Способ получения сложных эфиров 16,17-ацетальзамещенной андростан-17 @ -карбоновой кислоты Советский патент 1993 года по МПК C07F3/00 

шийся осадок собирают фильтрованием и высушивают, что дает 1,34 г 6«, 9«-дифтор- 11/ -окси-16«, 17« -(1-метилэтилиден)- бис(окси)гандроста-1,4-диен- 3-он-17/ -кар- боновой кислоты, точка плавления 264- 268°С, молекулярный вес 438. Степень чистоты, определенная посредством HPLC, составляет 94,0%. Водную фазу экстрагируют этилацетатом. После высушивания растворитель выпаривают, что оставляет дополнительно 0,26 г порцию кислоты. Чистота: 93,7%.

В. Йодную кислоту(15,1 г)в 16,5мл воды добавляют к раствору флюоцинолон 16а, Ма -ацетонида (5,0 г) в 55 мл диоксана. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 20 ч. нейтрализуют насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и выпаривают. Остаток растворяют в 200 мл метиленхлорида и промывают 8 х ТОО мл 10%-ного карбоната калия. Водную фазу п одкисляют конц.хлористоводородной кислотой и экстрагируют 6 х 100 мл эти.лацетата. После высушивания растворитель выпаривают. Остаток растворяют в 400 мл этилацетата и осаждают петролейным эфиром, что дает 3,96 г 6а, 9о:-дифтор-11/ -гидрокси-16сЈ, 17а -(1-метилэтилиден)бис (окси) эндроста-1,4-диен-3-он-17/3-карбо- новой кислоты. Степень чистоты, опреде- ленная HPLC, составила 99,5%.

С. Аналогичным образом, следуя процедуре, изложенной в примере при замене флюоцинолон 16а, 17а-ацетонида 11/3, 16а, 17а, 21-тетрагидроксипрегна-1,4-диен-3,20- диона; 6а-фтор-ИД 16«, Ма, 21-тетрагид- роксипрегна-1,4-диен-3,20-диона и получают триамцинолон 16«, 17а-ацетонид 11/3-гидрокси-16«, 17«-(1- метилиден)бис (окси) андростэ-1,4-диен-3-он-17/ -карбоно- вые кислоты.

Пример 4..1 -Этоксикарбонилоксиэ- тил бег, 9#-дифтор-11/ - гидрокси-16а, 17« (1-метилэтилиден)бис(окси)андроста-1,4- диен-3-он-17/ -карбоксилат.

А. 6«, 9а-Дифтор-11/ -гидрокси-16«. 17а -(1- метилэтилиден)бис(окси)-андро- ста-1,4-диен-3-он-17/3 -карбоновую кислоту (600 мг) и бикарбонат калия (684 мг) растворяют в 45 мл диметилформамида. Добавляют 1-бромэтил этилкарбонат (2 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре на протяжении ночи. Добавляют воду (200 мл) и смесь экстрагируют, метиленхлоридом. Объединенные экстракты промывают 5%-ным водным бикарбонатом и водой. Остаток очищают хро- матографией на колонке СефадексШ-20

0

5 0 5 0

5 0

5

(72 х 6,3 см), используя хлороформ в качестве подвижной фазы. Собирают фракцию 1515-2250 мл и выпаривают, что дает 480мг 1 -этоксикарбонилоксиэтил бес, 9 2-дифтор- 11/3 -гидрокси-16а, 17а-(1-метилэтилиден) ,бис(окси)-андроста-1,4- диен-З-он-17/ - карбоксилат. Степень чистоты, определенная посредством HPLC, составляет 98.1 %, а соотношение эпимеров А/В, 48/52. Точка плавления: 218-227°С. (а)о + 63,2 (с 0,214; CHaCte). Молекулярный вес 554.

1 -Этоксикарбонилоксиэтил 6а, 9а- дифтор-11 -гидрокси-16а, 17а -(1-метилэ- тилиден)бис(окси)андроста-1,4-диен-3-он- 17/ -карбоксилат (480 мг) хроматографиру- ют на колонке Сефадекс 1Й20 (76 х 6,3 см) с применением смеси гептан:хлоро- форм:этанол, 20:20:1 в качестве подвижной фазы. Собирают фракцию 2325-2715 мл, выпаривают и остаток растворяют в метиленх- лориде, осаждают петролейным эфиром, что дает 200 мг соединения (А), имеющего степень чистоты 97,3% (определено HPLC анализом). Точка плавления: 246-250°С («)D25 100,5° (с - 0,214; CH2CI2). Молекулярный вес: 554.

Фракция 4140-5100 мл дала 250 мл соединения (В), степень чистоты 99,0%. Точка плавления: 250-255°С ( а)о25 + 28,5° (С 0,246 CH2CI2). Молекулярный вес: 554. Сигнал метина и сложноэфирной группы 0,13 млн.дол. смещен вниз поля в Н-ЯМР спектре В по сравнению с А, между тем как остаточные части спектров почти идентич- .ны.

В. 6а, 9а-Дифтор-11/3-гидрокси-16«, 17а -(1-метилэтилиден)бис(окси)андроста- 1,4-диен-3-он-17/3 -карбоновую кислоту (200 мг) растворяют в 25 мл диметилформамида. Добавляют 1-хлорэтил-этил карбонат (100 мг), бикарбонат калия (70 мг) и 18-кроун-6- простой эфир. Реакционную смесь перемешивают при 80°С 3 ч., охлаждают, после добавления 150 мл воды экстрагируют мети- .ленхлоридом,. высушивают и выпаривают. Неочищенный продукт очищают, как указано в процедуре А, причем остается 207 мг 1 -Этоксикарбонилоксиэтил 6а, 9«-дифтор- 11/j .-гидрокси-16«, 17«(1-метилэтили- ден)бис(окси) андроста-1,4-диен-3- он-17/ -карбоксилат. Чистота (HPLC) составляет 98,4% и соотношение эпимеров А/В 54/46.

С. 6«, 9«-Дифтор-11/ -гидрокси-1б«, (1-метилэтилиден) бис(окси)андроста- 1.4-диен-З-он-17/ -карбоновую кислоту (200 мг) и 1,5-диазабицикло (5,4.0)ундецен-5(140 мг) суспендируют в 25 мл бензола и нагревают до дефлегмации.

Добавляют раствор 1-бромэтил-этил- карбоната (175 мг) в 5 мл бензола и смесь нагревают 2,5 ч. После охлаждения добавляют 50 мл метиленхлорида и раствор промывают водой, высушивают и упаривают. Неочищенный продукт очищают таким же образом, как в процедуре А. Получают 207 мг 1 -этоксикарбонилоксиэтил , 9й-диф- тор-11/3 -гидрокси-16 7, 17а(метилэтили- ден)бис(окси)эндроста-1,4-диен-3 -он-17/3 -карбоксилата. Чистота (HPLC) 96,4%. Отношение эпимеров А/В 44/56.

D. К раствору бог, 9« -дифтор-11/3 -гйдрокси-16а, 17а(1- метилиден)бис(окси)андро- ста-1,4-диен-З-он-17/3 -карбоновой кислоты (100 мг) в 25 мл ацетона добавляют 175 мг а-бромдиэтилкарбоната и 45 мг безводного карбоната калия. Смесь нагревают 6 ч. с обратным холодильником. Охлажденную реакционную смесь.выливают в 150 мл воды и экстрагируют метиленхлоридом. Экстракт промывают водой, высушивают над сульфатом натрия и выпаривают. Выход 65мгтвердого Г-этоксикарбонилоксиэтил 6а, - дифтор-11/3-гидрокси-16а, 17о:(1-метили- ден)бис(окси)андроста- 1,4-диен-3-он-17/3 - карбоксилата. Чистота, определенная HPLC, составила 97,6% и отношение зпиме- ров А/В 49/51.

Е. бес, 9а-Дифтор-11/3-гидрокси-16 7, 17а -(1-метилэтилиден) бис(окси)андро- ста-1,4-диен-З-он-17/3 -карбоновую кислоту (500 мг) и кислый тетрабутиламмоний сульфат (577мг) добавляют к 3 мл 1-м гидроокси натрия. Добавляют также раствор 435 мг 1-бромдиэтилкарбоната в 50 мл метиленхлорида. Смесь нагревают с обратным холодильником. Происходит разделение на 2 слоя. Органический слой промывают 2 х 10 мл воды, высушивают и выпаривают, сы- рой продукт очищают хроматографией на колонке Сефадекс LH-20 (72 х 6,3 см) с применением хлороформа, в качестве подвижной фазы. Собирают фракцию 1545- 1950 мл, выпаривают и остаток осаждают из смеси метиленхлорида и петролейным эфиром. Остается 341 мг Г-этоксикарбонилоксиэтил 6« , 9г -дифтор-11/3-гидро- кси-16 7, 17а-(1-метилэтилиден)- бис(окси) андроста -1,4 - диен - 3 - он-1 7/3 -карбоксилат. Степень чистоты, определенная посредством HPLC: 99.2%. Отношение эпимеров А/ В 56/44.

F. бо, 9а-Дифтор-11/3-гидрокси-16а, 17а -{(1-метилиден)бис (окси)андроста-1,4- диен-З-он-17/ -карбоновую кислоту (200 мг) и трикаприлметиламмоний хлорид (200 мг) добавляют к 5 мл насыщенного водного бикарбоната натрия. Добавляют 100 мг 1бромметилэтилкарбоната в 10 мл метиленхлорида. Смесь перемешивают при 45°С 20 ч, разбавляют 10 мл метиленхлорида, выделяют и очищают как указа.но в процедуре Е. Получают 254 мг 1 -этоксикарбони- локсиэдилбег, 9а -дифтор-11/3 -гидрокси-16а, 11а (1 -мети- лэтилиден)бис | окси)анд роста-1 -диен-Зон- 7/3-карбоксилата. Чистота (HPLC):97,4. Отношение эпимера А/В 60/40.

G. 6а, 9а-Дифтор-11/3-гидрокси-16а:, 17d (1-метилэтилиден)бис (окси)андроста- 1,4-диен-3-он-17/ -карбоновую кислоту (200 мг), 1-бромэтилэтилкарбонат (135 мг) и три- этиламин (275 мг) растворяют в 20 мл диме-тилформамида. Смесь перемешивают при 80°С 3 ч, разбавляют 200 мл метиленхлорида, промывают водой, высушивают и выпаривают. Сырой продукт очищают, как указано в процедуре А. Получают 69 мг V- этоксикарбонилоксиэтил 6а, 9 7-дифтор- 11)3.- гидрокси-16а, 17о(1- метилэти- лиден)бис (окси)андроета-1,4-диен-3- он- 17/3-карбоксилат. Чистота (HPLC) 97,8% и отношение эпимеров А/В 48/52.

Примере. Г-Ацетоксиэтил 6а, 9«

-дифтор-11/S -гидрокси-16а, 11а -(1 -метили- ден)бис(окси)андроста-1,4-диен-3-он-17/ - карбоксилат.

6«, 9а-Дифтор-11/3-гидрокси-16а, 17« (1-метилэтилиден)бис (окси)андроста-1,4- диен-З-он-17/З-карбоновую кислоту (500 мг) и бикарбонат калия (575 мг) растворяют в 40 мл диметилформамида, Добавляют 1-хлорэ- тилацетат (1 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 40 ч. Реакционную смесь выливают в 50 мл воды и экстрагируют метиленхлоридом. Экстракт промывают водным бикарбонатом натрия и водой, высушивают и выпаривают. Остаток хроматографируют на колонке Сефадекс LH-20 (72 х 6,3 см), применяя хлороформ как подвижную фазу. Фракции 1755-2025 и 2026-2325 мл собирают и выпаривают.

Твердый продукт от фракции 1755-2025 мл дополнительно очищают хроматографией на колонке Сефадекс LH-20 (76 х 6,3 см - внутренний диаметр), используя смесь гептан-хлороформ-этанол, 20:20:1 в качестве подвижной фазы. Фракцию 2505-2880 мл собирают и выпаривают. Остаток растворяют в метиленхлориде и осаждают петролейным эфиром, причем остается 167 мг твердого продукта (А). Чистота, определенная HPLC 99,1%. Точка плавления 238- 259°С (а )о25 + 94° (С - 0,192: CH2Cl2). Молекулярный вес 254.

Твердый продукт из указанной выше фракции 2026-2325 мл дополнительно очищают хроматографией так же, как указано выше. Фракцию 5100-5670 мл собирают и выпаривают, Остаток растворяют в мети- лёнхлориде и осаждают посредством петро- лейного эфира, что дает 165 мг твердого продукта В. Чистота, определенная путем HPLC, составляет 99,4%. Точка плавления 261-265°C(a)D25 + 34°(C-0,262;CH2C.l2).. Молекулярный вес 524.

Н-ЯМР спектры А и В являются почти тождественными, за исключением того, что метиновый квартет от сложноэфирной группы, который сдвинут на 0,16 млн.дол. в нижнюю область соединения В в сравнении с соединением А. Характеристики т/е А и В в масс-спектре являются идентичными, исключая интенсивности. Такие спектроскопические характеристики А и В показывают, что они являются эпимерами вследствие хирального центра в сложно- эфирной группе.

П р и м е р 6-88. Вещества, приведенные в таблицах 1-3. приготовлены, выделены и очищены по способу, аналогичному описанному в примерах 4 и 5.

Примечание к таблице 1.

1) На колонке Сефадекс Ш-20 (76 х 6,3 см), применяя хлороформ; гептан-этанол (20:20:1), в качестве подвижной фазы.

2) На колонке Сефадекс Ш-20 (87,5 х х 2,5 см), применяя хлороформ-гептан-эта- нол (20:20:1) в качестве подвижной фазы.

3) На колонке Сефадекс LH-20 (85 х 2,5 см), применяя хлороформ в качестве подвижной фазы.

4) На колонке Сефадекс Ш-20 (72,6 х х 3 см), применяя хлороформ в качестве подвижной фазы.

5) На колонке Сефадекс Ш-20 (71,5 х х 6,3 см), применяя хлороформ в качестве подвижной фазы,

Примечание к таблице 2.

1) На колонке Сефадекс LH-20 (72 х 6,3 см), применяя хлороформ в качестве подвижной фазы.

2) На колонке Сефадекс LH-20 (83 х 2,5 см), применяя хлороформ в качестве подвижной фазы..

Примечание к таблице 3.

1) На колонке Сефадекс Ш-20 (76 х 6,3 см), применяя тептан-хлороформ-этанол (20:10:1) в качестве подвижной фазы.

2) На колонке Сефадекс Ш-20 (87,5 х х 2,5 см), применяя гептан- хлороформ-эта- нол (20:10:1) в качестве подвижной фазы.

3) На колонке Сефадекс LH-20 (72 х 6,3 см), применяя хлороформ в качестве подвижной фазы.

4) На колонке Сефадекс Ш-20 (80 х 2,5 см), применяя хлороформ в качестве подвижной фазы.

5) На колонке Сефадекс Ш-20 (81,5 х

х 2,5 см), применяя хлороформ в качестве подвижной фазы. Фармокология.

Сродство новых сложных эфиров андро- стан-17/3 -карбоновой кислоты по отношению к рецептору глюкокортикоида.

Все стероиды, соответствующие настоящему изобретению, являются физиологически активными соединениями. Сродство новых сложных эфиров андростан-17/З-карбоновой кислоты к глкжокортикоидному рецептору использовано в качестве модели для определения способности к противовоспалительному действию. средства к рецептору сравнивают с будезонйдом//22В/5/-16а, . 17а -бутилидендиокси- 11/, 21-диоксипрегна-1,4-дие.н-3,20-дион/, глюкокортикоидом повышенной активности, с благоприятным соотношением между локальным действием, и действием, относящимся к организму в целом (Fhalen and Brattsand. Arzneim. - Forsch, 29, 1687-90 (1979).

Во время всех исследований используют крыс - самцов Spraque-Dawley в возрасте 1-2 месяцев, Зобную железу удаляют и помещают в физиологический раствор поваренной соли, охлаждаемый льдом. Ткань гомогенизируют в гомогенизаторе Potter Elvehjem в 10 мл буферного раствора,

содержащего 2-0 ммоль Трис, рН 7,4 10% (вес-объем) глицерина, 1 ммоль этилендиа- минт етрауксусной кислоты (ЭДТА), 20 ммоль NaMoCM, 10 ммоль меркаптоэтанола. Гомогенат концентрируют 15 мин. при

20000 xlg. Доли слоя, всплывшего при 20000 х Ig (230 мкл), инкубируют около 24 ч при 0°С с 100 мкл фенилметилсульфонилфторида (ингибитор эстеразы, конечная концентрация 0,5 ммоль), 20 мкл немеченного соперника и 50 мкл 3Н-мечёного дексаметазона (конечная концентрация 3 нмоль). Связанный и свободный стероиды разделяют инку- бированием смеси с 60 мкл 2,5% (вес/объем) активированного угля и 0,25%

(вес/объем) суспензии декстрана 170 в 20

ммоль Трис, рИ 7,4 1 ммоль ЭДТА и 20

ммоль NaMoO 10 мин при 0°С. После этого

центрифугируют при 500 х Ig 10 мин. и 230

мкл всплывшего слоя сосчитывают в 10 мл

Insta-Gel в сцинтилляционном спектрофотометре Packard. Всплывшие слои инкубируют с а) с одним (3Н) дексаметазоном, б) ( Н)дексаметаэоном вместе с 1000-кратным избытком немеченого дексаметазона и в)

(3Н) дексаметазоном вместе с 0,03-300- кратным избытком соперника. Неспецифическую связь определяют, когда 1000-кратный избыток немеченого декса- .метазона добавляютк( Н)-меченому декса- метазону. Радиоактивность, связанная с рецептором в присутствии соперника, разделенная на радиоактивность, связанную с рецептором в отсутствии соперника и умноженная на 100, дает выраженную в % специфическую связь для меченого дексэ- метазона. Для каждой концентрации соперника специфически связанная радиоактивность, выраженная в %, наносится на график по отношению к логарифму концентрации соперника. Кривые сравнивают

при 50%-ном уровне специфической связи, и относят к будезониду, относительное сродство связуемости (RBA), которого принимают за 1.

Табл.4 суммирует относительное, сродство связуемости (RB А) по отношению кглю- костероидному рецептору для некоторых исследованных соединений.

-сн

JO,

2 О

1,2-положение является насыщенным или означает двойную связь.

Y - кислород, при условии, если R2 - водород, то RI - Ci-C/i-алкил. отличающ и и с я тем, что соединение общей формулы

где имеют указанные значения, или общей формулы

R

г-G-o-co-Y-Re RS

где и Y имеют указанные значения;

Z - галоген,

с последующим при необходимости хрома- тографическим разделением полученной эпимерной смеси на отдельные эпимеры,

1) На Сефадексв LH-20 голонка (76 х 6J сн) подвиж.фаи хлороформ-гетан-этанол (20:20:1).. .

2) На Сефадексв LH-20 колонка (B7.S к 25 ем) .фааа «лорофори-птан-гпнки (20:20:1).

3) На С«Фаде св LH-20 колони (85 IS w} подмш.фаи - хлороформ.

4) На Ссфадексе LH-Ю колонка (П х 6.3 см) подаиж.фаэа хлороформ.

5) На Офадексв LH-20 колонка (71.5 х 6.3 см) подаиж.фаи - хлороформ. Таблица

1) На СеФ«ле«с« LH-20 колонка (72 х в.З см) подакк.фам - хлороформ.

2) На Софадеисв LH-20 колонка (83 х 2.5 см) под кж:ф«а хлороформ.

Таблица 1

Эпимвр А

Элинер 8

1 На Сефадексе LH-20 колонка (72x6,3 см) подвиж.фаза-хлороформ

2 На Сефадексе Ш-20 колонка (83x2,5 см) подвиж. фаза-хлороформ

лг-к O-NH

Эпимер В

со ел

СО

-J

N3

1290-1665

1110-1260

1245-1440

1485--1800

1200-1395

320-4002

225-2852

1410-1545

1620-2175

г)

О

1)

1)

-I)

-f

М Seen,

) Н Сефадексс LH-20 колонн (76 6.3 си) подаиж.фаэа гетаи-хлороформ-этаиол . (20-20- Ч WIOHIt 87-5 2-5 см) подвиж.ф.з, г«пт н-хлорЬфори-эт но

3) На Сефадеисе LH-JO «рломш (72 6.Э см) подвиж.фаза хлороформ. 1) На С«фадексе LH-20 колонка (ВО 2.5 см) подвиж фэээ хлороформ. 5) Из Сефаае«се LH-20 колонка (81.5 х }.5 см) лодвиж.фаэа хлороформ.

Т а

б л и ц а 3

25

1795972

26 Таблица 4