Способ получения производных гуанина или их кислотно-аддитивных фармацевтически приемлемых солей Советский патент 1991 года по МПК C07D473/18 A61K31/52 

(NH2)N-C C-N CH- N-CHf-Q-(CH2b-Q-C(OVCH(R)-NH

2

Изобретение касается производных гуанина, в частности получения соединений общей ф-лы

где R - СН(СНЭ)2 или СН(СН,)-СНг-СН3, или их кислотно-аддитивных фармацевтически приемлемых солей, обладающих противовирусным действием, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых более активных и менее токсичных веществ указанного класса Синтез ведут реакцией 9(2-гидрокси- этоксиметил)гуанина с N-защищенным валином или изолейцином в присутствии дициклогексилкарбодиимидаk (лучше в присутствии основания в органическом растворителе) с последующим удалением тащитной группы и выделением целеИзобретение относится к способу получения новых производных гуанина, обладающих ценными противовирусными свойствами, которые могут найти применение в медицине

Цель изобретения - создание новых производных гуанина, обладающих более высокой антивирусной активнового продукта в виде основания или переводом его в соль действием кислоты (лучше НС1)о Новые соединения проявляют антибактериальную активность в отношении вируса пузырькового лишая: концентрация, вызывающая 50%- ное торможение развития вируса, составляет 0,84 и 3,8 мкМ против 0,08- 0,1 мкМ для ацикловира, имеют высокую биоусвояемость количество введенной дозы (в моче) в виде ацикловира составляет 63% и 50% против 15% для ацикловира. 1 з„п ф-лы, 1 табл„

Ј

(Л

о со

4

со оо

стью за счет более высокой биоусвоя- емости и меньшей токсичности.

Пример I „ 2-Ј(2-Амино-1,6- дигидро-6-оксо-9Н-пурин-9-ил)меток- сиДэтил-Ъ-валинат,

а) 2-Ј(2-Амино-1,Ь-дигидро-6-оксо- 9Н-пурин-9-ил)метокси1-этил-Ы- Г(оен- эилокси)карбоншГ|-1,-валинат.

см

Суспензию ацикловира (2,0 г) в сухом диметилформамиде (ДМФ) 150 мл нагревают до 60°С, в результате получают бесцветный раствор„ К теплому раствору добавляют 3,012 г карбокси- бензил-Ь-валина (CBZ-L-валин) 154 мг 4-диметиламинопиридийа (ДМА11), 2,998i дициклогексилкарбодиимида (ДГК)0Бледно-желтый раствор оставляют охлаж- JQ даться до комнатной температуры и пе- ремешивают в течение ночио Через 30 мин наблюдают выпадение белого осадка0 К реакционной смеси снова доавляют указанные количества CBZ-L- 15 валина, ДМАП и ДГК и мутную суспензию перемешивают в течение двух дней при комнатной температуре

После этого суспензию отфильтровывают,, Получают 1,418 г твердого 20 вещества белого цвета,, Бесцветный фильтрат концентрируют, получая в результате маслянистую жидкость желтоватого цвета, которую очищают с по- мощью хроматографии на силикагеле.Элю-5 ирование осуществляют смесями метанола и дихлорметана разного состава (0-15%)о В результате получают 3,751 г целевого соединения (выход 91,1%) в виде белого твердого вещества,, Q

в) 2-Ј(2-Амино-1,6-дигидро-6-оксо- 9Н-пурин 9-ил)метокси1-этил-Ь-валинат„

Смесь 5,0 г 2-Ј(2-;1мино-1,6-ди- гидро-6 оксо-9Н-пурин-9-ил)метокси - этшг-N- (бензилокси) карбонил|-1 вали- ната, 2 г.5%-ного палладиевого катализатора на угле (50% воды) и 50 мл ДМФ встряхивают в аппарате Парра при давении водорода 40 фунтов на кводюйм в течение 3 ч0 Реакционную смесь филь-л труют через слой целита и упаривают в вакууме, получая маслянистую жидкость о Кристаллизацию осуществляют из смеси воды и этанола в объемном со-i отношении 1:3.) После перекристаллиза- fa ии получают 1,5 г целевого соединения.

Вычислено,%: С 48,14; Н 6,22; N 25,91.

Найдено,%: С 47,84; Н 6,26; N 25,75с

П р и м е р 2. 2-(2-Амино-1 ,6- дигидро-6-оксо-9Н-пурин-9-ил)меток- сиДэтил-Ь-валинат гидрохлорид моногидрат „

а) 2- Ј(2-Амино-1,6-дигидро-1,6-о ср-9Н-пурин-9-ил)метокси -этил-Н- Ј(бензилокси)карбоннгГ Ь-валинат,

Q 5

0 5 Q

л i

0

2,0 г суспензии ацикловира в сухом ДМФ (150 мл) нагревают до 60°С, получая в результате- бесцветный раствор „ К теплому раствору добавляют 3,012 г CBZ-L-валинат, 154 мг ДМАП, и 2,998 г ДГК. Желтоватому раствору дают остыть до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи Через 30 мин наблюдают выпадение белого осадкав К реакционной смеси снова добавляют указанные количества CBZ--L- валина, ДМАП и ДГК и мутную суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение двух дней, после чего фильтруют, получая 1,418 г белого твердого вещества. Бесцветный фильтрат концентрируют, получая желтоватую маслянистую жидкость, которую очищают сtпомощью хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смеси метанола и дихлорметана различного состава (0-15%), В результате получают 3,751 г целевого соединения (92,1%) в виде белого твердого вещества.

в) 2-Ј(2-Амино-1,6-дигидро-б-оксо- 9Н-пурин-9-ил)метокси -этил-Ь-вали- нат гидрохлорид моногидрат

Смесь 3,730 г 2-(2-амино-1 ,6-ди- гидро-6-оксо-9И-пурин 9-ил)метокси - этил-N-l бензилокси) карбонил J-L-вали- ната, 3/7 мг 5%-ного палладиевого катализатора на угле, 100 мл метанола, 100 мл ТГФ и 18 мл 0,5 М соляной кислоты встряхивают в аппарате Парра при давлении водорода 50 фунтов на кв„дюйм в течение дня. После этого реакционную смесь фильтруют через слой целита и концентрируют, получая белое твердое вещество, которое перекристаллизовывают из смеси воды и этанола

В результате получают 1,762 г (60,0%) целевого соединения в виде |белого порошка, Топл„ 150°С (усадка твердого вещества) с постепенным переходом в маслянистую жидкость и разложением со вспениванием при 195 С,

Вычисленов%: С 4l,22j H 6,15; N 22,19; С1 9,36.

Найдено,%: С 41,09; Н 6,10; N 22,12; С1 9,28„

П р и м е р 3„ 2-(2-Амино-1,6- дигидро-6-оксо-9Н-пурин-9-ил)меток- сиПэтил-В-валинат гидрохлорид моногидрат.

перемешивание при комнатной температуре в течение еще 7 дней. Смесь затем фильтруют и прозрачный фильтрат концентрируют в вакууме до получения полутвердого остатка При элюирова- нии из остатка на силикагеле 60 (ЕМ, 230-400 меш. 8,5)44 см) смесью 2,5- 5% метанола и метиленхлорида получают 0,8 г (45%) 2- Ј(2-амино-1,6-дигид- ро-6-оксо-9Н-пурин-9-ил)метокси этил- Ы-Г(бензилокси)карбонил|-Ь-изолейци- ната в виде белого твердого вещества, т.пл., 155-157°Сс

УФ (МеОН), нм: ftмак : 255 (Ј17700) А$Ь 279(9800) MK1M 230(6100)

ЯМР (200 мГц, Me2SOdfe), У : 0,73 - 0,80 (м, 6Н); 1,13-1,33 (м,2Н); 1,66-1,70 (м, 1Н); 3,64 (т,2Н); 3,92 (т,1Н); 4,16 (м,2Н); 5,00 (с, 2Н); 5,32 (с, 2Н); 6,47 (ширс с, 2Н); 7,33 (с, 5Н),7,65 (д, J-8 Гц, 1Н); 7,78

(с, 1Н); 10,59 (шир. со, 1Н)

Mace-спектрометрия (С1/(ЛЬ; 70 С , M/Z: 473(1,0 % М+1); 347 (23,2, М-125); 225 (100,0 М-247).

MS°° ( 6 н

Тонкослойная хроматография: одно пятно на силикагеле при использовании в качестве подвижной фазы 10% МеОН/СНгС12, RЈ 0,38, жидкостная хроматография высокого разрешения: один пик на Supelco LCg при использовании в качестве подвижной фазы 50% МеОН/Н О; 100% K 7,

Вычислено,%: С 53,87; Н 6,16; N 17,13с C22H N606-HZ0

Найдено,%: С 53,94; Н 6,20; N 17,04.

в) 2-Г(2-Амино-1,6-дигидрр-б-оксо- 9Н-пурин-9-ил)метокси | этил-Ь-изолей- цинат гидрохлоридо

Раствор 1,1 г (2,2 ммоль) 2-(2- амино-1,6-дигидро-6-оксо-9Н-пурин-9- ил)метокси этил-Н- Ј(бензилокси)карбо- ншЛ-Ь-изолейцината в 50 мл смеси метанола и ТГФ (1:1) обрабатывают 5 мл 0,5 н. соляной кислоты и 0,30 г 5%-ного палладия на древесном угле. Смесь гидрируют в гидрогенизаторе Парра при давлении 50 фунтов на кв„ дюйм в течение 11 ч, фильтруют через слой целита и фильтрат концентрируют в вакууме. В результате получают

0,86 г (92%) 2-(2-амино-1,6-дигидро- 6-оксо-8Н-пурин-9-ил)метокси этил-Ь- изолейцината гидрохлорида в виде бе5

5

0

0 5

0

5

лого твердого вещества, т.пл„ 180 - 182°С (сильное размягчение при температуре /v 150°С)„

УФ (МеОН); нм: ддаьс 254 (Ј13400);

ft5h 272 (9000);Ъ мим 224 ЦЬОО).

ЯМР (200 мГц, ), : 0,77- 0,84 м.До (м. 6Н); 1,13-1,37 (м, 2Н); 1,82 (м. 1Н); 3,73 (т,2Н); 3,87 (шир0 с, т 1Н); 4,14-4,40 (мс ,36 (с, 2Н);,6,70 (шир. с, 2Н); 7,97 (с, 1Н); 8,46 (тир, с, ЗН); 10,87 (с, 1Н)„

Mace-спектрометрия (C1/CH4J 150 С) m/z: 367 (6,9% М+29); 339 (100, М+1); 225 (92,9, М-113)о

Мв°в°+ П,15°(с-2,0, НОАс),

Тонкослойная хроматография: одно пятно на силикагеле при использовании в качестве подвижной фазы 10% Ј , жидкостная хроматография высокого разрешения один пик на Veisapack использовании в качестве подвижной фазы 10% МеОН/НгО /0,1% FjCCOOH; 100% К 3,740

Вычислено,%: С 42,81; Н 6,70; N 19,84; С1 10,46,

C14H22N604 1,25 HCl 1,10 MeOH.X

«0,2Ь НгО

Найдено,%: С 42,82; Н 6,50; N 19,64; С1 10,46.

Антибактериальная активность. Вирус пузырькового лишая (HSV I) анализируют в монослоях клеток Vero в пластинах с несколькими ячейками Активность соединений определяют в опытах по уменьшению количества кровяных пластинок В этих опытах монослой клеток заражают суспензией HSV I, после чего для предупреждения распространения вируса в культуре покрывают их слоем питательной агарозы в виде геля. В слой питательной агарозы вводят затем различные количества испытуемых соединений. Количество кровяных пластинок при каждой концентрации выражают в процентах по отношению к соответствующей величине в контрольном опыте и по полученным данным строят кривую зависимости степени торможения от концентрации По этой кривой определяют концентрацию, при которой наблюдается 50%-ное торможение (IC), мкМ:

Соединение по

примеру:

1-40,84

53,8

51 Ы

а) 2- Г(2-Амино-1,6-дигидро-6-ок- со-9Н-пурин-9-ил)метокси этил-N- (бензил ок си) к арб онигГ -0-в ал инат„

Суспензию 1,00 г ацикловира в 80 мл сухого ДМ нагревают до 60°С, получая бесцветный раствор. К теплому раствору добавляют 1,70 г CBZ-U- валина, 74 мг ДМАП и 1,ЬО г ДГК Прозрачному раствору дают остыть до ком- натной температуры и затем перемешивают его в атмосфере азота в течение 2 дней. После этого к реакционной смеси снова добавляют указанные количества CBZ-D-валина, ДМАП и ДГК и мутную суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение 2 дней После этого суспензию фильтруют, отделяя белый твердый осадок. Бесцветный фильтрат концентрируют, остаток раствори- ют в смеси метанола и дихлорметана и полученный раствор хроматографируют на силикагеле, используя в качестве элюента 10%-ный метанол в дихлормета- не„ В результате получают 1,10 г (52% целевого соединения в виде белого твердого вещества, т„пл, 155-158 С0

Вычислено,%: С 52„05; Н 6,01; N 17,34с

Найдено,%: С 52,02; Н 5,98;

N 17,320

в) 2- (2-Амино-1,6-дигидро-б-оксо- 9Н-пурин-9-ил)метоксиП-этил-0-валинат

гидрохлорид моногидрато

Смесь 0,94 г 2-Ј(2-Амино-1,6-дигид ро-6-оксо-9Н-пурин-9-ил)метокси этил- N- Ј(бензилокси)карбонил -П-валината, 200 мг 5%-ного палладиевого катализатора на угле, 25 мг метанола, 25 мл ТГФ и 4,5 мл 0,5 М соляной кислоты

встряхивают в аппарате Парра при давлении водорода 44 фунтов на кВоДюйм в течение 4 ч После этого реакционную смесь фильтруют через микропористую мембрану и фильтрат концент- рируют. В результате получают целевое соединение в виде вещества грязно-белого цвета, ТоПЛо 185-188°С.

Вычислено,%: С 40,47; Н 6,18; N 21,37; С1 10,82.

Найдено,%: С 40,62; Н 5,98; N 21,20; С1 10,91о

П р и м е р 4. 2-Ј(2-Амино-1,6- дигидро-6-оксо-9Н-пурин-9-ил)меток- си этил -DL- в алии ат гидрохлорид моно- гидрат,

а) 2- Ј(2-Амино-1,6-дигидро-6-оксо- 9Н-пурин-9-ил)метокси этил-Ы- Хбен- зилокси) карбонил -Ш,-валинат.

86

Суспензию 2,000 г ацикловира в 150 мл сухого ДМ нагревают до , получая бесцветный раствор. К теплому раствору добавляют 3,012 г CBZ-DL- валина, 154 мг ДМАП и 2,998 г ДГК„ Раствору дают остыть до комнатной температуры и перемешивают его в те- чение ночи. После этого к реакционной смеси снова добавляют указанные количества CBZ-DL-валина, ДМАП и ДГК и суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение 2 дней0 Затем ее фильтруют, отделяя твердое белое вещество, а фильтрат концентируют и очищают с помощью хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смеси метанола и дихлорметана в различных соотношениях (0-15%). В результате получают целевое соединение

в) 2- Ј(2-Амино-1,6-дигидро-б-оксо- 9Н-пурин-9-ил)метокси -этил-ВЬ-вали- нат гидрохлорид моногидрат„

Смесь 3,730 г 2-Ј(2-амино-1,6-дигид ро-6-оксо-9Н-пурин-9 -ил) метоксиД - этил-N- (бензилокси) карбоншГ{-иЬ-ва- лината, 377 мг 5%-ного палладиевого катализатора на угле, 100 мл метанола, 100 мл ТГФ и 18 мл 0,5 М соляной кислоты встряхивают в аппарате Парра при давлении водорода 50 фунтов на кв.дюйм в течение дня. После этого реакционную смесь фильтруют через слой целита и концентрируют, получая твердое вещество, которое затем пе- рекристаллизовывают из смеси воды и этанолао В результате получают целевое соединение.

II р и м е р 5 о 2-Ј(2-Амино-1 ,6-ди- гидро-6-оксо-9Н-пурин-9-ил)метокси | - этил-Ь-изолейцинат гидрохлорид

а) 2- Ј(2-Амино-1,Ь-дигидро-6-оксо- 9Н-пурин-9-ил )метокси | этил-N- (бензил окси) карбоншГ -L-из олейцинат.

Смесь 1,0 г (4,4 ммоль) ацикловира, 74 мг (0,6 ммоль) 4-диметиламино- пиридина, 1,6 г (8,0 ммоль) 1,3-ди- циклогексилкарбодиимида, 1,8 г (6,6 ммоль) М-карбобенэокси-Ь-изолей- цина и 0,3 г молекулярного сита Dau- son тип ЗА в 80 мл сухого диметилформ- амида перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота. Через 4 дня к ней добавляют еще 1,6 г (8,0 ммоль) 1,3-дициклогексилкарбоди- имида и 1,8 г (6,6 ммоль) N-карбо- бензокси-Ь-изолейцина и продолжают

Ацикловир

(АЦВ)0,08-0,1

Определение оральной биоусвояемости. Крысам Long Evans через желудочный зонд, введенный через нос, вводили испытуемые соединения в дозах, эквивалентных 25 мг/кг ацикловира Собирали мочу за 24 и 48 ч и после ультрафильтрации анализировали ее с помощью жидкостной хроматографии высокого давления о Оральную биоусвояемость соединений выражали в количестве (в процентах от введенной дозы) обнаруженного в моче соединения (в виде ацикловира), 1 Соединение по % от введенной до- примеру зы (в моче) в виде цикловира:

1-463

550

АЦВ15

Глициловый

эфир АЦВ30

ОС-Аланило-

вый эфир АЦВ34

Определение торможения роста клеток млекопитающих.

Способность испытуемых соединений тормозить рост клеток D98 (чело- века) и L (мышей) определяли по количеству клеток после выдержки в течение трех дней стандартного количества клеток в растворах соединения различной концентрациио Найденное ко- личество клеток сравнивали с количеством, полученным в отсутствие соединения о Количество клеток определяли или путем прямого подсчета с последующей трипсинизацией монослоя, или путем спектрофотометрического определения количества красителя, поглощенного клеткамио Оба способа дали сопоставимые результаты.

Концентрацию соединения, при которой наблюдалось 50%-ное торможение (1Су0) по сравнению с контрольным опытом, рассчитывали или непосредственно интерполяцией из графика зависимости логарифма концентрации соеди- нения от процентавконтрольного значения, или из компьютерной программы, в которой анализ проводится по тому же алгоритму,, В этих расчетах использовались данные в пределах 20 - 80% от контрольных значений.

Результаты исследований даны в таблице

10

15

Формула изобретени.я

1 о Способ получения производных гуанина общей формулы I

ОН

I N

СХ)

H2N N N-CH2OCH2CH2OCOCH/R/N

где R - группа -СН(СН3)2или группа

-СН(СН3),,

или их кислотно-аддитивных фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем, что 9-(2-гид- роксиэтоксиметил)гуанин

ОН N

ЙО H2N N N CH2OCH2CH2OH

подвергают взаимодействию с N-защи- щенным валином или изолейцином в присутствии дициклогексилкарбодиимида: и, возможно, основания в органическом растворителе с последующим удалением защитной группы и выделением целевого продукта в виде основания или переведением его в соль действием кислоты.

05.11.87 при R - группа тСН(СН3)СНгСНэ.