Г2Т) 4294597/28-14
(22) 07,08.87
(46) 15,09,89, Бкш. № 34
(71)Киевский медицинский институт им, акад. А,А,Богомольца
(72)В.Г.Бордонос, Н.И.Якуба и Л,И,Скрипка
(53)615.375 (088.8)
(56)Злотницкая Р.П. и Фрадкин В.А, Реакция нейтрофилов периферической крови на печеночный антиген .у больных с хроническими заболеваниями печени.
Советская медицина, 1982, № 3, с.34- 37.
(54)СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОРГАНОСПЕЦИ- №ЧЕСКИХ АУТОИМУННЫХ ПРОЦЕССОВ
(57)Изобретение относится к медицине и может найти применение в терапии и педиатрии при диагностике хроничес киж заболеваний, сопровождающихся
аутоим.мунными процессами органоспе- цифического типа. Цель изобретения - повышение точности способа. Исследуемый тканевой антиген наслаивают на частицы латекса и производят постановку реакции фагоцитоза и НСТ-теста с частицами латекса без антигена и с латексом, нагруженным определенным органоспецифическим антигеном, определяют процент фагоцитоза, фагоцитарное число и НСТ-тест в опытной и контрольной проблемах и результаты сопоставляют. При снижении показателей поглощения в опытной пробе в 2 и более раз по сравнению с контрольной наряду 9 повьщ1ением НСТ-теста в опытной пробе в 1,5 раза по сравнению с контрольной диагностируют наличие аутоимунного процесса к данному ор- ганоспецифическому антигену. Точность способа возрастает с 62 до 96%,
г (Л
Изобретение относится к медицине и может найти применение в терапии и педиатрии при диагностике хронических заболеваний, сопровождающихся аутоиммунными процессами органоспецифического типа. Цель изобретения - повышение точности способа. Исследуемый тканевой антиген наслаивают на частицы латекса и производят постановку реакции фагоцитоза и НСТ-теста с частицами латекса без антигена и с латексом, нагруженным определенным органоспецифическим антигеном, определяют процент фагоцитоза, фагоцитарное число и НСТ-тест в опытной и контрольной пробах и результаты сопоставляют. При снижении показателей поглощения в опытной пробе в 2 и более раз по сравнению с контрольной наряду с повышением НСТ-теста в опытной пробе в 1,5 раза по сравнению с контрольной диагностируют наличие аутоиммунного процесса к данному органоспецифическому антигену. Точность способа возрастает с 62% до 96%.
Изобретение относится к медицине и может найти применение в терапии и педиатрии при диагностике хронических заболеваний, сопровождающихся аутоимунныни процессами органоспеци- фического типа,
Цель изобретения - повьппение точности способа определения аутоиммунных процессов.
Способ осуществляется- следующим образом,
1 этап, Наслоение тканевого антигена на латекс. Инертные частицы латекса размером 1,2 мк в концентрации 0 в соотношении 1:1 смешивают с
тканевым антигеном, приготовленным по обычной методике. Полученную смесь помещают в испарительное отделение холодильника на 18 ч, после чего центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин, надосадочную жидкость снимают, К осадку, содержащему латекс, нагруженный тканевым антигеном, добавляют физиологический раствор, в количестве, равном первоначальному количеству антигена (концентрация латекса с антигеном сохраняется в пределах 10).
И этап, Постановка реакции поглощения и НСТ-теста с латексом, нагруженным тканевым антигеном (опытная про Л X)
31508
ба) и с латексом без антигена контрольная проба).
Кровь из пальца больного в количестве О,А мл собирают в пробирку, содержащую 1 каплю гепарина, центрифугируют при 1500 об/мин в течение )0 №1н, снимают лейковзвесь и раство ряют ее в 0,2 мл среды Игла, Получен-- ЫУ-ю взвесь по 0,1 мл наносят
на покровные стекла, помещенные в ма- ; 8нькие пластмассовые чашки, добавляют Of мл 1%-ного раствора нитросинего . тетризолия, после чего в контрольную пробу вносят 0,05 мл латекса без ан- тигена, а в опытную пробу - 0,05 мл латекса нагруженного тканевым антигеном, Пробы в закрытых чашечках инкубируют в термостате 30 мин, после чего надосадочную жидкость на покров™ ных стеклах сливают, стекла высушивают и фиксируют в парах формалина в течение 15 мин. Докрашивают препараты ядерным красителем (например,
1%-ным раствором метилового зеленого в течение 7 мин) , Бробы оценивают под им™
мерссионным микроскопом, определяя про нейтрофилов, поглотивших частицы лтекса (процент фагоцитоза), и -процент нейтрофилоВу восстановивших нитроСИ - НИИ тгтразолий в нерастворимый форма- зан (НСТ-тест)о Оба показателя определяются на одном и том же препарате как в контрольной,, так и в опытной
гфобе. Латекс при этом служит как35
фагоцитируемым объектом -в реакции поглощения нейтрофилов так и лятором НСТ-теста,
Сопоставляют результаты полученных НСследований (процент фагоцитоза и 40 НСТ-тест) в контрольной и опытной пробах, достоверным диагностическим критерием считая снижение фагоцитоза в 2 и более раз ниже по сравнению с контрольной наряду с повышением НСГ 45 теста в опытной пробе в 1,5 раза выше по сравнению с контролем диагностируют наличие аутоиммунноголроцесса к данному органоспецифическому антигену,
Пример 1, Больной К,, 12 лет Впервые заболел вирусным гепатитом в возрасте 10 лет. Поступил в стационар на 7-ой день болезни в состоянии средней тяжести с умеренно выраженной ик- те ричностьзо склер, болями в животе печень выступала из-под реберной дуги на см. Билирубин крови 28,5 мг/о, еде АСТ-545 ед, Протром50
55
0
5
0
5
0 5
0
5
бин снижен до 63%, остаточный азот 0,27 г/л, общий белок 71 г/л, альбуми- нь 33 г/л, глобулины о(.,-3 г7л;& 8 г/л; /3-9 г/л, j -18 г/л. Общий анапиз крови: эрктр, 4 , 7 Л 1 мкл; гемоглобин 132,5 г/л; лейкоциты 5 э-9%; п-7%, с-26%; лимф, 58%, м-5%5, СОЭ 8 мм/ч. При многократном исследовании НВд - антиген обнаружен не был,
Эхограмма, сигналы от границ печени хорошо выражены, но имеют измененную форму в Дополнительные импульсы средней амплитуды правильной формы регистрируются в области ворот печени.
При обследовании по известному способу ППН без печеночного антигена 0,05; ППН с печеночным антигеном 0,14э
Обследование по предлагаемому спо- собуа В контрольной пробе {при фагоцитозе латекса без антигена) процент фагоцитоза 47%, НСТ-тест 28%, а в опытной пробе (при фагоцитозе латекса, нагруженного печеночным антигеном) процент фагоцитоза 23%, НСТ-тест 42%, Следоватально, фагоцитарная активность нейтрофилов при применении латек° са, нагруженного печеночным антигеном с шжалась в 2 раза, тогда как НСТ-тест стим /лированный латексом, нагруженным печеночным антигеном по зьш1ался Б 1 р5 раза. Следовательно, полученные данные входят Е даагности- ческие критерии формулы изобретения и свидетельствуют о наличии аутоимун- ного процесса в отношеш«-1 печеночного антигена. Поставлен диагноз; хронический гепатит.
Дальнейшее заболевания позволило подтвердить установленный ди агноз, Под давлением проведенного лв че1шя, включающего дезинтоксикацион- ную терапию5 преднизолон, витаминные препараты, стимуляторы иммунитета и ,цр,, на i-й день болезни состояние больного нормализовалось, однако полная нормализация лабораторных показателей наступила только на 68-й день. С диагностической при удовлетворительном самочувствии и удовлетво- ритель й.х биож ь ческих показ ателях- гфоизведена пункциопальная биопсия, в заключение которой выставлен окончательный диагноз; хронический гепатит укеренно выраженной активности без признаков цирротических изменений, В данном примере диагноз подтверждается соБОкупностьк клииическ -гх
н лабораторных данных, показано также совпадение исследования , проведенного по предлагаемому способу с нш болсе достоверным методом исследования гис тологическим, тогда как при обследовании по известному способу положительный результат не получен Это подтверждает большую точность заявляемого метода по ср авнению с nporoTHnof.jj
П р и м е р 2, Больной Д., 8 лет, поступил в стационар с жалобагда на : боли в нижних отделах ;;мвота, преимущественно, после еда и перед актом дефекации в Периодически отмечается неустойчивость стула примесь слизи и крови. При объективном иссдедова- гми - выражены cимптoмьs интоксикации, знач1-1тельная болезненность при паль- ладии в левой подвоздошной областиj сигмовидная кишка спастически уплотнена, болезненна при папьпации, В общем анализе крови: гемоглобин 80г/л лейкоцитов 8f9- 10 , 3-2, ,, с-62, м-95 СОЭ 25 Белковые фракции: общий белок 61 г/л, альбуминь 28 г/л, гло- булиновые фракции: oi,- 2%; , -11
( При копроскопии кала - слизь и кровь в умеренном количестве, бактериологическое исследование - дис- сбактериоэ за усиленного роста патогенных DiTaMj iOB кишечной палочки.
При обследовании по известному способу ШШ без антигена 0,081 ПИН с антигеном кишечника О,, iSs
Обследование по изобретению проведено в два этапе; 1-й - наслоение антигена кишечника на латекС| П-й - .постановка фагоцитарных реакций с л а тексом без антигена и с латексом, на- гружен1а1м антигеном кишечниха.
Получены следующие рез шьтаты: поглотительная способность нейтрофилов при неспецнфическом (без антигена кишечника) фагоцитозе 52%, НСТ-тест, стимулированный латексом не нагру- женным антигеном кишечника, 32%, При специфическом латексфагоците (с использованием латекса, нагруженного }щшечгшм aнтигeнo) процент фагоцитоза 26%, КСТ-тест 45% Следовательно, поглотительная способность при псстановке реакции спедиф1-{ческого ла- тексфагоцитоза уменьшилась в 2 раза,
то iSpef iH как НСТ-тест, стиг-гулирован-- антигеном) фагоцитоза у больных хро5-гый патаксок, нагруженным кишечным актигеноы повысился в 1,5 раза, что является сэгласт. о форму.ле изобрете -шя дocтoвepш s г ди-5гностическим критериническими заболеваниями, сопровождающимися аутоиммунными процессами, под тверждает высокую диагностическую цен ность предлагаемого способа.
ем, наличия аутоиммуного процесса и позволяет поставить диагноз неспецифического язвенного KonHia
После стиханий острых проявлений язвенного колита с диагностической це-лью ребенку проведено ректоромано- скопию, при которой выявлено отсек и гиперемию .. слизистой оболочки толстой кишки, утолщение ее складок, наличие геморрагии, отдельных эрозий.
5
5
0
S
Таким образом, в данном примере показаны клинико-лабораторные данные и данные диагностики по предлагаемому способу. Объективность диагноза .подтверждена методом ректороманоско- гши, тогда как при обследонашш по известному способу положительного диагностического результата не получено, что подтверждает большую точность предлагаемого способа,
Для проверки диагностической ценности способа проведено исследование у 20 здоровых лиц и 68 больных раз- личны ш хроническими заболеваниями, сопрОЕОжда 01ДИ1-мся аутоиммунными процессами.
Для повышения точности способа в формулу изобретения включены погра- значения велиш н, характери- зукщих снижеюзе погхйотительной и повышение НСТ-восстанавливающей способности при специфическом фагоцитозе частиц латекс, нагруженных соответствующим тканевым антигеном по сравнению с неспецифическим фагоцитозом (при применении и в качестве фагоцитируемого объекта частиц латекса без антигена), На высокую достоверность данных указывает отсутствие разницы показателей поглотительной и НСТ-вос- сталавливакнцей способности при постановке неспецифического и специфического (с различными тканевыми антигенами) фагоцитоза у здоровых лиц (р .0,05), В то же время высокая достоверность различия результатов ( ;0,00) при постановке неспецифического и специфического (с латексом, нагруженным соответствунщим тканевым
ническими заболеваниями, сопровождающимися аутоиммунными процессами, под- тверждает высокую диагностическую ценность предлагаемого способа.
Точность диагностики у обследуемых больных по изобретению составила 96%j тогда как положительные результаты при использовании известного способа : получены только у 62% случаев.
Вмсокая специфичность и связанная с ней большая точность диагностики заявляемого способа по сравнению с прототипом обусловлена тем, что регистрацию специфических аутоиммунных процессов проводят не на морфологическом, а на функциональном уровне.
Обладая широкой информативностью, высокой специфичностью и точностью диагностики при технической доступности, быстроте выполнения и незначительном объеме крови, требуемой для ис- 20 следования, способ может найти широкое применение в приктическом здравоохранении.
0
5
20
Формула изобретений Способ определения органоспецифических аутоиммунных процессов путем выявления сенсибилизации нейтрофиль- ных гранулсдитов к тканевым антигенам in vitro, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа выявление сенсибилизации ней- трофильных гранулоцитов осуществляют с помощью НСТ-теста и реакции фагоци-. тоза, при этом тканевый антиген адсорбируют на частицах латекса, далее вычисляют фагоцитарное число, процент фагоцитирирующих клеток, процент ней- трофилов, содержащих формазан, и при снижении показателей процента фаги- тирующих клеток и фагоцитарного числа в два и более раз и повьшенин формазан - содержащих нейтрофилов в 1,$ раза по сравнению с контрольной пробой, не содержащей антигена, определяют наличие аутоиммунного процесса.
