Способ получения производных 4-прегнена или смеси их стереоизомеров или 22-эпимеров Советский патент 1985 года по МПК C07J5/00 A61K31/573 

1-5 атомами углерода, а при необходимости целевые соединения подвергают до или после этерифицирования хроматографии на поперечно связанном дексТрановом геле с использованием органического растворителя в качестве элюента.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а rent и и с я тем, что в качестве поперечно связанного декстранового геля

используют оксипропилированнын декстрановый гель в форме шариков,в котором декстрановые цепи связаны поперечно и создают трехмерный полисахаридный каркас, а в качестве органического растворителя - смесь н-гептана, хлороформа и этанола в соотношении 0,5:(50-100): :(10-1).

1. Способ получения производных 4-прегнена формулы 1 подвергают взаимодействию с альдегидом формулы А-СНО или его ацеталями Вг-С-Ох. А , О) БЗ-С-О А или В B.J Вз/С-0. А CFI R Од А О) где А - н-пропил или н-бутил; Z - гидроксил или гидроксил, этерифицированный- жирной кислотой с прямой или разветвленной углеводородной цепью, имеющей 1-5 атомов углерода, или смеси их с тереоизомеров или их 22-эпимеров а. - или 5-типа, отличающийся тем, что оксикортизол формулы И где А имеет указанные значения; - одинаковые или различные и каждый представляет собой водород или алкильную группу с прямой или разветвленной углеводородной цепью, имеющей 1-4 атома углерода, в присутствии кислотного катализатора и при необходимости у полученного соединения этерифицируют 21-оксигруппу жирной кислотой с прямой или разветвленной углеводородной цепью с

Изобретение относится к способу получения новых производных 4-прегнена формулы 1 CH,Z где А - н-пропил или н-бутил; 2 - гидроксил или гидроксил, этерифицированный жирной кислотой с прямой или разветвленной углеводо родной цепью, имеющей 1-5 атомов уг лерода, или смеси их стереоизомеров или их 22-эпимеров R- или 5-типа, обладающих ценными фармакологически ми свойствами - высокой местной про тквовоспалительной активностью и од иЬвременно низким глюкокортикоидным системным действием. Известны глюкокортикоиды общей 1 CHtZ со т.,-, X - атом водорода или фтора в случае, когда У-атом водорода, и X - атом фтора в случае, когда У - фтор; Z - свободная или этерифицированная гидроксильная группа; R - алкил Cj-€,,; обладающие местным противовоспалительным действием . Соединения общей формулы 1 а получают путем взаимодействия соответствующего 16о, 17о -диола с альдегидом формулы , где R имеет указанные значения, в присутствии кислого катализатора, например хлорной кислоты в среде диоксана, образовавшееся ацетальное производное формулы 1 « подвергают очистке путем гельфильтрации на поперечно связанных декстрановых гелях, например оксипропилированных lj. Цель изобретения - получение новых стероидных соединений, обладакяцих улучшенными фрамакологическими свойствами. Цель достигается согласно способу получения производных 4-прегнена общей формулы J или смеси их стереоизомеров или их 22-эпимеров, основанному на известном методе tl и заключающетом, что оксикортизол формумуся в лы П СНгОН подвергают взаимодействию с альдегидом формулы А - СНО или его ацеталями B2-CилиBj-C4где. A имеет указанные значения; i(, одинаковые или различны и каждый представляет собой водород или алкил ную группу с прямой или разветвленной углеводородной цепью, имеющей 1-4 углерода, в присутствии кислотного катализато ра и при необходимости у полученног соединения этерифицируют 21-оксигру пу жирной кислотой с прямой или раз ветвленной углеводородной цепью с 1-5 атомами углерода, а при необходимости целевые соединения подверга ют до или после этерифицирования хроматографии на поперечном связанном декстрановом геле с использован ем органического растворителя в качестве элюента. В качестве поперечно связанного декстранового геля предпочтительно используют оксипропилированный г декстрановый гель в форме шариков, котором декстрановые цепи связаны поперечно и создают трехмерньо поли сахаридный каркас, а в качестве орг нического растворителя - смесь н-ге тана, хлороформа и этанола в соотно шении 0,5:(50-100):(10-1). Реакция между 16 оС-оксикортизоло и альдегидом или ацеталем желательн осуществляется путем добавления стероида к раствору альдегида или ацеталя вместе с кислотньа катализа тором, например хлорной, п-толуолсу фокислотной, соляной и другими, в диоксане или эквивалентных раствори телях, причем реакционная смесь затем нейтрализуется метиленхлоридом. Полученное неочищенное стероид-аце04тальное производное, которое состоит из смеси 22R- и 225-эпимеров, после выделения очищают путем хроматографии на подходящем материале,например поперечне связанных декстрановых гелях смолы типа Сефадекс LH с подходящими растворителями в качестве элюентов, например галоидированными углеводородами, простыми эфирами ,сложными зфирами, такими как этилацетат или ацетонитрил. Пример 1. 1бо 17 - 22R JПроцилметилендиокси-4-прегнен-11/, 21-диол-3,20-дион. К раствору 125 мг евежеперегнанного н-бутаналя и 0,1 мл 72%-ной хлорной кислоты в 20 мл тщательно очищенного и высушенного диоксана добавляют порциями 500 мг 16о(-оксикортизола в течение 15 мин при перемешивании. Реакционной смеси затем дают отстояться 5 ч при перемешивании при комнатной температуре. Затем смесь разбавляют 100 мл метиленхлорида. Раствор промывают 10%-ным раствором карбоната калия и водой, затем сушат и упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на колонке с внутренним диаметром 77 6,3 см, заполненной Сефадексом LH-20, используя хлороформ в качестве элюента. Фракцию 1995-2235 мл собирают и упаривают. Остаток растворяют в метиленхлориде и осаждают петролейным эфиром. Получено 446 мг (89;) 6oL, 17в, (22 RS)пропилметилендиокси-4-прегнен-11р, 21-диол-3,20-диона, HPLC-анализ показал 99,2%-ную чистоту и соотношение между 22S- и 22Р-эпимерами 47:53. Продукт имеет точку плавления 175-203°C,i -1-138,0(,198; CHjClj); молекулярный вес 432 (шлчисленный 432,6). П р и м е р 2. 16ci, 17o - 22R5 Пропилметилендиокси-4-прегнен-11/3, 21-диод-З,20-дион. К раствору 118 мг н-бутанал 6-диэтилацеталя и О,1 мл 72%-ной хлорной кислоты в 25 мл тщательно очищенного и высушенного диоксана добавляют 200 мг 16о{-оксикортизола порциями в течение 15 мин. Реакционной смеси дают отстояться при комнатной температуре в 5 ч. .Аналогично примеру 1 получают 214 мг неочищенного продукта. Продукт хроматографируют в колоне с внутренним диаметром 83-2,5 см, заполненной Сефадексом LH-20, с использованием хлороформа в каче.стве элюента. .Фракцию 365-356 мл собирают и упаривают. Остаток далее очищают с помощью хроматографии на колонке Сефадекс 1К-20 (85-2,5 см) с использованием в качестве элюента смеси н-гептан-хлороформ-этанола (20:20:1) Собирают и упаривают, фракцию 8551010 мл. Остаток растворяют в метиленхлориде и осаждают петролейным эфиром. Получают 152 мг (67%) 16о(, р53-пропилметилендиокси-4прегнен-11/5, 21-диол-3,20-диона, НР1.С-анализ показал 98,2%-ную чистоту и соотношение 43:57 между 225- и 22R-эпимepaми. Молекулярный вес 432 (вычисленный 432,6). Примерз. 16с, 17 - 22R5 Пропилметш1ендиокси-11/J -окси-21ацетокси-4-прегнен-3,20-дион. К раствору 918 мг 16оС, 17в( R5 пропш1метилендиокси-4-прегнен-11/5, 21-диол-3,20-диона в 60 мл пиридина по каплям при перемешивании добавляют раствор 460 мг ацетилхлорида в 30 мл диоксана. Реакционной смеси дают отстояться в течение ночи при комнатной температуре, а затем разбавляют 500 мл метиленхлорида, промы вают 5%-ным водным раствором карбона та натрия, водой и сушат. После упаривания в вакууме остаток хроматогра фируют на колонке .с внутренним диаметром 72 6,3 см, заполненной Сафадексом LH-20, с использованием хлоро форма в качестве элюента. Фракцию 1275-1695 мл собирают, упаривают и осаждают смесью метиленхлорида и пет ролейного эфира. Получают 671 мг (67%) 16в/, 17У-С22Я51-пропилметилендиокси-11 /)-окси-21-aцeтoкcи-4-пpeгнeн-3,20-диoнa, HPLC-анализ показал 99%-ную чистоту и соотношение между 225- и 22Н-эпимерзми 53:47. Продукт имеет точку плавления 118-137°С; ,,200, CHjClp; молекулярный вес 474 (вычислено 474,6). П р и м е р 4. 16ci, 17oi-i22Sj- и 16oi;, 17о -С22КЗ-Пропилметилендиокси11/5-ркси-21-ацетокси-4-прегнен-3,20дион. 16о, Пропилметилендио он-11/ |-окси-21-ацетокси-4- прегнен3,20-дион (40 мг) хроматографируют на колонке с внутренним диаметром 75-6,3 см, заполненной Сефадексом LH-20, с использованием в качестве элюекта смеси н-гептан-хлороформ-эт нол (20:20:1). Собирают и упаривают фракции 1530-1680 мл и 1681-1860 мл. Оба продукта осаждают из смеси метилeнxлof)идa и петролейного эфира. Продукт из первой фракции (16,5 мг) идентифицируют при помощи Н-ЯМР и масс-спектрометрии как 22Й-эпимер, а продукт из последующей фракции (13 мг) таким же образом - как 22Rэпимер. Эпимер 5 имеет точку плавления176-179 С;Гй : д +107,3(,262, СН2С12); молекулярный вес 474 (вычисленный 474,6). ЭпимерР-точку плавления 112-117С;М25 +132,2« (,152; ); молекулярный вес 474 (вычисленный 474,6). Чистота эпимеров определена, как 99,7%-ная для 5-эпимера и 95,0%-ная для R-эпимера, 4% примесей R-эпимера составляет эпи.мер S . П р и м е р 5. 16oi, 17u/-C225R Пропилметилендиокси-11 -окси-21-бутирилокси-4-прегнен-3,20-дион. К раствору 100 мг 16of, Пропилметилендиокси-4-пре гнен-11/1, 21-диол-3,20-диона в 5 мл пиридина по каплям добавляют 70 мг бутирилхлорида в 3 мл диоксана. Реакцию и выделение неочищенного продукта проводят аналогично примеру 2. Сырой продукт хроматографируют на колонке с внутренним диаметром 80-2,5 см, заполненной Сефадексом LH-20, с использованием хлороформа, как элюента. Фракцию 200-250 мл собирают, упаривают и осаждают из смеси метиленхлорида и петролейного эфира. Получают 70 мг (60%) 16od, 17о - 221 5 пропилметилендиокси-11/}-окси-21-бутирилокси-4-прегнен-3,20-диона. HPLC-анализ показал 99,7%-ную чистоту и соотношение 225 и 22/ -эпимеров 44:56. Продукт имеет точку плавления 64-75С; ,,218, ); молекулярный вес 502 (вычисленный 502,6). П р и м е р 6. 16a,17o -f22RS Пропилметилендиокси-11/}-окси-21-пивалш1окси-4-прегнен-3,20-дион. К раствору 100 мг 16о, 17( Пропилметштендиокси-4-прегнен-11 /з, 21-диол-З,20-диона в 5 мл пиридина по каплям добавляют раствор 65 мг триметилацетилхлорида в 3 мл диоксана. Реакцию и выделение сырого продукта проводят аналогично примеру 2. Сырой продукт хроматографируют на колонке с внутренним диаметром 73 ,3 см, заполненной Сефадексом 1.Н-20, с использованием хлороформа в качест ве элюента. Фракцию 1245-1485 мл собирамт, уп ривают и осаждают из смеси метиленхлорида и петролейного эфира. Получают 74 мг (61%) 16 17 /-i;22R5jпропилметилендиокси-1 1|9-окси-21 пивалилокси-4-прегнен-З,20-диона. Анализ показал чистоту 98,7% и соотношение между 225- и 22Р-эпимерами 46:54. Продукт имеет точку плавления 95- 05C; ci -Ш5,5(,110, .) молекулярный вес 516 (вычисленный 516,7). П р и м е р 7. 16oi, 17о -Г22Я5 Бутилметш1ендиокси-4-прегнен-11р, 21-диол-3,20-дион. К раствору 170 мг н-пентаналя и 0,3 мл хлорной кислоты (72%) в тщательно очищенном и высушенном диокса не добавляют 500 мг 16о -оксикортизола порциями в течение 15 мин. Затем реакционной смеси дают отстояться 5 ч при комнатной температуре. Аналогично примеру 1 получают 1590 мг сырого продукта, который хроматографируют на колонке с внутренним диаметром 73-6,3 см, заполненной Сефадексом LH-20, с использованием хлоро форма в качестве элюента. Собирают и упаривают фракцию 1860-2400 мл. Остаток растворяют в метиленхлориде и осаждают из петролейного эфира. По лучают 513 мг (87%) 16ci, 17oi:-C22ReJбутилметилендиокси-4-прегнен-11э, 21-диол-3,20-диона. Анализ показьтает чистоту 98,9% и соотношение 50:50 между 225- и 22К-эпимерами. Продукт имеет точку плавления 154-160С; ,,308, СНгСГз); молекулярньй вес 446 (вьмисленный 446,6) П р и м е р 8. 16с/, 17oi-f22RS Бутилметилендиокси-4-прегнен-1IP, 21-диол-3,20-дион. К раствору 53 мг н-пентанал-6-про пиленацеталя и 0,1 мл 72%-ной хлорно кислоты в 25 мл тщательно очищенного и высушенного диоксана добавляют 100 мг 16о -оксикортизола порциями в течение 15 мин. Реакционной смеси дают отстояться 5 ч при комнатной температуре и ведут обработку аналогично примеру 1. Сырой продукт хрома тографируют на колонке с внутренним диаметром 83-2,5 см, заполненной Сефадексом LH-20, с использованием хлороформа в качестве элюента. Собирают и выпаривают фракцию 285-380 мл Данный продукт далее очищают с помощью хроматографии на Сефадексе LH-20 (колонка с внутренним диаметром 85-2,5 см) с использованием смеси Н2 ептан-хлороформ-зтанол (20:20:1) в качестве элюента. Собирают и упаривают фракцию 735-915 мл. Остаток растворяют в метиленхлориде и осаждают петролейным эфиром. Получают 77 мг (64%) 16о, 17о6- 22Р5 -бутш1метилендиокси-4-прегнен-11, 21гдиол-3,20диона. Анализ показал 96,8%-кую чистоту и соотношение 22S- и 22Р-эпимеров 46:54; молекулярный вес 446 (вычисленный 446,6). Пример9. 16в( 17о(. и 16с/, 1 Rj-Бутилметилендиокси4-прегнен-11б, 21-диол-3,20-дион. 16ot, 1 7) J-Бутилметилендиокси-4-прегнен-11/3, 21-диол-3,20-дион (500 мг) хроматографируют на колонке с внутренним диаметром 76-6,3 см, заполненной Сефадексом L,H-20, с использованием смеси н-гептан-хлороформэтанол (20:20:1) в качестве элюента.. Фракции 4050-4395 и 4771-4950 мл собирают, упаривают и осаждают из смеси метиленхлорида и петролейного эфира. Продукты идентифицируют с помощью Н-ЯМР и масс-спектрометрии как З-эпимер (79 мг) и R-эпимер (127 мг) соответственно. Чистота эпимеров 97,3% (содержание R-эпимера 2,1% для S-эпимера) и 97, (содержание 5-эпимера 0,5% для R-эпимера. Кроме того, эпимер S имеет точку плавления 165-71°C,-W2 +П9,9°(,382, CHjCI ); молекулярный вес 446 (вычисленный 446,6), а эпимер R- точку плавления 154-62 °С; 0 -ь148,3 (,302, ); молекулярный вес 446 (вычисленный 446,6). Примерю. 16 17c;- 22RSjБутилметилендиокси- 1/ь-окси-21 -ацетокси-4-прегнен-З,20-дион. 16о, 1 К5 -Бутилметипендиокси-4-прегнен-11/}, 21-диол-3,20-дион. (658 мг) и уксусный ангидрид (5 мл) растворяют в 5 мл пиридина и оставляют на ночь при комнатной температуре. Полученную смесь затем выливают в ледяную воду и несколько раз экстрагируют метиленхлоридом. Смешанные экстракты промывают разбавленной 1%-ной соляной кислотой, карбонатом натрия (5% в воде), насьоценным раствором хлористого натрия, сушат и упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на колонке с внутренним диаметром 73-6,3 см, заполненной Сефадексом LH-20, с использованием хло роформа как элента. Фракцию 12151455 мл собирают и упаривают. Остаток растворяют в метиленхлориде и осаждают из петролейного эфира. Полу чают 507 мг (71%) 16,,17o -C22RSjбутилметилендиокси-1 1/}-окси-21-ацетокси-4-прегнен-3,20-диона. HPLC-анаЛИЗ показал 98,5%-ную чистоту и соот ношение 22Ри 225-эпимеров 51:49. Продукт имеет точку плавления 10825C;Wy +126,5 (,238, CHjClj); молекулярный.вес 488 (вычисленный 488,6). П р и м е р 11. 16oi, 17o -C22Sjи 16о, 17с1 -С22Я -Бутилметилендиокси11/ -окси-21 -ацетокси-4-прегнен-3,20дион. 16oi, 17Ы- 2 К53-Бутш1метилендиокси 11 -окси-21-ацетокси-4-прегнен-З,20дион (485 мг) хроматографируют анало гично примеру 3. Фракции 1275-1425 и 1486-1590 мл собирают и упаривают. Продукты осаждают из смеси метиленхлорида и петролейного эфира и идентифицируют с помощью Н-ЯМР и массспектрометрии соответственно, как 5-эпимер (140 мг) и R-эпимер (204 мг Чистота эпимеров по данным HPLC-анализа 97 ,.5% для З-зпимера (при содержании 1,3% R-эпимера) и 97,1% для (-зпимера (с 1,2% 5-эпимера). Эпимер 5 точку плавления 152-57°С; WI +104,4°(,226, СН2С12);молекулярный вес 488 (вычисленный 488,6) а эпимер R - точку плавления 75-77°С ,4(,228, CHjCI), молекулярный вес 488 (вычисленньй 488,6) Пример 12,. 16ot, 17о -Г225 Бутилметилендиокси-4-прегнен-11/з, 21-диол-3,20-дион. К раствору 16(, 17о/-С22 5 -бутилметилендиокси-11р-окси-21-ацетокси4-прегнен-3,20-диона (53 мг) в 10 мл метанола добавлялось 1,5 мл карбоната калия (10% в воде). После 10-минутного перемешивания при комнатной температуре в атмосфере азота смесь нейтрализуют уксусной кислотой, разбавляют 25 мл воды и экстрагируют метиленхлоридом. Объединенные экстракты сушат и упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на колонке с внутренним диаметром 83 2,5 см, заполненной Сефадексом 1,Н-20, с использованием хлороформа в качестве злюента. Собирают и упаривают фракцию 285-330 мл. Получают 35 мг (73%) 16oi, 17oi-(22S 1-бутшп4етилендиокси-4прегнеЯ-11,3, 21-диол-3,20-диона после осаждения из смеси метшгенхлорида и петролейного эфира. Продукт идентифицируют при помощи масс-спектрометрии и его чистота, как показьгоает анализ HPLC составляет 98,8% (он содержал 0,8% R-эпимера), точка плавления его 160-67°С;М +115,ОЧс 0,322; ); молекулярный вес 446 (вьти- ленный 446,6).Пример 13. 16oi, 17с - 22К Бутилметилендиокси-4-прегнен-11, 21-диол-3,20-дион. К раствору 16(3, 17о6-Г22ЯЗ-бутилметилендиокси-11, окси-21-ацетокси4-прегнен-З, 20-диона (58 мг) в 10 мл метанола добавляют 1,5 мл карбоната калия (10% в воде). Реакционную смесь обрабатывают по примеру 10. Сырой продукт хроматографируют на колонке с внутренним диаметром 83-2,5 см, заполненной Сефадексом L,H-20, с использованием хлороформа в качестве элюента. Собирают и упаривают фракцию 305-360 мл. Получают 43 мг (81%) 16oi, 17о - 22Р -бутилметилендиокси-4прегнен-11р, 21-диол-3,20-диона, после осаждения из смеси хлористого метилена и петролейного эфира. Продукт идентифицировался с помощью массспектрометрии, и его чистота, как показал HPLC-анализ, была 95,4% (содержал 2,5% 5-зпимера). Точка плавления 152-62С ; a;j2j +149,,312, )} молекулярный вес 446 (вычисленный 446,6). Фармакологические испытания. Все стероиды, представленные в изобретении, представляют собой физиологически активные соединения. Их глюкокортикоидные свойства сравнивались с таковыми будезонида (ойцая формула 1я), 16о, 17сС- 22Я51-пропш1метилендиоксипрегна-1,4-диен-11/3, 21-диол-3,20-дион, так как данное соединение является одним из глюкокортикоидов, которое достигло больше всего в направлении требуемого сочетания местного и системного действия; противовоспалительное действие оценивалось по способности предотвращать отек уха у крыс согласно нижеописанной процедуре. Ушной отек вызьшали у самцов крыс весом около 90 г с помощью 20 мкл на 1 край уха 5%-ного этилфенилпропиолата (Альдрих КО), растворенного в ацетоне , Через 2 ч ушной отек измеряли специальным микрометром (Одитест, H.C.Kroplinl Глюкокортикоиды применяли за 16 ч до. индуцирования отека 20 мкл на край уха в виде растворов в ацетоне (0,08-50 мкг) стероида (мл на 0,0064 мкг на крысу). Для каж дой дозы испытывали 6 ушей. Относительную активность испытуемых соединений по предотвргццению отека уха вычисляли по данным анализа линейной регрессии по сравнению с контрольным соединением (будезонидом). Активность соединений по обеспече нию системного глюкокортикоидного действия исследовали путем подкожных иъекций, так как при уровнях доз, использованных в упомянутом опыте по местному применению, не достигалось никакого системного эффекта. 0,5 мл Стероидного препарата инъецировалось крысам того же веса и пола, как уже описано. По меньшей мере.5 доз каждого из исследуег ых соединений вводили в интервале до 20-1280 мк на крысу по 4 животных на каждую дозу. В первые два дня после инъекции регистрировалось увеличение веса тела животных, а по истечении последую щих двух дней - вес вилочковой железы, так как эти временны интервалы оптимальны для определения соответ012ствующего системного действия. Относительную активность соединений вычисляли по данным анализа линейной регрессии по сравнению с контрольным веществом (будезонидом). Результаты испытаний глюкокортикоидов изобретения в соответстаии с проведенной процедурой показаны в таблице. Известно, что введение двойной связи в позицию 1,2 кортизола повышает его глюкокортикондную активность. В таблице показано, что новые соединения (производные 4-прегнена), имеют приблизительно такую же высокую противовоспалительную активность, как и будезонид (производные 1,4-прегнадиена). Из таблицы видно также, что новые соединения в 3-20 раз менее активны, чем будезонид в проявлении нежелательных системных глюкокортикоидных эффектов. Новые соединения обладают также в 5-10 раз более высокой противовоспалительной активностью, чем ранее известные 16в, 17о - 22К -метилметш1ендиокси-4-прегнен-11/3, 2 1-диол3,20-дион, при одинаковой системной клюкокортикоидной активности. Таким образом, новые соединения изобретения удовлетворяют требованию сочетания высокой местной противовоспалительной активности и сравнительно низким системы действием.

3115660014

Фармакологическое действие испытанных соединений

-о /н