Способ определения состояния макроорганизма Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Йзобретение относится к биологии и медицине и может быть использованЬ для изучения различных состояний сложной биологической системы при моделирований широкого спектра патологических процессов аутоиммунных, опухолевых, инфекционных и т.п., а также для диагностических исследований и индивидуального, подбора лекарственных средств путем иммунологического тестирования периферической крови при лечении аутоиммуннь.х, опухолевых инфекционных заболеваний, бесплодия или

в процессе hpe- и посттрансплантационнр- гр мониторинга.: V :

Известны способы тестирования периферической крови для рпрёдёлёнйя иммунного состояния организма, например путем определения ебдёржШШ инсулина (исследования динамики его изменения; определения резистёнтности организма при инкубировании лейкоцитов с тест-микробной взвесью в присутствии аутологичной сыворотки; определения иммунореактивно- сти при одновременном проведении двух

V

00

со

ITO

реакций розеткообразования: лимфоцитов с эритроцитами барана в присутствии иммуностимулирующего препарата (левамизола, спленина и т.д.) и лимфоцитов в присутствии аутоплазмы.

Общим недостатком известных способов я вляетсй проведение одного-двух имму- Лологически х тестов, по которым нельзя объективно оценить сложную иммунную систему организма.

Более информативно исследование проводят при осуществлении двухэтапного способа диагностического определения им- мунного Н8стояния человека, являющийся спосоВом-пр ототипом. Первый этап, называемый ориентирующим, включает следующиеоперации:определениеотносительного и абсолютного количества лимфоцитов; тесты Е-и ЕАС-розеткообразо- вания для определения относительного и абсолютного количества Т- и В-лимфоЦйтов определение концентрации сывороточных иммуноглобулинов основных классов (М. б, А); „ определение фагоцитарной активности лейкоцитов.

Этот этап может быть в условиях клинической лабораторЙ1Гвлтече- ние буток./ - - „„ „. ,

Второй этап, называемый аналитическим, включает следующие опе рации: определение субпопуляций регуляторных Т-лимфоцитов (Т-хелперов, Т-супрессоров); прямой тест определения спонтанной миграции лейкоцитов и тест торможения миграции лейкоцитов с использованием в качестве стимулятора фитогемагглютинина (FGA); оценка функциональных свойств им- мунорегуляторных клеток в тестах конкана- валин-А-индуцированной супрессорной активности; постановка важных тестов гиперчувствительности замедленного и немедленного типа на туберкулин, грибковые антигены, DNHB, искомые аллергены; оценка пролиферативной активности Т- и В-лим- фоцитов в реакции бласттрансформации на митогены, антигены, аллогенные клетки; определение В-лимфоцитов. несущих поверхностные иммуноглобулины разных классов; оценка синтеза иммуноглобулинов в культуре В-лимфоцитов1 непрямой тест торможения миграции лейкоцитов; оценка активности киллерных клеток (К- и ЕК-лим- фоцитов); тесты на оценку наиболее значимых медиаторов иммунной системы, в том числе интерлейкин - продуцирующей активности клеток; определение различных компонентов комплемента; оценка различных компонентов фагоцитоза и рецепторного аппарата фагоцитов.

Если первый этап обязательный, то второй этап является рекомендательным, так как отличается значительной трудоемкостью (необходимо специальное оборудование, дефицитные реактивы, большой опыт и высокая квалификация исполнителя) и продолжительностью (общее время 5-7 сут)

Однако несмотря на определение широкого диапазона иммунологических парамет0 ров, ЪпосоВ-прототип является недостаточно точным. Он объективен исключительно в отношении системы in vitro, так как не учитывает участия гуморальных и клеточных факторов микроокружения в им5 мунном ответе, не исследует индивидуального действия иммуннотропных препаратов, применяемых при терапии конкретного патологического процесса Кроме того, из-за значительной продолжительно0 сти процесса - 7 сут, этот способ не обеспечивает оперативной диагностической информации.

Целью изобретения является повышение точности диагностики и эффективности

5 коррекции состояния макроорганизма при одновременном ускорении способа

Для достижения цели в способе определения состояния макроорганизма путем им- мунологическогоисследования

0 периферической крови, проводят НСТ- спонтанный и индуцированный тест сегмен- тоядерных нейтрофилов и моноцитов в лейкоконцентрате, определение Е-розетко- образования изолированных лимфоцитов,

5 прединкубированных с теофиллином, определение естественной клеточной киллерной активности изолированных лимфоцитов, реакцию бласттрансформации изолированных лимфоцитов на Т- и В-клеточные

0 митогены, дополнительно из периферической крови выделяют аутологичные эритроциты и плазму, которую разделяют на белокассоциированную и безбелковую фракции, а затем проводят иммунологиче5 ские исследования в следующем порядке: после проведения НСТ-теста и определения Е-розеткообразования изолированных лимфоцитов, прединкубированных с теофиллином и ЕАС-розеткообразования изолированных лимфоцитов последовательно в присутствии лейкоконцентрата, бе- локассоциированной и безбелковой фракции аутоплазмы и в присутствии лейкоконцентрата совместно с каждым из имму- нотропных препаратов гормонального,

0 противовоспалительного и иммуномодули- рующего действия определяют розеткооб- разованйе изолированных лимфоцитов с аутоэритроцитами и последовательно в присутствии лейкоконцентрата, белокассоциированной и безбелковой фракции аутоплаз- мы и совместно с каждым из указанных им- мунотропных препаратов; определяют естественную клеточную киллерную активность после изолированных лимфоцитов по- следовательно в присутствии лейкоконцентрата и белокассоциированной и безбелковой фракции аутоплазмы;проводят реакцию бласттрансформации на Т- и В-кле- точные митогены после изолированных лим- фоцитов последовательно в присутствии белокассоциированной и безбелковой фракций аутоплазмы и совместно с каждым из указанных иммунотропных препаратов.

Существенные отличия нового способа в сравнении с известными аналогами заключаются в многоплановом исследовании периферической крови, что обеспечивается изучением поведения в комплексе всех компонентов крови: изолированные лимфоци- ты, лейкоконцентрат, эутоэритроциты и аутоплазма, дополнительно разделенная на белокассоциированную и безбелковую фракции, а также их различных сочетаний в присутствии лекарственных препаратов, Благодаря такому разностороннему иммунологическому исследованию определяют состояние всего макроорганизма. Так. например, предложенная схема позволяет изучить параметры изолированных лимфо- цитов с учетом клеточных факторов микроокружения (в лейкоконцентрате), а также с учетом влияния естественных пространственных связей между лимфоцитами, которые могут резко изменять показатели поведения изолированных лимфоцитов, исследуемых в способе-прототипе. Включение в обьект исследований безбелковой и белокассоциированной фракции аутоплазмы позволяет определить не только суммар- ное воздействие гуморальных факторов, как в известных способах, но и разграничить, в какой фракции плазмы находятся агрессивные (патологические) и компенсаторные (защитные) субстанции. Такое вычленение является принципиально важным, так как позволяет, используя современные инструментальные методики экстракорпоральной детоксикации (плазмафарез, гемодиализ, гемосорбция и их сочетания), удалять из макроорганизма вещества, поддерживающие патологический процесс, не ослаблять макросистему одновременным удалением субстанций, нарабатываемых ею для инактивации чужеродной информации.

Кроме того, предложенный способ позволяет выявить способности лимфоцитов распознавать аутологичные тканевые антигены, например, экспрессируемые на мембранах собственных эритроцитов. Этот

феномен отражает выраженность реакций против перекрестно реагирующих антигенов (например, антигенов эндо- и экзогенной микрофлоры и антигенов собственных тканей, представленных на эритроцитах, на которых в разной степени присутствуют мембраноассоциированные структуры, характерные и для других органов: почек, миокарда, печени, поджелудочной железы, соединительной, нервной ткани и т.д). Он, как эпизодический, сопровождает большинство инфекционных заболеваний, а в определенном количестве случаев превращается в основное патогенетическое звено болезни, что имеет место при аутоиммунных поражениях соединительной и нервной ткани, почек, сердца, суставов и т.д. как следствие стрептококковой инфекции.

Изучение действия иммунотропных препаратов в совокупности предложенных тестов никогда ранее не проводилось. Оно способствует уточнению клинического диагноза, так как демонстрирует поведение лим- фоцитов в присутствии различных факторов:

-противовоспалительных - блокирующих синтез продуктов арахидоновой кислоты: простагландинов, лейкотриенов, простациклинов. эйкозаноидов и т.д.;

-гормональных - аналогов преднизоло- на, кортизона и т.д.;

-иммуномодулирующих - медиаторов различных звеньев иммунного ответа: интер- феронов, интерлейкинов, тимопоэтинов, миелопептидов и др.

По результатам исследования конкретизируют природу воспалительных реакций или признаки наличия воспалительных медиаторов, формулируют индивидуальные прогнозы эффективности предлагаемого лечения, т.е. уточняют, какие лекарственные средства и в какой дозировке способны нормализовать исходно патологмческие состоя- ния лимфоцитов.

Предложенный способ позволяет провести иммунологические исследования периферической крови всего за 4-6 ч (по короткой) и за 3 сут (по полной схеме) в отличие от известного способа, где анализы проводят в течение 7 сут. Новый способ позволяет провести компьютеризацию обработки результатов исследования в автоматическом режиме.

Способ иллюстрируется описанием общей схемы и примерами выполнения, представленными в форме карты иммунологических исследований периферической крови с рекомендациями клиницисту специально для конкретного больного.

Способ осуществляется по следующей схеме.

V пациента забирают 15 мл венозной периферической крови, которую стабилизируют 2,7%-ным раствором ЭДТА (трилон В) в соотношении 1:10. Из 10 мл крови в стандартном градиенте плотности фиколл - ве- рографина (1.076-1.078) выделяют пул мононуклеарных клеток, из которых инкубацией на пластиковых поверхностях удаляют прилипающие (моноциты, макрофаги) клетки. Из оставшейся крови (5 мл) отбирают лейкоконцентрат, максимально освобожденный от эритроцитов и плазмы (около 2 мл). Клетки лейкоконцентрата освобождают от плазмы трехкратным центрифугированием и отмыванием ф изиологйче сШй раствором. Половину объема полученной плазмы пропускают через фильтры с диаметром пор 0,17ммк и, таким образом, отделяют безбелковую фракцию от белокассоциирован- ной.

В условиях In vitro традиционными методами определяют Е- и ЕАС-розеткообра- зование, розеткообразование с аутологичными эритроцитами, Е-розеткооб- разование лимфоцитов, после прединкуба- ции с теофиллином: показатели НСТ-спонтанного и индуцированного теста сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов: активность естественных киллерных клеток: способность лимфоцитов трансформироваться в бласты при внесении различных митогенов. Вре указанные реакции проводят в соответствии с Методиками согласно рекомендациям, описанным в способе-прототипе (1).

I- НСТ-спонтанный и индуцированный тест сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов, учитываемый в лейкоконцентрате (естественном клеточном, гуморальном и пространственном микроокружениях).

II- Е-розеткообразование (экспрессия характерных Т-клеточных рецепторов):

а)изолированных лимфоцитов (определяют процентное и абсолютное содержание Е-розеткообразующих клеток);

б)прединкубированных с теофиллином изолированных лимфоцитов (Т-хелперные и Т-супрессорные клетки, определяют их абсолютные количества и соотношение)

в)в присутствии лейкоконцентрата (определяют отклонение от а):

г)в присутствии безбелковой фракции аутоплазмы (в качестве эффекторных клеток используют изолированные лимфоциты и лейкоконцентрат) определяют отклонение от а и в;

д)в присутствии белокассоциирован- ной фракции аутоплазмы в качестве эффе тивных клеток используют изолированные лимфоциты и лейкоконцентрат, определяют отклонение от а в;

III - ЕАС-розеткообразование (экспрес- сия характерных В-клеточных маркеров),

а)изолированных лимфоцитов (определяют процентное и абсолютное содержание ЕАС-розеткообразующих клеток);

б)в присутствии лейкоконцентрата (оп- 0 ределяют отклонение от а);

в)в присутствии безбелковой фракции аутоплазмы (определяют отклонение от а и б, в качестве эффекторных клеток используют изолированные лимфоциты и лейкокон5 центрат);

г)в присутствии белокассоциированной фракции аутоплазмы (определяют отклонение от а и б, эффекторные клетки - изолированные лимфоциты и лейкоконцентрат).

0 IV- Розеткообразование с аутологичными эритроцитами:

а)изолированных лимфоцитов (определяют процентное и абсолютное количество),

б)в присутствии безбелковой фракции 5 аутоплазмы (эффекторные клетки - изолированные лимфоциты определяют отклонение от а);

в)в присутствии белокассоциированной фракции аутоплазмы (эффекторные клетки 0 изолированные лимфоциты, определяют отклонение от а).

V-Определение Е-розеткообразования лимфоцитов лейкоконцентрата в присутствии иммунотропных препаратов (предин5 кубация с препаратом длится в течение 30 мин) при 36,7°С);

-субтерапевтическая(0,1 терапевтической дозы) и терапевтическая доза индоме- тацина; „

0 - субтерапевтическая (0.1 терапевтической дозы) и терапевтическая доза дексазо- на;

-субтерапевтическая и терапевтическая доза альфа-2-рекомбинантного интер5 ферона.

VI - Определение розеткообразования лимфоцитов, прединкубированных согласно условий этапа V, с аутологичными эритроцитами.

0 VII - Определение естественной кил- лерной активности (против аутологичных опухолевых клеток, при отсутствии последних в качестве мишеневых используют клетки перевиваемой линии человеческого

5 миелолейкоза - К-562):

а)изолированных лимфоцитов;

б)в присутствии белокассоциированной фракции аутоплазмы (эффекторные клетки - изолированные лимфоциты), определяют отклонение от а);

При необходимости в схему тестирования могут быть внесены и другие препараты (различные гормоны: инсулин, глкжагон, кортизол; иммуномодуляторы: лимфо- и мо- нокины; антибиотики, цитостатики, наркотические вещества и т.д.) в зависимости от конкретных задач;

в) в присутствии безбелковой фракции аутоплазмы (эффекторные клетки - изолированные лимфоциты), определяют отклонение от а.

VIH - Реакция бласттрансформации лимфоцитов на Т-клеточный митоген, например, фитогемагглютинин (FGA, Serva, 30 мкг/мл) и преимущественно В-клеточный митоген, например, липополиса - харид (LPS, Serva, 100 мкг/мл):

а)изолированных лимфоцитов (учет индекса стимуляции);

б)в присутствии безбелковой фракции аутоплазмы (эффекторные клетки - изолированные лимфоциты, определяют отклонение от а);

в)в присутствии белокассоциировангной фракции аутоплазмы (эффекторные клетки - изолированные лимфоциты, определяют отклонение от а);

г)внесение в тест-системы, кроме фито- гемагглютинина различных иммунотропных препаратов:

ФИО А,

ф-ла венозной крови: мон 7 п„0 Общее количество лейкоцитов 7,8 Процентное содержание лимфоцитов Абсолютное количество лимфоцитов

-субтерапевтических и терапевтических доз индометацина;

-субтерапевтических и терапевтиче- ских доз дексазона;

-А -2-рекомбинантного интерферона в диапазоне клинически используемых доз, пересчитанных на in vitro культивирование: 12. 60, 300, 1SOO, 3000, 7500. 15000 МЕ/мл.

Короткая схема исследования требует минимального времени для воспроизведения. В ней отсутствуют методы, требующие стерильности и условий для работы с радиоактивными метками. Она включает J-VI этапы. Но ее информативность явно недостаточна для исследования опухолевой болезни, при которой необходимо получение объективных данных и о характере взаимных влияний бластомы и

J - -макроорганизмэ.

Полная схема более трудоемка и включает все описанные этапы. Она позволяет более детально исследовать состояние макроорганизма, в том числе опухолевую болезнь, и более избирательно подойти к выбору вида и дозы корригирующих препаратов.

4 Короткая схема

Пример 1.1.1. Результаты иммунологического исследов ания периферической крови:- - s

зраст 60,

v

1 э 4 лф

HOpi .Д

7

2ч Д..,90

M- J,0 «ib /л

18-J8 /.

0,8-3,6x10s /л

Использование: медицина. Сущность изобретения: проводят иммунологическое исследование периферической крови - изолированных лимфоцитов и клеток лейкоконцентрата на модели Е- и ЁАС-розёт,2 кообразрвания, Н СТ-тёста, микрометода определения ЕК-активности лимфоцитов и их спрсрбнрсти трансформироваться в бла- стй; при этим ё Yест-с й стемы ftoWonййтель- и преледо ваУе Й нЬ аводят белркассоцийрбв а4н;№уй И безбёлковую фракции аутологйчйрй HatWWHoS плазмы и аутойогйчныё эрит рЩй тыГ Дли уточнения клиническргр диагноза (природы воспалительных реакций) и формулирования инди- вид аль нйгб WpSyHbsia эф фёктйвносУи предполагаемого лечения(определения, какие лекарственные средства ги дозировке способны нЪрмализова ть исходно патологические состояния лимфоцитов) в тест-системы ввбдят пЭЬтйвЬвоспалитель- ные, гормЬйальныё И иУлМунбмбдулирукэ- щие (медиаторы различных звеньев иммунного ответа) средства. Этот способ позволяет провести компьютеризацию обработки результатов исследования в автоматическом режиме. Снабжен программой для формулирования текстового и графиче- ско го варианта заключения. 1 з.п. ф-лы. СО С

спонт, спонт

5 3

индуц„ индуцо

Т-лимфоциты (Е-РОК) изолированные на фиколле:

процентное содержание абсолютное количество модуляция аутоплазмой:

цельной без белка

Т-лимфоциты (Е-РОК) в лейкоконцентрате:

процентное содержание модуляция аутоплазмой:

цельной Ьез белка

модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозах: индометацином 27 23 дексазоном 20 20„

Д-2-рекомбинантным интерфероном 17 20

спонт. спонт

на фиколле:

иидуц. индуц,

ч.

9

40-60

0,6-2л1х10 /л

х

модуляции модуляции

нет нет

модуляции нет модуляции нет

В-лимфоциты (ЕАС-РОК), изолированные на фиколле:

процентное содержание абсолютное количество модуляция аутоплазмой:v, ,

цельной без белка

онцентрате: А

1

О с аутологичными эритроцитами:

модуляции нет модуляции нет

процентное содержаниеО

абсолютное количество О

модуляция аутоплазмой: г ,.„

, , -. -«гл -

цельной О

без белка О

модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе:

индометацином О О дексазоном Д-2-рекомбмнантным интерфероном Т-хелперы: Т-супрессоры 2,0 (теофиллиновый тест)

Пациент А. Дата исследования 24.01.90.

У пациента, обслуживаемого системой, вторичный иммунодефицит, описываемый следующими показателями:

Способность изолированных Т-лимфо- цитов образовывать Е-розетки Понижена.

Факторы клеточного микроок ружёйия усугубляют ситуацию - уменьшают сниженную активность изолированных Т-лимфоци- тов.

Белокассоциированная фракция натив- ной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает пониженную активность изолированных Т-лимфоцитов

Безбелковая фракция аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную активность изолированных Т- лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция натив- ной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную способность Т-лимфоцитов лёйкоконцентрата участвовать в Е-розеткообразовании

0,11

20-26%

0,3-0,5xlOfl /л

1

k

модуляции нет модуляции нет

эритроцитами:

модуляции нет модуляции нет

нет нет

1

модуляции нет модуляции нет

О О

О О 2,2:3,3

Безбелкрвая фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокруже ния усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную способность Т-лимфоцитов лёйкоконцентрата участвовать в Е- розеткообразовании.,

Способность изолированных В-лимфо- цитов образовывать ЕАС-розетки понижена.„, ,

Факторы клеточногЬ микроокружения практически не изменяют пониженную активность изолированных В-лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция натив- н(эй аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает пониженную активность изолированных В-лимфоцитов.

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы практически не изменяет пониженную активность изолированных В-лимфоцитов.

Белокассоциированная фракций натиё- ной аутологичной плазмы практически не изменяет пониженную способность В-лимфоцитов лейкоконцентрате участвовать в ЁАС-розеткообразовании

Безбелковая фракция нативной аутоло- гичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную способность В-лим- фоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовании.

Таким образом, нарушения в иммуно- компетентной сфере обусловлены иммунр депрессивным воздействием на функции лимфоцитов клеточного и гуморального микроокружения.

In vitro нарушенные показатели лимфо- иДноЙ функции нормализуются: удалением факторов белокаесоциированной и безбелковой фракции аутологичной плазмы, декса- зоном, индометацином.

ФИб А. :

ф-ла венозной крови: мои 7 п 0 с Общее количество лейкоцитов 7-8 Процентное содержание лимфоцитов 2А Абсолютное Количество лимфоцитов 1 87

л

индуц, 9 индуц. 5

олированные на фиколле:

21

; , °«ЗЭ . , ::/

цельной без белка

- Т-лимфоциты (Е-РОК) в лейкоконцентрате:

процентное содержание модуляция аутоплаэмой:

цельной без белка

модуляция препаратами в субтерапе дозах: индометацином 27 23 Л-2-реко мбйнантным интерфероном 17 В-лимфоциты (ЕАС-РОК), изолирован

процентное содержание абсолютное количество

модуляция аутоплазмой:

1 , цельной

без белка В-лимфоциты (ЕАС-РОК) в лейкоконц

процентное содержание . модуляция аутоплазмой:

цельной без белка

.Розеткообразование лимфоцитов с аутоло гйчными йритроцитами:

пгзоцентйое содержание абсолютное количество

0

5

Показано: детоксикационное лечение, направленное на снижение концентрации безбелковых и белокассоциированных им- мунодепрессивных факторов в нативной аутоплазме: параллельный курс противовоспалительной терапии субтерапевтическими дозами инд омета цина и дексазона.

Спустя две недели после окончания лечения необходимо контрольное исследование. Описание cfddfветствует исследованным параметрам состояния им- мунокомпетентной сферы.

П р и м е р 2.Полная схема

возраст 60,0

э i лф Д 24.01.90 норма М - 9,0х105/л 18 - 38$, . 0,8 - 3,

спонт. с индуц. спонт. С индуц.

- бо% ; :Г

0,6 - ,

модуляции нет модуляции нет

U.

модуляции нет модуляций йет

/л

модуляции нет модуляции нет

модуляции нет модуляции нет

нет нет

модуляция аутоплазмои:

цельной0модуляции нет -

без белка 0модуляции нет

модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином О О дексазоном 00 Х-2-рекомбиНлйтным интерфероном 00 Т-хелперы: Т-супрессоры2,02,2:3,3

(теофиллинрвый тест)

Естественная киллерная активность лимфоцитов:

2k 19,29+0,8

модуляция аутоплазмои:

цельной 29модуляции нет

без белкаk2модуляции нет

модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином 10 13 дексазоном 13 16 24эекомбинантным интерфероном(Ед/мл). -|2 -|0, 60 12 300 10 } 1500 И, 300 8, 7500 0 15000 Oj

Реакция бласттраисформации лимфоцитов:

Урйвень спонтанного выше FGA-индуцированного бластогенеза FGA-индуц, бластогенез0,653-8

Кон-А- -1,233-8

LPS .„-,- , 0,383-6

модуляция аутоплазмои;

цельной спонт.0,69модуляции нет

FGA1,0модуляции нет

КоН-А0,08модуляции нет

LPS1,0Модуляции нет

без белка спонт„0,97модуляции нет

FGA1,53модуляции нет

х КоН-А0,02модуляции нет

v LPS2,1 модуляции нет

модуляция препаратами в субтерагтевтическ -й и терапевтической дозе: индометацином 1,Ц дексазоном 1,9 2,1 . .... - Д-2-рекомбинантным интерфероном (ЕД/мл):- - ,- , о. . уровня спонтанного бластогенеза 12 0,86, оО 1,0, 300 1,0, ,1, 3000 1,3, 7500 1,0, 15000 1,3 - УСА-ййгДуц р о аЙно го бластогенеза 12 0,9, 60 0,6, 300 0,6, 1500 0,6, 3000 0,, 7500 0,7, 15000 0,5 -- - - -. ;

сниженную акГРГв нЬсть изолированных Т2,2. Заключениелимфоцитов,. г.

Пациент А. Дата исследования 24.01.90.Бело а с ббциирЪ&аннай фракция нативУ пациента, обслужийаёйЬго системой/ ной аутрлогйчной плазмы ё присутствии вторичный иммунодефицит, описываемый 5 клеточного микроокружейия усугубляет си- следующими показателями:туацию - уменьшает сниженную способ- Способность изолированных Т-лимфо- ность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата цитов образовывать Е-розёт и понижена.участвовать в Е-розеткообразовании.

Факторы клеточного ми1 эоокружения Б езбелковая фракция нативной аутолоусугубляют ситуацию - уменьшают снижен- 1 б гичной плазмы е присутствий клеточного ную активность изолированных Т-лимфоци- микроокружения усугубляет ситуацию - тов.- -уменьшает сниженную способность Т-лимБелокассоцшрованная фракция натив- фоцитов лейкоконцентрата участвовать в Е- ной аутологичной плазмы ycyry6flflet ситуа- розеткообразовании. цию - уменьшает пониженнуюд(стивность15 Способность изолированных В-лимфо- изолированных Т-лимфоцитов. цйтов образовывать ЕАС-розетки понижеБезбелковая фракция утологичной на.

плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает

Факторы клеточного микроокружения практически не изменяют пониженную активность изолированных В-лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция натив- ной аутологичной плазмы усугубляет ситуа- 5 цию - уменьшает пониженную активность изолированных В-лимфоцитов,

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы практически не изменяет пониженную активность изолированных 10 идной функции нормализуются: удалением В-лимфоцитов.факторов белокассоциированной и безбелБелокассоциированная фракция нативгичной плазмы резко увеличивает уровень ЕК-активности лимфоцитов.

Таким образом, нарушения в иммуно- компетентной сфере обусловлены иммуно- депрессивным воздействием на функции лимфоцитов факторов клеточного и гуморального микроокружения.

In vitro нарушенные показатели лимфоковой фракции аутологичной плазмы, декса- зоном ндометацином.

ной аутологичной плазмы практически не изменяет пониженную способность В-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в 15 ЕАС-розеткообразовании.

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную способность В-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в 20 ЕАС-розеткообразовании.

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы резко угнетает Кон-А-индуцированный бластогенез лимфоцитов, снижая его до уровня FGA- и LPS-ин- 25 дуцированного бластогенеза.

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы увеличивает уровень ЕК-активности лимфоцитов.

Безбелковая фракция нативной аутоло- 30

ФИО

Б.

ф-ла венозной крови мои 17 п 0 с общее количество лейкоцитов (,8 процентное содержание лимфоцитов 19 абсолютное количество лимфоцитов 0,1)1

:

НСТ-тест:

индуц. индуц.

олированные на фиколле:

18 0,16

модуляция аутоплазмой:

цельнойf О

без белка О

Т-лимфоцитов (Е-РОК) в лейкоконцентрате:

процентное содержание36 модуляция аутоплазмой:

цельнойО

без белка2

модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической

индометацином 25 23 дексазоном 22 А-2 рекомбинантным интерфероном 19 Зч В-лимфоциты 1ЕАС-РОК), изолированные на фиколле

18

процентное содержание абсолютное количество

модуляции аутоплазмой:

цельной без Ьелка

В-лимфоциты (ЕАС-РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержание15

идной функции нормализуются: удалением факторов белокассоциированной и безбелгичной плазмы резко увеличивает уровень ЕК-активности лимфоцитов.

Таким образом, нарушения в иммуно- компетентной сфере обусловлены иммуно- депрессивным воздействием на функции лимфоцитов факторов клеточного и гуморального микроокружения.

In vitro нарушенные показатели лимфо)1

ковой фракции аутологичной плазмы, декса- зоном ндометацином.

Показано: детоксикационное лечение, направленное на снижение концентрации безбелковых и белокассоциированных им- мунодепрессивных факторов в нативной аутоплазме; параллельный курс противовоспалительной терапии субтерапевтическими дозами индометацинэ и дексазона.

Спустя две недели после окончания лечения необходимо контрольное исследование.

Описание соответствует исследованным параметрам состояния иммунокомпе- тентной сферы.

Пример 3.Короткая схема

возраст ч2

: 6k э 0 яф 19 Д 22.11.89 норма ,0 - 9,0х10 /л 18 - 38У„

0,8 - 3,6x10 /л

индуц. индуц.

спрнт. индуц. спонт. индуц.

АО - 60%

0,6 - 2,1 10ч/л

модуляции нет модуляции нет

модуляции нет модуляции нет

пев

18

20 - 26%

О,З О,

модуляции нет модуляции нет

модуляция аутоплэзмои:

цельной без белка

Розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроцитами: процентное содержание1 (нет

абсолютное количество0,13 нет

модуляция эктоплазмой:

цельной без белка

2 4модуляции

26 i модуляции

модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической индометацином 2 0 дексаюном О О Д-2-рекомбинантным интер ероном 13 6 Т-хелперы: Т-супрессоры 0,332,2:3,3

(теофиллиновый тест)

Пациент Б. Дата исследования 22.11.89.

У пациента, обслуживаемого системой, вторичный иммунодефицит, описываемый следующими показателями:

Способность изолированных Т-лимфо- цитов образовывать Е-розетки понижена.

Факторы клеточного микроокружения частично компенсируют ситуацию - увеличивают сниженную активность изолированных Т-лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция натив- ной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает пониженную активность изолированных Т-лимфоцитов.

Безбелковая фракция аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную активность изолированных Т- лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция натив- ной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Е-розеткообразовании.

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Е- розеткообразовании.

Способность изолированных В-лимфо- цитов образовывать ЕАС-розетки повышена.

Факторы клеточного микроокружения инвертируют активность изолированных В- лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных В-лимфоцитов.

17 25

модуляции нет модуляции нет

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных В-лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы практически не изменяет пониженную способность В-лим- фоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовании.

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы нормализует способность В- лимфоцитовучаствоватьв

ЕАС-розеткообразовании.

Отсутствие повышения показателей НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов (индуцированный НСТ-тест) может свидетельствовать об истощении ферментов дыхательного взрыва фагоцитирующих клеток.

Исходно увеличенное розеткообразова- ние лимфоцитов с аутологичными эритроцитами, увеличенные показатели спонтанного НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов свидетельствуют в пользу гипотезы о. наличии во внутренней среде организма раздражителя иммунокомпетентной сферы (антигены экзо- или эндогенной микрофлоры, распознавание нормальных и дифференцировочных антигенов аутологич- ных тканей), причем in vitro способность лимфоцитов образовывать розетки с аутологичными эритроцитами увеличивается под воздействием обеих фракций нативной аутоплазмы.

Таким образом, иммунное воспаление реализуется, вероятнее всего, как продуктами арахидоновой кислоты (простагландина- ми, лейкотриенами и т.д.), так и воспалительными гормонами (типа пред- низолона).

In vitro нарушенные показатели лимфо- идной функции нормализуются: удалением аутоагрессивных и иммуноблокирующих

факторов белокассоциированной и безбел- ковои фракции нативной аутологичнои плазмы дексазоном и интерфероном

3 3 Рекомендации клиницистам Показано детоксикационное лечение нзправленное на снижение концентрации безбелковых и белокассоциированных ауто- агрессивных и иммуноблокирующих факторов аутоплазмы параллельный курс лечения субтерапевтическими дозами деФИО Б.

ф-ла венозной крови: мон 17 п 0 общее количество лейкоцитов ,8 процентное содержание лимфоцитов } Абсолютное количество лимфоцитов 0,91

НСТ-тест:

нейтрофилов спонт 12 индуц8

моноцитов спонт Уиндуц5

Т-лимфоциты (Е-РОК), изолированные на

процентное содержание18

абсолютное количество0,16 модуляция аутоплазмой:

цельнойО

без белкаО

Т-лимфоциты (Е-РОК) в лейкоконцентрат процентное содержание 36 модуляция аутоплазмой:

цельной без Ьелка

модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозах: индометацином 25 23 дексазоном 22 18

А-2-рекомбинантным интерфероном 19 3 В-лимфоциты (ЕАС-РОК), изолированные на фиколле:

гнх мрнтное содержание абсолютное количество

модуляция аутоплазмой:

цельной Ьез белка

В-лимфоциты (ЕАС-РОК) в лейкоконцентрате:

процентное содержание модуляция аутоплазмой: цельной без белка

15

17модуляции нет

25модуляции нет

Розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроцитами:

процентное содержание 1kнет

абсолютное количество 0,13нет модуляция аутоплазмой:

цельной 2kмодуляции нет

без белка 26модуляции нет

ксазона и терапевтическими дозами интерферона

Спустя две недели после окончания лечения необходимо контрольное исследование

Описание соответствует исследованным параметрам состояния иммунокомпе- тентной сферы

Пример 4Полная схема

4 1 Результаты иммунологического исследования периферической крови : возраст k2

0

э О М - У 18 - 36 0,8 - 3,6x1 С9/л

лф 19 ,0x10 /л

спонт г индуцt спонт индуц.

9

kG - 6СУ„

0,6 - 2,

модуляции нет модуляции нет

О 2

модуляции нет модуляции нет

28 0,26

20 - 26%

0,3 - 0,5 Ю9/л

О 2

модуляции нет модуляции нет

модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической

дозе: индометацином 2 0 дексазоном О О

А-2-рекомбинантным интерфероном 18 6

Т-хелперы: Т-супрессоры 0,332,2 ; 3,3

(теофиллиновый тест) Естественная киМёрнаЯ активность

лимфоцитов:2119,29+0,8

ij

модуляция аутоплазмой: «

цельнойЮмодуляции нет

без белка15модуляции нет

модуляций препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином 21 15 дексазоном 1910

Х-2-рекомбинантным интерфероном (ЕД/мл): 12 20, 60 21, 300 17 , 1500 1ч , ЗООб 10, 7500 18, 15000 24j

и лимфоцитов:

FGA-индуцированного бластогенеза

1,73 0,89 0,55

3 - 8 3 - 8 3 - 6

цельной спонто FGA Кон-А LPS

без белка спонтс JGA Кон-А

2,1

модуляции нет МОДУЛЯЦИИ нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет

LPS

модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином 1, I,1, дексазоном 1,9 2,1 А-2-рекомбинантным интерфероном (ЕД/мл): уровня спонтанного бластогенеза 12 0,86, 60 300 1,0, 1500 1,1, 3000 1,3, 7500 1, FGA-индуцйрованного бластогенеза 12 0,0 , 300 0,6 , 1500 0,6, 3000 0,6, 7500

ьо,

,0, 15000 60 0,6, 0,7, 15000

1,3 0,5

Пациент Б. Дата исследования 22.11.89.

У пациента, обслуживаемого системой, вторичный иммунодефицит, описываемый следующими показателями:

Способность изолированных Т-лимфо- цитов образовывать Е-розетки понижена.

Факторы клеточного ми фоок0ужения частично компенсируют ситуацию - увеличивают сниженную активность изолированных Т-лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция натив- ной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает пониженную активность изолированных Т-лимфоцитов

бластогенез

3 - 8 3 - 8 3 - 6

модуляции нет МОДУЛЯЦИИ нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет модуляции нет

ской и терапевтической доз ном 1,9 2,1 ): 0,86, 60 7500 1, 0,0 , 7500

ерапевтической 9 2,1 60 1,

ьо,

,0, 15000 60 0,6, 0,7, 15000

Безбелковая фракций аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную активность изолированных Т- лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция натив- ной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения усугубляет си-- туацию - уменьшает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Е-розеткообрйзовании.

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Е- розеткообразований J

25178232126

Способность изолированных В-лимфо- терфероном ЕК-активности и способности цитов образовывать ЕАС-розетки повышена. лимфоцитов трансформироваться в бласты

Факторы клеточного микроокружения под влиянием лектина, нормализующее воз- инвертируют активность изолированных В- действие на эти показатели противовоспа- лимфоцитов.5 лительных препаратов свидетельствуют в

Белокассоциированная фракция натив- пользу гипотезы о наличии во внутренней ной аутологичной плазмы инвертирует ак среде организма раздражителя иммуноком- тивность изолированных В-лимфоцитов.петентной сферы (антигены экзо- или эндоБезбелковая фракция нативной аутоло- генной микрофлоры, распознавание гичной плазмы инвертирует активность изо- ю нормальных и дифференцировочных анти- лированных В-лимфоцитов.генов аутологичных тканей), причем In vitro

Белокассоциированная фракция натив- способность лимфоцитов образовывать ро- ной аутологичной плазмы практически не зетки с аутологичными эритроцитами увели- изменяет пониженную способность В-лим- чивается под воздействием обеих фракций фоцитов лейкоконцентрата участвовать в 15 нативной аутоплазмы. ЕАС-розеткообразовании.Таким образом, иммунное воспаление

Безбелковая фракция нативной аутоло- реализуется, вероятнее всего, как продукта- гичной плазмы нормализует способность В- ми арахидоновой кислоты (простагландина- лимфоцитовучаствоватьв ми, лейкокотриенами и т.д.), так и

ЕАС-розеткообразовании.20 воспалительными гормонами (типа предБелокассоциированная фракция натив- низолона).

ной аутологичной плазмы угнетает способ-In vitro нарушенные показатели лимфоность лимфоцитов участвовать в идной функции нормализуются удалением лектининдуцированной реакции бласттран- аутоагрессивных и иммуноблокирующих сформации и увеличивает способность лим- OR белокассоциированной и безбел- фоцитов отвечат ь на IPS.ковой фракции нативной аутологичной

Безбелковая фракция нативной аутоло- плазмы, дексазоном и интерфероном, гичной плазмы увеличивает способность4.3. Рекомендации клиницистам,

лимфоцитов отвечать на митогены бластг-Показано: детоксикационное лечение,

рансформацией.30 направленное на снижение концентраций

Белокассоциированная фракция натив- безбелковых и белокассоциированных ауто- ной аутологичной плазмы снижает уровень агрессивных и иммуноблокирующих факто- ЕК-активностилимфоцитов.ров аутоплазмы; параллельный курс

Отсутствие повышения показателей лечения субтерапевтическими дозами де- НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов и ксазона и терап ёвти-ческимт дозами интермоноцитов (индуцированный НСТ-тест) мо- ферона.

жет свидетельствовать об истощении фер-Спустя две недели после окончания лементов дыхательного взрыва чения необходимо контрольное исследова- фа го цитирующих клеток.ние,ч

Исходно увеличенное розеткообразова- 4Q Описание соответствует исследован- ние лимфоцитов с аутологичными эритроци- ным параметрам состояния иммунокомпе- тами, увеличенные показатели спонтанного тентной сферы,

НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов иПример 5.Короткая схема,

моноцитов. увеличенньГй уровень спонтан-

ногобластогенеза лимфоцитов, отрицатель- лк 5.1. Результаты иммунологического иссле- ная регуляций X - 2-рекомбинантным ин- дования пеРиФеРической крови: ФИОВ,.возраст85

ф-ла венозной крови: мои ТЈ лф12 Д Т7.0.90

обцее количество лейкоцитов8,8норма ч,0 - 9,0«1С8/л

процентное содержание лимфоцитов 1218 - 3&&

Абсолютное количество лимфоцитов 1,050,8 - 3,

НСТ-тест:

нейтрофилов спонт 26 индуц. 6спонт. индуц.

моноцитов спонт.Оиндуц. 2спонт. индуц.

Т-лимфоциты (Е-РОК), изолированные на фиколле: процентное содержание76чО - 60

абсолютное количество0,80,6 - 2,

модуляция аутоплазмой:

цельной без белка

Т-лимфоциты (Е-РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержание6

модуляция аутоплазмой:

цельной23

без белка 35

модуляция препаратами в субтерапевтимеской и терапевтической дозах: индометацином 21 26 дексазон&м 15 18 Д-2-рекомбинантным интерфероном 3 В-лимфоциты (ЕАС-РОК), изолированные на фйколле:

процентное содержание 5

абсолютное количестёо О,AS

, f, модуляция аутоплазмой:

цельной12

Ьез белка37

В-лимфоциты (ЕАС-РОК) в лейкоконцентрате:

процентное содержание19

модуляция аутоплазмой:

цельной2модуляции нет

без белка 31 модуляции нет Розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроцитами: процентное содержание26 нет

абсолютное количество0,27 нет

модуляция аутоплазмой: цельной без белка

модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином 10 0 дексазоном 10 6 Я-2-рекомбинантным интерфероном 8 2Ц

Т-хелперы: Т-супрессоры(-) 2 2:3 3

(теофиллиновый тест)

ч

Пациент В. Дата исследования 17.04.90.

У пациента, обслуживаемого системой, вторичный иммунодефицит, описываемый следующими показателями:

Способность изолированных Т-лимфо- цитов образовывать Е-розетки повышена.

Факторы клеточного микроокружения инвертируют активность изолированных Т- лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция натив- ной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных Т-лимфоцитов.

Безбелковая фракция аутологичной плазмы частично компенсирует ситуацию - уменьшает высокую активность изолированных Т-лимфоцитов

Белокассоциированная фракция натив- ной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения частично ком16

70

модуляции нет модуляции нет

модуляции нет модуляции нет

20 - 267- 0,,5 10ч/л

модуляции нет модуляции нет

46 45

модуляции нет модуляции нет

пенсирует ситуацию - увеличивает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкокон- центратаучаствоватьв

Е-розеткообразоТвании.

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения частично компенсирует ситуацию - увеличивает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Е-розеткообразовании

Способность изолированных В-лимфо- цитов образовывать ЕАС-розетки повышена,/

Факторы клеточного микроокружения инвертируют активность изолированных В- лимфоцитов,

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных В-лимфоцитов

Безбелковая фракция нэтивной аутоло- гичной плазмы частично компенсирует ситуацию - уменьшает активность изолированных В-лимфоцитов

Белокассоциированная фракция натив- ной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает пониженную способность В-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовании

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы инвертируют способность В- лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовании

Отсутствие повышения показателей НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов (индуцированный НСТ-тест) может свидетельствовать об истощении ферментов ды- хательного взрыва фагоцитирующих клеток.

Сниженные показатели НСТ-теста моноцитов могут свидетельствовать о ригидности ферментов дыхательного взрыва и функциональной несостоятельности фагоцитирующих клеток

Исходно увеличенное розеткообразова- ние лимфоцитов с аутологичными эритроцитами, увеличенные показатели спонтанного НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов И извращенное за счет преобладания Т-хел- перных клеток соотношение иммунорегуля- торных клеток свидетельствуют в пользу гипотезы о наличии во внутренней среде организма раздражителя иммунокомпетен- тной сферы (антигены экзо- или эндогенной микрофлоры, распознавание нормальных и дифференцировочных антигенов аутологич- ФИО В

п

ф-ла венозной крови мои 15 общее количество лейкоцитов процентное содержание лимфоцитов

Абсолютное количество лимфоцитов 1,05

НСТ-тест:

нейтрофилов спонт 26

моноцитов спонт О

Т-лимфоциты (Е-РОК).изолированные на фиколле: процентное содержание76

абсолютное количество0,8

модуляция аутоплазной:

цельной без белка

Т-лимфоциты (Е-РОК) в лейкоконцентрате:

процентное содержание модуляция аутоплазмой

цельной без белка

ных тканей), причем in vitro способность лимфоцитов образовывать розетки с аутологичными эритроцитами увеличивается под воздействием обеих фракций нативной 5 аутоплазмы.

Таким образом, иммунное воспаление реализуется, вероятнее всего, как продуктами арахидоновой кислоты (простагландина- ми, лейкотриенами и т.д.). так и C воспалительными гормонами (типа пред- низолона), а также за счет преобладания Т-лимфоцитов хелперов.

In vitro нарушенные показатели лимфо- идной функции нормализуются удалением 5 аутоагрессивных факторов белокассоции- рованной и безбелковой фракции нативной аутологичной плазмы, индометацином, де- ксазоном и интерфероном.

Спустя две недели после окончания лечения необходимо контрольное исследование.

0 Описание соответствует исследованным параметрам состояния иммунокомпе- тентной сферы

Пример 6Полная схема

б 1. Результаты иммунологического исследования периферической крови:

возраст 85

с 71

8,8

12

э 2 лф норма

1,05

12 Д 17.04 90 ч,0 - 9,0 103/л 18 - 3S7.

0,8 - 3,

6 2

фиколле: 76

0,8

спонт индуц спонт 4 индуц

40 - 60%

0,6 - 2,1 10s/л

16 70

модуляции нет модуляции нет

23 35

модуляции нет модуляции нет

модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозах: индометацинон 21 26 дексозоном 1518

А-2-рекомбинантным интерфероном

В-лимфоциты (ЕАС-РОК), изолированные на фиколле:

процентное содержание абсолютное количество

модуляция аутоплаэмой:

цельной без белка

В-лимфоциты (ЕАС-РОК) в лейкоконцентрате:

процентное содерхание модуляция аутоплазмой:

цельной без белка

Розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроцитами

процентное содержание 26нет

абсолютное количество 0,27нет модуляция аутоплазмой:

цельной 46модуляции

без белка 45модуляции

модуляция препаратами в субтерапевтической итерапевтической

дозе: индометацином 10 0 дексазоном10 6 А-2-рекомбинантным интер ероном 8 24

Т-хелперы: Т-супрессоры (-)2,2:3,3 (теофиллиновый тест)

Естественная киллерная активность

лимфоцитов 3219,29+0,8

модуляция аутоплазмой

цельной 2модуляции

без белка 23модуляции

модуляция препаратами в субтерапевтической итерапевтической

дозе: индометацином 10 5 дексазоном13 10

Д-2-рекомбинантным интерфероном (ЕД/мл): 12Ik, 60 18

300 20, 1500 14, 3000 18, 7500 24,15000 20;

Реакция бласттрансформации лимфоцитов:

Уровень спонтанного ниже FGA-индуцированного бластогенеза

FGA-индуц.бластогенеэ 3,143 8

Кон-А 1,35 3-8

LPS 3,373 - 6

модуляция аутоплазмой:

модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической

дозе: индометацином 2,7 дексазоном 1,25 1,1

Д-2-рекомбинантным интерфероном (ЕД/мл):

уровня спонтанного бластогенеза 16 0,76, 60 0,69,

300 0,7, 1500 0,5 , 3000 0,6, 7500 0,6, 15000 0,5

FGA-индуцированного оластогенеза 12 1,12, 60 1,1

300 2,1 , 1500 2,6, 3000 1,2 ,7500 0,7-,15000 0,4

Пациент В. Дата исследования 17.04.90.

У пациента, обслуживаемого системой, вторичный иммунодефицит, описываемый следующими показателями:

Способность изолированных Т-лимфо- цитов образовывать Е-розетки повышена.

Факторы клеточного микроокружения инвертируют активность изолированных Т- лимфоцитов.

45 0,1)8

20 - 267, , 0,3 - 0,

12 37

модуляции нет модуляции нет

13

2 31

модуляции нет модуляции нет

Белокассоциированная фракция натив- ной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных Т-лимфоцитов.

Безбелковая фракция аутологичной плазмы частично компенсирует ситуацию - уменьшает высокую активность изолированных Т-лимфоцитов.

Белокассоциированная фракция натив- ной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения частично компенсирует ситуацию - увеличивает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкокон- центрата участвовать в Е-розеткообразова- нии

Безбелковая фракция нативной аутоло- гичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения частично компенсирует ситуацию - увеличивает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Е-розеткообразовании

Способность изолированных В-лимфо- цитов образовывать ЕАС-розетки повышена

Факторы клеточного микроокружения инвертируют активность изолированных В- лимфоцитов

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных В-лимфоцитов.

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы частично компенсирует ситу- ацию - уменьшает активность изолированных В-лимфоцитов

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает пониженную способность В-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовании

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует способность В- лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовании

Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы увеличивает уровень спонтанного и Кон-А-индуцированного бластогенеза, уменьшает уровень FGA- и LPS-индуцированного бластогенеза

Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы увеличивает уровень спонтанного бластогенеза, снижает уровень FGA- и LPS-индуцированного бластогенеза

Отсутствие повышения показателей НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов (индуцированный НСТ-тест) может свидетельствовать об истощении ферментов дыхательного взрыва фагоцитирующих клеток.

Сниженные показатели НСТ-теста моноцитов могут свидетельствовать о ригидности ферментов дыхательного взрыва и функциональной несостоятельности фагоцитирующих клеток

Исходно увеличенное розеткообразова- ние лимфоцитов с аутологичными эритроцитами, увеличенные показатели спонтанного НСТ-тестз сегментоядерных нейтрофилов и извращенное за счет преобладания Т-хел- перных клеток соотношение иммунорегуля- торных клеток, исходно повышенный уровень ЕК-активности лимфоцитов свидетельствуют в пользу гипотезы о наличии во

внутренней среде организма раздражителя иммунокомпетентной сферы (антигены эк- зо- или эндогенной микрофлоры, распознавание нормальных и дифференцировочных антигенов аутологичных тканей), причем in vitro способность лимфоцитов образовывать розетки с аутологичными эритроцитами увеличивается под воздействием обеих фракций нативной аутоплазмы

Таким образом иммунное воспаление реализуется вероятнее всего как продуктами арахидоновой кислоты (простагландина- ми, лейкотриенами и т д ), так и воспалительными гормонами (типа пред- низолона) а также за счет преобладания Т-лимфоцитов хелперов

In vitro нарушенные показатели лимфо- идной функции нормализуются удалением аутоагрессивных факторов белокассоции- рованной и безбелковой фракции нативной аутологичной плазмы индометацином де- ксазоном и интерфероном

6 3 Рекомендации клиницистам Показано детоксикационное лечение направленное на снижение концентрации безбелковых и белокассоциированных аутоагрессивных факторов аутоплазмы параллельный курс противовоспалительного „лечения субтерапевтическими дозами индо- метацина, дексазона и интерферона

Спустя две недели после окончания лечения необходимо контрольное исследование.

Описание соответствует исследованным параметрам состояния иммунокомпетентной сферы

Сопоставление нового способа с известными аналогами показывает следующие преимущества нового способа

1) использование предложенной комплексной схемы диагностических исследований на основе общепринятых иммунологических приемов (определение Е-и ЕАС-розеткообразования, НСТ-тест, реакция бласттрансформации и т п ) путем дополнительного введения всех факторов микроокружения иммунокомпетентных клеток (клетки лейкоконцентрата, аутоэритро- циты, аутоплазма, разделенная на белокассоциированную и безбелковую фракцию) позволяет получить многоаспектную информацию о состоянии макроорганизма, уточнить клинический диагноз и сформулировать индивидуальный прогноз эффективности предполагаемого лечения по учету реакции розеткообразования изо- лированных лимфоцитов в присутствии противовоспалительных, гормональных и иммуномодулирующих препаратов, в отличие от аналогов (1-4), где исследуют только

изолированные лимфоциты, аутосыворотку, эритроциты барана, достигая узконаправленной цели;

2)суммарное время проведения всего комплекса иммунологических исследований сокращено до 4-6 ч - 3 сут (в отличие от прототипа - 7 суток);

3)максимальный забор крови умёньшей до 10-15 мл, в отличие от прототипа -27 мл;

4)постановка множества параллельных проб позволяет манипулировать широким диапазоном доз исследуемых лекарственных препаратов;

5)обработку результатов и составление заключений - рекомендаций осуществляют на компьютере в автоматизированном режиме.

Способ испытан на культуре клеток 61 здорового человека. 53 больных сепсисом, 21 больного аутоиммунными заболеваниями (ревматизм, бронхиальная астма, системная красная волчанка).

Диагностированные состояния макроорганизма и рекомендации по их коррекций, полученные после компьютерной обработки подтверждаются клийичёскими наблюдениями и контрольными лабораторными исследованиями,

Формула изобретен

;,ГгЭ с -1 )

V

,„. s ;,).,,

,. t ,.-,,-.митоген, отличающийся тем, что, с целью повышения точности диагностики и эффективности коррекции состояния макроорганизма, лечения при одновременном ускорении способа, дополнительно из периферической крови выделяют аутологичные эритроциты и плазму, которую разделяют на белЬ ассбцийрованную и безбелковую фракции, а затем проводят иммунологические исследования в следующем порядке: после проведения НСТ-теста и определения Е- и ЕДС-розёткбобразбвания изолированных лимфоцитов и прединкубированных с теофиллином определяют Ё- и ЕАС-розетко- образование изолированных лимфоцитов последовательно в присутствии лейкоконцентрата, белокассоциированной и безбелковой фракции аутоплазмы и в присутствии различных препаратов гормонального, противовоспалительного или иммуномодулиру- ющего действия, определяют розеткообразование изолированных лимфоцитов и отдельно б присутствии лейкоконцентрата, белокассоциированной и безбелково й фракции аутоплазмы и в присутствии аутоэритроцитов совместно с различными иммунотропными препаратами, определяют естественную клеточную кил- лерную активность сначала изолированных лимфоцй тов, а потом of дельно в присутст1 вии белокассоциированной и безбелковой фракции аутоплазмьк проводят реакцию бласттрансформации на Т- и В-клеточный митоген после изолированных лимфоцитов, отдельно от изолированных лимфоцитов в присутствии белокассоциированной и безбелковой фракции аутоплазмы и иммунот- ро пных препаратов.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве иммунотропного гормонального препарата используют дексазон, в качестве противовоспалительного индоме- тацин, а в качестве йммуно модулятора - интерферон.-