4 мм пластинка из силикагеля. Лиофилиэация дает 0,174 г6-/циклопропилметиламино/-пурин- 9-/(2EL. 55)-тетрзгидро-5-//(ацетил)окси/0 метил/-2-фурил/-9Н-пуринз, который анализировали в виде 0,56 гидрата.

Вычислено, %: С 56,31; Н 6,53; N 20,52.

Ci6H2iN503 0,55Н20

Найдено, %: С 56,26; Н 6,50; N 20,50.

5ЯМР данные, 1Н ЯМР /200 МГц, диметилсульфоксид б/(5 8,31 и 8,29 /2 синглета, 2Н, Н2 и На/, 6 ,29 /мультиплет, 1Н, Hi1 /. 4,32 /широкий, 1Н, Н4 /, 4,16 /мультиплет, 2Н. Hs1 и ,38 / синглет, ЗН. N-СНз/,

3,25 /широкий, IH, циклопропил СН /, 2,5 широкий 2Н, На и Н2 /, 2,14 /широкий, 2Н. Н3 и Нз 7 1,98 /синглет, ЗН, СНзСОО/, 0,88 и 0,75 /2 мультиплета, 4Н, циклопропил

СН2СН2/.

П р и м е р 56. 6-/Циклопропилметила- мино/-9-/(2Е. )-тетрагидро-5-/(фенилаце- тил)метил/-2-фурил/-9Н-пурин.

6-/Циклопропилметиламино/-9-(25, 55)-тетрагидро-5-/оксиметил/-2-фурил -9Н -пурин (0,5 г, 1,44 ммоля) растворяют в 20 мл ацетонитрила, Добавляют 4-диметиламино- пиридин (10,2 мг, 0,08 ммоля) и триэтиламин (620 мкл, 4.4 ммоля), после чего колбу быстро охлаждают в ванне со льдом в атмосфере азота. Фенилацетилхлорид (1,11 г, 7,2 ммоля) добавляют в колбу каплями в течение 15 мин. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 0,5 ч, Реакционную смесь быстро охлаждают метанолом и растворитель удаляют в вакууме, Остаток растворяют в 2 мл смеси хлороформа с метанолом (9 : 1) и хроматографируют на колонке (5 х 15 см) с си лика гелем в применяемом растворителе. Содержащие продукт фракции дополнительно хромагог- рафируют на хроматографе с 2 мм пластинкой из силикагеля и проявляют смесью гексана с ацетоном (7 : 3). Лиофилизация содержащей продукт фракции дает 0,459 г 6-/циклоп роли л метил амино/-9-/(2Н, 5S)- тетрагидро-5-/(фенилацетил)метил/-2-фур ил/-9Н-пурина в виде масла Выход 78%, т. пл. 25°С.

Вычислено, %: С 64,95; Н 6,18; N 17,19.

C22H25N503

Найдено, %: С 64,90; Н 6,20; N 17,10.

Данные ЯМР: 1ЯМР 200 МГц диме- тилсульфоксид-de / 3 8,29, 8,27 /синглет, 2Н, Н2 и На/. 7,23 /мультиплет, 5Н0/ 6,27 /мультиплет, 1 Н. HV/, 4,24 /мультиплет, ЗН, HV, Hs и Hs V, 3,61 /d. 2H, 1,5 Гц, СН2 /, 3,36 /S, ЗН, N-СНз/, 3.21/b. 1H, N- СНСН2СН2 /, 2,2 /о, 2,2 /Ь, 2Н. Нз1 и 2,12 /m, 2H, Н2 и Н2 /, 0,83 и 0,70 /2-муль- типлета 2Н каждый, N-CHCH.2CH2 /.

Основное преимущество соединений по изобретению в сравнении с прототипны- ми нуклеизодами, описанными в Bloorg. , состоит в их стабильности в крови, так соединения по изобретению обладают усиленным терапевтическим действием за счет благоприятных фармакологических свойств, обусловленных лучшей стабильностью. Например, хорошая стабильность может увеличить продолжительность действия соединения, если соединение не преобразуется сразу же после поступления в кровь

Таким образом, это соединение может проявлять свойственное ему терапевтическое действие в течение длительного периода времени. Помимо этого, длительное время воздействия позволяет определить схему приема лекарственного средства с

большими интервалами.

Повышенную стабильность соединений по изобретению демонстируют данные, приведенные в таблице, которые показывают, что содержание прототипного соединения б-метил-аминопурин-Э /З-О З1 -дидеоксирибофуранозида, описанного в Bioorg., указанном в качестве ссылки (пример 41), снижается до 61% за 2 часа. Все соединения по изобретению содержатся в количестве свыше 80% в течение 4 часов, что свидетельствует о существенно большей стабильности в цельной человеческой крови.

Данные испытаний полученных соединении по стабильности в крови,

Препараты цельной венозной человеческой крови с добавлением стрептомицина, пенициллина и D-глюкозы инкубируют при 37°С вместе с 30 мкМ концентрациями соединений, подлежащих испытанию. Аликвот- ные пробы отбирают через 10 мин, 2 ч и 4 ч, и анализируют путем жидкостной хроматографии высокого давления, причем, проба, изъятая через 10 минут, служит в качестве

контрольной пробы t 0. Результаты (выраженные в % вещества, оставшегося после 2 или 4-часовой инкубации) представлены в таблице.

Формула изобретения

Способ получения нуклеозидов общей

формулы I:Ro -цт

%ХЧ

/ 1 N N

Н0-ф|

где RI - водород или амино;

R2 - С2 - Сб-алкокси- или метокси, замещенный Сз - Се-циклоалкилом, Сз - Се - циклоалкокси, пирролидинил, или аминогруппа, замещенная С2 - Се-алкилом, Сз - Сб-циклоалколом, или ди-замещенная Сз - Сб-Циклоалкил-С2 - Сб-алкилом или ди-Ci Сб-алкилом

или их фармацевтических приемлемых сложных эфиров, отличающийся тем, что пуриновое основание формулы II ВН, где В - соответствующий остаток пурина,

5 подвергают взаимодействию с 3-деоксити- мидином в апротонном полярном растворителе в фосфатном буфере в присутствии смеси ферментов переноса пентозила, такой как смесь тимидинфосфорилазы и пури- нуклеозидфосфорилазы с последующим в

случае необходимости переводом полученного соединения общей формулы I в его фармацевтически приемлемый сложный эфир, обработкой соответствующим галоидангидридом. Приоритет по признакам: 09.04.87 при RI - водород или амино, R - Са Сб-алкокси-, аминогруппа, замещенная С2- Се-алкилом;

29,05.87 при R2 - аминогруппа, замещенная Сз - Сб-циклоалкилом, или ди-заме- щенная Сз Се-Циклоалкил-С2 - Сб-алкилом. или ди-Ci - Сб-алкилом;

30.09.87 при R2 - метокси, замещенный Сз - Сб-циклоалкилом, Сз - Се-циклоэлкок- си,пирролидинил.

Изобретение относится к химии природных соединений, в частности к получению нуклеозидов ф-лы У IN 1 Ян где Ri-H или амино; Р2-С2-Се-алкокси - или метокси замещенный Сз-Се-циклоалкилом Сз-Св-циклоалкокси, лирролидинил, или аминогруппа, замещенная С2-Се-алкилом, Сз Сб-Циклоалкилом, или дизамещенная и Сз-Сб-циклоалкил - С2-Се-алкилом или ди- Ci-Ce-алкилом, или их фармацевтически приемлемых сложных эфиров. Цель - разработка способа получения более активных соединений. Получение ведут рекцией пуринового основания ф-лы ВН, где В - соответствующий остаток пурина с 3-деок- ситимидином в апротонном полярном растворителе в фосфатном буфере в присутствии смеси ферментов переноса пентозила с последующим в случае необходимости переводом полученного соединения в его фармацевтически приемлемый сложный эфир, обработкой соответствующим галоидангидридом, 1 табл. СО С

Доза в мкМ для 50 % ингибирования разложения вируса иммунодефицита человека в клеточной структуре.