Способ получения стероидных полупродуктов или их 22R/S стереоизомеров Советский патент 1992 года по МПК C07J5/00 

Изобретение относится к способу получения . новых стероидных промежуточных продуктов общей формулы I

CH2-OR2 , ,

%&----:$

или их 22 Р/5стереоизомеров,где символ означает одинарную или двойную углерод- углеродную связь;

Xi - атом водорода или фтора;

Ха - атом водорода или фтора;

RI - линейный или разветвленный Ci - Сю алкил;

R2 - атом водорода или линейный Ci - Сю ацил, пригодных для получения новых фармакологически активных стероидных сложных эфиров, обладающих высоким связующим средством относительно глюкокорти- костероидного рецептора, что обуславливает противовоспалительные свойства.

Цель изобретения - создание промежуточных продуктов для синтеза новых стеро- идных соединений, а обладающих

VJ

XI

О Ю

сл XI

со

преимуществами в фармакологическом отношении перед известными аналогами.

В нижеприведенных примерах, при проведении опытов препаративной хроматографии применяют объемную скорость движения потока 2,5 мл/см ч . Во всех примерах молекулярные веса определены посредством электронной ударной масс- спектрометрии, Точки плавления измерены на микроскопе с обогреваемым столиком фирмы Leitz, Ветцлар, ФРГ. Все анализы HPLC (НР1 С высокоэффективная1 жидкостная хроматография) проведены с колонкой Waters /n Bonclapak Cis (300 х 3,9 мм внутренний диаметр) при обьемной скорости потока 1,0 мл/мин и смесью этанола с водой в соотношении от 50 : 50 до 60 : 40 в качестве подвижной фазы.

П р и м е р 1. Получение (22RS)-, (22R) - и (22RS)-11 Д-16 «-17 а-,11-тетраоксипрегна- 1,4-диен-3,20-дион-16 а,17 а ацеталей,

Приготовление (22RS)-, (22R)- и (22S)-16 а, 17 «-бутилидендиокси-6 «, 9 а-дифтор-11 Д 21-диоксипрегна-1,4-диен-3,20-диона.

А. К суспензии 1.0 г 6 а, 9 а-дифтор-11 р, 16 а, 170, 21-тетраоксипрегна-1,4-диен- 3,20-диона в 500 мл метиленхлорида добав- ляют 0,32 мл свеже-перегнанного н-бутанола и 2 мл 72%-ной хлорной кислоты. Реакционную смесь.оставляют стоять . при комнатной температуре и при перемешивании на 24 ч. Реакционную смесь промывают 10%-ным водным раствором карбоната калия и водой, высушивают над сульфатом натрия и выпаривают, Остаток растворяют в этилацетате и осаждают пет- ролейным эфиром, Остается 883 Mr(22RS)- 16 а 17 а-бутилидендиокси-6 а, 9. а-дифтор-11 Д 21-диоксипрегна 1,4-диен- 3,20-диона. HPLC-анализ показал 99%-ную частоту и соотношение 16 : 84 у 22S и 22R - эпимеров. Молекулярный вес: 466. (Вычислено 466,5) {22Я/5)эпимерную смесь хрома- тографируют на колонке Сефадекс LH-20 (76 х 6,3 см) с применением гептан:хлоро- форм;этанол, 20:20:1 в качестве подвижной фазы. Фракции 12315-13425 мл (А) и 13740- 15690 мл (В) собирают, выпаривают, остаток растворяют в метиленхлориде и осаждают петролейным эфиром. Фракция (А) дает 62 мг (225)-и фракция В 687мг (22R)- 16 а 17 а-бутилидендиокси-6 а, 9 а-дифтор-11 Д 21- диокиспрегна-1,4-диен-3,20-диона (22S)- эпимер:молекулярный вес 466 (вычислено 466,5), т.пл. 196 - 200°С. (22Р зпимер:моле- кулярный вес 466 (вычислено 466,5), т.пл. : 169-172°С.

В. К раствору 1,0 г 6 а, 9 а-дифтор-11 Д 21-диокси-16 а, 17 а-/(1-метилэтилидён)бис

окси)/прегна-1,4-диен-3.20-диона в 500 мл метиленхлорида добавляют 0,30 мл свежеперегнанного н-бутанала и 2 мл 72%-ной хлорной кислоты, Реакционную смесь оставляют стоять 24 ч при 33°С перемешивании, экстрагируют водным раствором карбоната калия и водой, высушивают над сульфатом натрия и выпаривают. Остаток растворяют в метиленхлориде и осаждают

0 петролейным эфиром. Выход 848 Mr(22RS)- 16 а, 17 а-бутилендендиокси-ба , 9 а-дифтор-11 Д диоксипрегна-1,4-диен-3,20- диона. HPLC-анализ показал 93%-ную ступень чистоты и отношение 12/88 между 22S 5 и 22R-3nnMepaMH.

В1. К суспензии 4,0 г 6 а, 9 а-дифтор-11 Д 21-диокси-16 а, 17 а-/(1-метилэтили- ден)бис (окси)/прегна-1,4-диен-3,20-диона в 100 мл гептана добавляют 1,2 мл свежепе0 регнанного н-бутанала и 3,8 мл 72%-ной хлорной кислоты. Реакционную смесь оставляют стоять при комнатной температуре на 5 ч при интенсивном перемешивании, экстрагируют водным карбонатом калия и

5 водой, высушивают над сульфатом натрия и выпаривают. Выход: 4,0 г (22RS) - 16 а, 17 а-бутилидендиокси-6 а, 9 а-дифтор-11 Д 21- диоксипрегна-1,4-диен-3,20-диона. HPLC- анализ показал 98,5%-ную чистоту и

0 отношение между 22S и 22R-3nnMepaMH 3/97. После 2 перекристаллизацией из хлороформа с петролейным эфиром получено 3,1 г 22Р-эпимера, содержащего всего лишь 1,1% 225-эпимера и 1,3% других загрязня5 ющих примесей.

С. Подобным же образом, следуя процедуре, изложенной в примере 1В, замещением 6 а. 9 а-дифтор-11 Д 16 а , 17а , 21-тетраоксипрегна-1,4-диен-3,20-диона 11

0 Д 16 «, 17 а, 21-тетраоксипрегна-1,4-диен- 3,20-дион получают 9 а-фтор- и 6 а-фтор-11 Д 16 а, 17 а, 21-тетраокси- прегна-1,4-диен- 3,20 дион или соответствующие 16 а, 17 а-ацетониды нефторированных и фториро5 ванных несимметричных (22RS) - (22R)- и (22SM1 А 16 а, 17 а, 21-тетраоксипрегна- 1,4-диен-3,20-дион 16 а, 17 а-ацетали из ацетальдегида, пропанала, бутанала, изобу- танала, пентанала, 3-метилбутанала, 2,2-ди- метилпропанала, гексанала, гептанала, октанала, нонанала и додеканала.

П р и м е р 2. А. Преднизолон 16 а, 17 а-ацетонид (250 мг; 0,6 ммоля) растворяют в 75 метиленхлорида. Добавляют н-бутанал

5 (130 мг 1,8 ммоля) и 70%:ную хлорную кислоту (0,025 мл). Раствор перемешивают при 33°С 15 ч. Желтый раствор промывают 2 х 10 мл 10%-ного раствора карбоната калия и 4 х 10 мл воды, высушивают и выпаривают.

0

Выход, (22RS)-16 а, 17 а-бутиледендиокси 11 Д 21-дигидрокси-прегна-1,4-диен-3,20- диона 257 мг (97,7%). HPLC показал 91,1%- ную чистоту. Содержание непрореагиро- вашего ацетонида составило 7,4% загрязне- ний. Соотношение для S/R эпимера 14,6/85,4. В.Триамцинолон 16 а, 17 оацетонид (0,5 г, 1,1 ммоль) растворяют в 150 мл мети- ленхлорида. Добавляют н-бутанал (260 мг, З.бммоля) и 70%-ную хлорную кислоту (0,22 мл). Смесь перемешивают при 33°С 16 ч. В делительную воронку наслаивают поверх метиленхлорид. Колбу, в которой проводили реакцию, промывают несколько раз 10 мл карбоната калия и метиленхлоридом соот- ветственно. Затем раствор промывают 2 х 10 Мл 10%-ного К2СОз и 4 х 10 мл воды, высушивают и выпаривают. Выход: (22RS)16а 17 а-бутилидендиокси-9 а-фтор-11/ , 21-дигидроксипрегна-1,4-диен-3,20 диона 438 мл (84,9%), HPLC показала 80,2%-ную степень чистоты. Соотношение для S/R эпимера 19/81.

С.Флюоцинолон 16а, 17а-ацетонид(0,5 г, 1 ммоль) растворяют в 150 мл метиленх- лорида. Добавляют н-бутанал (260 мг, 3,6 ммоля) и 70% ную хлорную кислоту (0,22 мл). Смесь перемешивают при 33°С 24 ч. Мети- ленхлоридную фазу переносят в делительную воронку. Колбу для проведения реакции промывают несколько раз 15 мл 10%-ного К2СОз и метиленхлорида, соответственно. Раствор промывают 2 х 15 мл 10%- ного КаСОз и 4 х 15 мл воды, высушивают и выпаривают. Выход: (22RS)-16 а, 17а-бути- лидендиокси-6 а, 9а-дифтор-11 Д 21-дигид- роксипрегна-1,4-диен-3,20 диона 513 мг (100%) HPLC показала 97,4%-ную степень чистоты. Соотношение для S/R эпимера: 8,6/91,4.

П р и м е р 3. Получение 11 Докси-16 а,

17а-/(метилэтилден)бис(окси)/-и(20Р5), (20R)-и (20S) - 11 Докси-16 а, 17а-алкилме- тилен-диоксинандроста-1,4-диен-Зон-17 Д карбоновой и -4-ОКСИ-3-ОН-17 /3 карбоновой кислот.

Получение 6 а, 9 а-дифтор-11 Докси-16 а, 17 а-/(1-метилэтилиден)-бис(окси)андро- ста-1,4-диен-3-он-17 Дкарбоновой кислоты.

А. К раствору 1,99гфлюоцинолон 16 а, 17 а-ацетонида в 120 мл метанола добавляют 40 мл 20%-ного водного раствора карбоната калия. Через этот раствор барботируют струю воздуха примерно 20 ч при перемешивании при комнатной температуре. Метанол выпа- ривают и к остатку добавляют 200 мл водьи Раствор экстрагируют метиленхлоридом. Водную фазу подкисляют разбавленной хлористоводородной кислотой. Образовавшийся осадок собирают фильтрованием и рысу- шивают, что дает 1,34 г 6 с, 9 «-дифтор-11 Докси-16 а, 17 а/(1-метилэтилиден)-бис(ок- си)/андроста-1,4-диен-3-он-17 Дкарбоновой кислоты, точка плавления 264-268°С, молекулярный вес 438. Степень чистоты, определенная посредством HPLC, составляет 94,0%. Водную фазу экстрагируют этилаце- татом. После высушивания растворитель выпаривают, что оставляет дополнительно 0,26 г порцию кислоты. Чистота: 93.7%.

В.Йодную кислоту (15,1 г) в 16,5 мл воды добавляют к раствору флюоцинолон 16 а, 17 а-ацетонида (5,0 г) в 55 мл диоксана. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 20 ч, нейтрализуют насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и выпаривают. Остаток растворяют в 200 мл метиленхлорида и промывают 8 х 100 мл 10%-ного карбоната калия. Водную фазу подкисляют конц. хлористоводородной кислотой и экстрагируют 6 х 100 мл этилацетата. После высушивания растворитель выпаривают. Остаток растворяют в 400 мл этилацетата и осаждают петролейным эфиром, что дает 3,96 г 6 а, 9 а-дифтор-11/ - окси-16а , 17 а/(1-метилэтилиден)бис(ок- си)/андростата-1,4-диен-3-он-17 Д-карбоно- вой кислоты. Степень чистоты, определенная HPLC, составила 99,5%.

С. Аналогичным образом, путем замещения флюоцинолон 16 а, 17 а-ацетонидэ посредством 11Д 16 а, 17 а, 21-тетраоксип- регна-1,4-диен-3,20 диона, 6 офтор-11 Д 16 а, 17 а, 21-тетрэоксипрегна-1,4-диен-3,20 диона и получают триамцинолон 16 а, 17 а - ацетонид 11 Докси-16а , 17 а-/(1 -метили-- ден)бис(окси)/андроста-1.4-диен-3-он-17 карбоновые кислоты. В результате замещения 16 а, 17 а-ацетонидной группы на 16 а, 17 а ацетали, между 16 а-оксип- реднизолоном. 6 а-фтор-16 а-оксипредни- золоном, триамциклоном и флюоци- нолоном иацетальдегидом, пропанолом, бу- танолом, изобутаналом, пентаналом, 3-ме- ти л бута нол ом, 2,2-д и мети л про па на л ом, гексаналом, гептаналом, октаналом, нона- налом и додеканалом получают их 21-сложные эфиры (20RS)-(20R) и (20S)-11 Докси-16 «, 17 а-алкил-метилендиоксиандроста-1,4- диен-и 4-ен-3-он-17 Дкарбоновые кислоты.

П р.и м е р 4. Осуществляют тщательное перемешивание 21-ацетокси-6 а, 9 а-дифтор-11 Докси-16 а, 17 а Л-метилэтили- ден/бис/окси -прегнз-1,4-диен-3,20-диона (500 мг), 10 граммов тонкого песка (SiOa) и 20 мл бутанала. Добавляют бутанал (0.15 мл) и 70%-ную хлорную кислоту (0,15 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре

в течение пяти часов Каждый час вводят дополнительные 0,05 миллилитровые порции 70%-ной хлорной кислоты. Реакционную смесь фильтруют и твердый продукт промывают смесью 10 мл хлористого метилена и 20 мл насыщенного водного раствора МаНСОз четыре раза. Органическую фазу отделяют от соединенных промывок, высушивают над сульфатом натрия и выпаривают. Остаточный продукт очищают методом хроматографии в колонке с Sephadex LH-20 (71 х 6,3 см) хлороформом, служащим в качестве подвижной фазы. Фракцию 1965 - 2280 мл собирают, выпаривают и остаток растворяют в хлористом метилене и осаждают петролейным эфиром, так что остается 1бЗ-мг(22Р5)-21-ацетокси-16а, 17а-бутили- дендиокси-6 а, 9 а-дифтор-11 /3-оксипрегна- 1,4-диен-3,20-диона. Анализ методом жидкостной хроматографии высокого разрешения показал степень чистоты 95,7% и отношение между эпимерами (22S)- и (22R) 18 : 22. Молекулярный вес: 508 (рассчитанный молекулярный вес 508,6).

Эпимерную смесь (22RS) разделяют в колонке с Sephadex Н-20 (76 х 6,3 см) с использованием в качестве подвижной фазы смеси гептан: хлороформ:этанол в соотношении 20:20:1. Фракции 2100 - 2475 мл (А) и 2475 - 2910 мл (В) собирают и выпаривают и остаток растворяют в хлористом метилене и осаждают петролейным эфиром. Фракция А дает 22 мг (22S) и фракция В дает 119 мг (22К)-21-ацетокси-16 а, 17 а-бутили- дендиокси-6 а, 9 а-дифтор-11/3 оксипрегна- 1,4-диен-3,20-диона.

(225)-Эпимер: Молекулярный вес 508 (рассчитано 508,6). температура плавления 185-189°С.

(22Я)-эпимер: Молекулярный вес 508 (рассчитано 508,6), температура плавления 280 - 284°С /а/о25 + 88,4° / с 0,2: .

Аналогично этому, осуществляя процедуру, изложенную в примере 4, получали соединения 2а-14а, перечисленные в таблице 7.

П р и м е р 5. 1 -Этоксикарбонилоксиэтил 6 а, 9 а-дифтор-11 / -окси-16 а; 17 а-/(1-ме- тилэтилиден)бис (окси)/андроста-1,4-диен- З-он-17 /3-карбоксилат.

А. 6 а, 9 а-Дифтор-11 Д-окси-16 а, 17а (1-метилэтилиден)бис(окси)/-андроста--1,4 -диен-3-он-17/Ј-карбоновую кислоту (600 мг) и бикарбонат калия (684 мг) растворяют в 45 мл диметилформамида. Добавляют 1-бро- мэтил этилкарбонат (2 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре всю ночь. Добавляют воду (200 мл) и

смесь экстрагируют метиленхлоридом Объединенные экстракты промывают 5%-ным водным бикарбонатом и водой. Остаток очищают хроматографией на колонке Сефадеке LH-20 (72 х 6,3 см) используя хлороформ в качестве подвижной фазы. Собирают фракцию 1515 - 2250 мл и выпариваю, что дает 480 мг l -этоксикар- бонилокси-этилб а, 9 а-дифтор-11 /3-окса 16а,

17 а-/(1-метилэтилиден)бис(окси)/-андро- ста-1,4-диен-3-он-17-карбоксилат. Степень чистоты, определенная посредством HPLC, составляет 98,1%, а отношение эпимера А/В, 48/52. Точка плавления: 218 - 27°С

+63,2 (с 0,214; CHaCte). Молекулярный вес 554,

1 -Этоксикарбонилоксиэтил 6 а, 9 а- дифтор-11 /3-окси-16а, 17а-/(1-метилэтили- ден)бис(окси)/андроста-1,4-диен-3-он-17-карбоксилат (480 мг) хроматографируют на колонке Сефадекс LH-20 (76 х 6,3 см) с применением гептан:хлороформ:этанол, 20:20:1 как подвижной фазы. Собирают фракцию 2325 - 2715 мл, выпаривают и остаток растворяют в метиленхлориде, осаждают петролейным эфиром, что дает 200 мг соединения (А), имеющего степень чистоты 97,3% (определено HPLC-анализом). Точка плавления: 246-250°С. lalo25 + 100,5° (С

0,214; СНаОД. Молекулярный вес: 554.

Фракция 4140 - 5100 мл дала 250 мл соединения (В), степень чистоты на 99,0%, Точка плавления 250 - 255°С ( Ictlo - + 28,5°С 0,246, CH2CI2). Молекулярный

вес: 554.

B.6 а, 9 а-Дифтор-11 /З-окси-16 а, 17а- /(1-метилцтилиден)бис(окси)/андроста-1,4 -диен-3-он-17уЗ-карбоновую кислоту (200 мг) растворяют в 25 мл диметилформамида.

Добавляют 1-хлорэтилэтилкарбонат (100 мг), бикарбонат калия (70 мг) и 18-краун-6- простой эфир. Реакционную смесь перемешивают при 80°С 3 ч., охлаждают, после добавления 150мл воды экстрагируют метиленхлоридом, высушивают и выпаривают. Неочищенный продукт очищают, как указано в процедуре А, причем остается 207 мг

I-Этоксикарбонилоксиэтил 6а, 9 а-дифторII/ -окси-16 а, 17 а/(1-метилэтили- ден)бис(окси)/андроста-1,4-диен-3-он-17-к арбоксилат. Чистота (HPLC) составляет 98,4% и отношение эпимера А/В 54/46.

C.6 а, 9 а-Дифтор-11 /J- окси-16 а, 17 а-/(1-метилэтилиден)бис(окси)/андроста5 1,4-диен-3-он-17Дкарбоновую кислоту (200 мг) и 1,5-диазабицикло /5.4.0/ундекан-5 (140 мг) суспендируют в 25 мл бензола и нагревают до действия обратного холодильника. Добавляют раствор 1-бромэтил-этилкарбоната (175 мг) и 5 мл бензола и смесь нагревают 2,5 ч. После охлаждения добавляют 50 мл мтиленхлорида и раствор промывают водой, высушивают и упаривают. Неочищенный продукт очищают таким же образом, как в процедуре А. Выход 207 мг 1 -этоксикарбонилоксиэтил 6а, 9 а-дифтор- 11/ -окси-16а, 17а-/(метлэтилиден)бис (ок- си)/андроста-1,4-диен-3-он-17 /3-карбоксилата. Чистота (HPLC) 96,4%. От- ношение эпимера А/В 44/56.

Д. К раствору 6 а, 9 а-дифтор-11 /3-окси- 16 а, 17 а-/(1-метилиден)бис(окси)/андро- ста-1,4-диен-3-он-17 /3-карбоновой кислоты 100 мг) в 25 мл ацетона добавляют 175 мг а -бромдиэтилкарбоната и 45 мг безводного карбоната калия. Смесь нагревают 6 ч с обратным холодильником, Охлажденную реакционную смесь выливают в 150 мл воды и экстрагируют метиленхлоридом. Экстракт промывают водой, высушивают над сульфатом натрия и выпаривают. Выход 65 мг твердого 1 -этоксикарбонилоксиэтил 6 о;, 9 а-дифтор-11 / -окси-16 а, 17 а/(1-метили- ден)бис(окси)/адроста-1,4-диен-3-он-17 /3- карбоксилата. Чистота, определенная HPLC, составила 97,6% и отношение эпимера А/В 49/51.

Е. 6 а, 9 а-Дифтор-11 /2-окси-16 а. 17 а/(1-метилэтилиден)бис(окси)/а:ндроста-1, 4-диен-3-он-17/3 -карбоновую кислоту (500 мг) и кислый тетрабутиламмонийсульфат (577 мг) добавляют к 3 мл 1-м гидроокиси натрия. Добавляют также раствор 435 мг 1-бромэтилкарбоната в 50 мл метиленхло- рида, Смесь нагревают с обратным холодильником. Происходит разделение на 2 слоя. Органический слой промывают 2x10 мл воды, высушивают и выпаривают, сырой продукт очищают хроматографией на колонке Сефадекс LH-20 (72 х 6,3 см) с применением хлороформа, как подвижной фазы. Собирают фракцию 1545 - 1950 мл, выпаривают и остаток осаждают из смеси

метиленхлорида с петролейным эфиром,

Остается 341 мг 11-этоксикарбонилоксиэтил 6 а, 9 а-дифтор-11/ -окси-16 а, .17а-/(1- метилэтилиден)бис-(окси)/зндроста-1,4-ди- ен-З-он-17/З-карбоксилат. Степень чистоты, определенная посредством HPLC: 99,2%. Отношение эпимера А/В 56/44.

F. 6а, 9 а-Дифтор-11 / -окси-16 а, 17 а- /(1-метилиден)-бис-(окси)/андроста-1,4-ди- ен-З-он-17 Дкарбоновую кислоту (200 мг) и трикаприлметиламмоний хлорид (200 мг) добавляют к 5 мл насыщенного водного бикарбоната натрия. Добавляют 100 мг 1- бромметилэтилкарбоната в 10 мл

5 0

5 0 5

0 5 0

5

0

5

метиленхлорида. Смесь перемешиваю при 45°С 20 ч разбавляют 10 мл метиленхлорида, выделяют и очищают, как указано в процедуре Е. Выход 254 мг l -этокси- карбонилоксиэтил 6 а. 9 а-дифтор-11 / -окси- 16 а, 17 а-/(1-метилэтилиден)бмс(окси)/энд- роста-1,4-диен-З-он-1 7 / -карбоксилатэ. Чистота (HPLC): 97.4. Отношение эпимера А/В 60/40.

G. 6 а, 9 а-Дифтор-11 Д-окси-16 а, 17 а-/(1 -метил этил и ден)бис(о кси)/анд роста- 1,4-диен-3-он-17/ -карбоновую кислоту (200 мг) 1-бромэтилэтилкарбонат (135 мг) в триэ- тиламин (275 мг) растворяют в 200 мл диме- тилформамида. Смесь перемешивают при 8°С з ч., разбавляют 200 мл метиленхлорида, промывают водой, высушивают и выпаривают. Сырой продукт очищают, как указано в процедуре А. Получают 69 мг 1 - этоксикарбонилоксиэтил 6 а, 9 а-дифтор-11 /3-окси 16 а, 17 а-/(1-метилэтилиден)бис(ок- си)андроста-1,4-диен-3-он-17 / -карбокси- лат, Чистота (HPLC) 97,8% и отношение эпимера А/В 48/52.

Пример 6. 1 -Ацетоксиэтил 6 а, 9 а-дифтор-11 / -окси-16 а, 1 7а-/(1-метили- ден/бис(окси)/андроста-1,4-диен-3-он-17 /J- карбоксилат.

6 «, 9 а-Дифтор-11/J- окси-16 а, 17 а-/(1- метилэтилиден)бис(окси)/андроста-1,4-ди - ен-З-он-17/ -карбоновую кислоту (500 мг) и бикарбонат калия (575 мг) растворяют в 40 мл диметилформамида. Добавляют 1-хлорэ- тилацетат (1 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 40 ч. Реакционную смесь выливают в 50 мл воды и экстрагируют метиленхлоридом Экстракт промывают водным бикарбонатом натрия и водой, высушивают и выпаривают. Остаток хроматографируют на колонке Сефадекс LH-20 (72 х 6,3 см), применяя хлороформ как подвижную фазу. Фракции 1755 - 2025 и 2026- 2325 мл собирают и выпаривают.

Твердый продукт после фракции 1755 - 2025 мл дополнительно очищают хроматографией на колонке Сефадекс LH-20 (76 х 6,3 см - внутренний диаметр), используя смесь гептан-хлороформ-этанол, 20 : 20 . 1 в качестве подвижной фазы. Фракцию 2505 - 2880 мл собирают и выпаривают. Остаток растворяют в метиленхлориде и осаждают петролейным эфиром, причем остается 167 мг твердого продукта (А). Чистота, определенная HPLC 99,1 %. Точка плавления 238 - 259°С. lalo25 + 94° ( С 0,192; ). Молекулярный вес 254,

Твердый продукт из указанной выше фракции 2026- 2325 мл дополнительно очищают хроматографией так же как указано

выше. Фракцию 5100 - 5670 мл собирают и выпаривают, Остаток растворяют в мети- ленхлориде и осаждают посредством петро- лейного эфира, что дает 165 мг твердого продукта В, Чистота, определенная путем HPLC, составляет 99,4%. Точка плавления 261 - 265°С 34° (С - 0,262, ). Молекулярный вес 524.

Н-ЯМР спектры А и В являются почти тождественными, за исключением того, что метиновый квартет от сложноэфирной группы, который сдвинут на 0,16 в нижнюю область соединения В в сравнении с соединением А. Характеристики диспергирования А и В в масс-спектре соударения электронов являются идентичными, исключая интенсивности масспиков. Такие спектроскопические характеристики А и В показывают, что они являются эпимерами вследствие хирэльного центра в сложно- эфирной группе.

Примеры 7-8. Вещества, приведенные в табл.1 - 3, приготовлены, выделены и очищены по способу, аналогичному описанному в примерах 4 и 5. Фармакология.

Средство новых сложных эфиров андро- стан-17 /3-кэрбоновой кислоты по отношению к рецептору глюкокортикоида.

Все стероиды, приведенные в табл. 1 - 3 являются физиологически-активными соединениями. Средство новых сложных эфиров андростан-17 /3-карбоновой кислоты к глюкокортикоидному рецептору использовано в качестве модели для определения способности к противовоспалительному действию. Их средства к рецептору сравнивают по отношению к буденозид (/22R/S/- 16 а, 17а-бутилидендиокси-11 /3, 21-диокси- прегна-1,4-диен-3,20-диону), глюкокортико- иду повышенной активности, с благоприятным соотношением между локальным действием, и действием, относящимся к организму в целом.

Во время всех исследований используют крыс-самцов Sprague Dawley : в возрасте 1-2 мес. Зобную железу удаляют и помещают а физиологический раствор поваренной соли, охлаждаемый льдом.

Ткань гомогенизируют в гомогенизаторе Potter Elvehjem в 10 мл буферного раствора, содержащего 20 ммоль Трис, рН 7,4 10% (вес/объем) глицерина, 1 ммоль эти- лендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), 20 ммоль ЫаМоСм, 10 моль меркаптоэтано- ла. Гомогенат концентрируют 15 мин. при 20000 х 1 д. Доли слоя, всплывшего при 2000 х 1 д (230 мкл) инкубируют около 24 ч при 0°С с 100 мкл фенилметилсульфонилф- торида (ингибитор эстеразы. конечная

концентрация 0,5 ммоль), 20 мкл намеченно- ro-соперника и 50 мкл Н-меченного декса- метазона (конечная концентрация 3 нмоль). Связанный и свободный стероиды разделяют инкубированием смесь с 60 мкл 2,5% (вес/объем) активированного угля и 0,25% (вес/объем) суспензии декстрана 170 в 20 ммоль Трис, рН 7,4,1 моль ЭДТА и 20 ммоль NaMoCM 10 мин при 0°С. После этого центрифугируют при 500 х 1 g 10 мин и 230 мкл всплывшего слоя сосчитывают в 10 мл Insta- Gel в сцинтилляционном спектрофотометре Packard.

Всплывшие соли инкубируют с а) /3Н/ с

одним дексаметазоном, б) / Н/ дексамета- зоном вместе с 1000-кратным избытком намеченного дексаметазона и в) / Н/ дексаметазона вместе с 0,03 - 300-кратным избытком соперника. Неспецифическую

связь определяют, когда 1000-кратный избыток намеченного дексаметазона добавляют к /3Н/-меченому деоксаметазону. Радиоактивность, связанная с рецептором в присутствии соперника, разделенная на

радиоактивность, связанную с рецептором в отсутствии соперника и умноженная на 100 дает выраженную в % специфическую связь для меченого дексаметазона. Для каждой концентрации соперника, специфически связанная с радиоактивностью, выраженная в %, наносится на график по отношению к логарифму концентрации соперника. Кривые сравнивают при 50%-ном уровне специфической связи; в сравнении с

будезонидом, который относят как единицу относительно средства связуемости (РВА) (см. табл.4 - 7),

40

Формула изобретения

50

Способ получения стероидных полупродуктов общей формулы

CH2-OR2 .

45сн

НОу-Ч г---0

урЗ-crcNRl

Ч

5

или их 22 R/S стереоизомеров, где -,.-.-. одинарная или двойная углерод-углеродная связь,

Xi - водород или фтор;

Х2 - водород или фтор;

RI - линейный или разветвленный Ci - Сю-алкил;

R2 - атом водорода или линейный Сч Сю-ацил, отличающийся тем, что соединение общей формулы II

CHrOR2

--(Г

.сн3

-ttU

где - -. Xi, Ха и R2 имеют указанные значения, подвергают взаимодействию с альдегидом общей формулы III

,н

,

и

где RI имеет указанные значения, в присутствии кислотного катализатора такого, как хлорная кислота с последующим выделением целевых продуктов или разделением на отдельные 22 R/S стереоизоме- ры.

Изобретение относится к стероидам, в частности к получению стероидных полупродуктов формулы I CH2-OR2 «------ jTir Q«k#4 или их 22R/S стереоизомеров, где символ - - - - одинарная или двойная углерод-углеродная связь Xi - H,F; X2 - Н или F; RI - линейный или разветвленный Ci - Сю -эл- кил; R2 - Н или линейный Сч - Сю-ацил, которые обладают противовоспалительными свойствами. Цель - разработка способа получения промежуточных продуктов для синтеза новых стероидных соединений. Получение ведут из соединения формулы Ни --Н альдегида фор-лы О С , где RI указано ЧК, выше, в присутствии кислотного катализатора такого, как хлорная кислота, с последующим выделеним целевых продуктов или разделением на отдельные 22R/S стерео- изомеры. 7 табл. to С

Таблица

18 1779257

ОТа

,coo«0 Re

Ri siA-o,

f т --о- R| Х-Г--о-с ц,

1)Stphtdex LH-20 колонка(76x6,3 си) гаптам/хлорофолн/этэноп (20:20:1) качестве элюента

2)Bephadex LH-20 колонке(87,5x2,5 си) гenтаи/хлороформ/этанол {20:20:1} в качестве эловите

3)Sephadex LH-20 колонке172x6,3 сн) хлороформ качестве элоснта

4)Sephadex LH-20 колонка(80,2,5 см) хлороформ в клчестве элюентв

5)Sephadex LH-20 колонка((5 см) хлороформ кеместов элюента

Таблица k

Суммируюцая, относительные средств свя уемости (RBA) по отношение и глвкостероипному рецептору некоторых мсследовзнных соединения

21

НО

22

Т а 6 Л и ц