Штамм бактерий BacILLUS тнURINGIеNSIS VaR.кURSтакI для получения лепидоцида Советский патент 1992 года по МПК A01N63/00 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и биотехнологии и может быть использовано в производстве препарата лепидоцида для борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур и лесных насаждений.

Известен штамм Вас thurlngiensls var, kurstaki 2-2, Однако штамм 2-2 недостаточно продуктивен и патогенен для вредны х насекомых. Титр культуральный жидкости 3,0 млрд сп/мл, LK 50-0,16 %.

Известен штамм Вас thurlngiensis var. kurstaki Z-52, выбранный в качестве прототипа Недостатком данного штамма является низкая биологическая активность 4500 ЕА, титр культуральной жидкости 4,6 млрд сп/мл.

Цель изобретения - получение штамма продуцента лепидоцида с высоким уровнем

биологической активности и продуктивно сти

Поставленная цель достигается путем получения нового штамма Bacillus thuringiensisvar kurstaki ВКПМ В-5351 -продуцента лепидоцида

Предлагаемый штамм получен методом направленного мутагенеза на основе штамма Вас. thurlngiensls var. kurstaki Б-85 и характеризуется следующими признаками.

Культу рал ьно-морфологические признаки

Грамположительные подвижные палочки с закругленными концами. В стационарной фазе роста образуют овальные споры и в одном спорангии два белковых включения - кристаллы ромбовидной и квадратной формы Хорошо растет на МП средах при 28-30 градусах и рН 6.8-73 На МПА на

М

§

ся о

третьи сутки образует однородные колонии серовато-бежевого цвета со слабо изрезанным краем, структура мелкозернистая, пастообразной консистенции. В МПБ рост умеренный, образует сплошную пленку, опадающую через 48 ч. На картофельном агаре и агаре Хоттингера обильный рост, на 5 сут при 30°С колонии однородные, светлосерого цвета, пигмента не образуют.

Антигенные свойства,

Вегетативные клетки штамма В-5351 дают положительную реакцию с агглютинирующей сывороткой серотипа НЗ (ЗаЗб). Антагонистические свойства. Антагонистические свойства не прояви- лись по отношению к Вас. thuringiensls var. dendrolimus, Вас. thurinhiensls var. gallerlae, Вас. thurlngiensis var. Caucasus, Вас. insectus, Bas. subtiilis.

Физиолого-биохимические признаки. Усваивает с образованием кислоты глюкозу, мальтозу, крахмал картофельный и кукурузный; не усваивает лактозу, арабинозу, маннозу, сахарозу. На среде Кларка образу- ет ацетилметилметилкарбинол, не образует лецитиназу на агаризованной среде. Обладает протеазной и уреазной активностью.

Отношение к источникам азота: восста- навливает нитраты, усваивает аммонийные формы азота.

Хорошо растет при 28-30°С и рН 6,8- 7,4. Отношение к кислороду: аэроб. Хранение.

Хранить штамм рекомендуется в виде лиофильновысушенной культуры в стеклян- ных запаянных ампулах.

Чувствительность к фагам. Штамм Б-5351 устойчив к фагам М, И- 77, Э-5.

Продуктивность,

При культивировании на производственной среде следующего состава, мас.%: дрожжи 2,8; мука кукурузная 2,0; мука соевая 0,8; аммоний фосфорнокислый одноза- мещеиный 0,1; KCI 0,1, штамм В-5351 характеризуется синхронным спорообразованием и образует в 1 мл культуральной жидкости 4,9-5,1 млрд сп/мл (см.таблицу). Биологическая активность.

Предлагаемый штамм характеризуется высоким уровнем биологической активности. При регламентных условиях культивирования биологическая активность сухого концентрата проверялась на гусеницах непарного шелкопряда 2 возраста. Учет гибели гусениц проводился на 6 сут.

Биологическая активность сухого концентрата составляет 22330-22300 ЕА (см. таблицу),

Пример. Подготовка посевного материала, Исходную культуру штамма Baslltus thuringiensls var. kurstaki В-5351 выращивают при температуре 28-30°С в течение 5-6 сут в пробирках на скошенной агаризованной среде следующего состава, мас.%: мясной бульон до 100; пептон 0,1; хлористый натрий 0,05; агар-агар 0,2; рН среды 7,0-7,2.

Выросшую культуру петлей переносят с косяка в колбу емкостью 2 л, содержащую 300 мл среды следующего состава, мас.%: дрожжи кормовые 0,30; мука кукурузная 0,15; рН среды 7,0-7,2.

Засеянную колбу инкубируют на качалке при 220-300 об/мин в течение 24 ч при температуре 29-30°С до полного высыпания спор и кристаллов. Затем передают в ферментер.

Ферментацию осуществляют на среде следующего состава, мас.%: БВК 2,8; мука кукурузная 2; аммоний фосфорнокислый од- нозамещенный 0,2; хлористый калий 0,1; хлористый кальций 0,1; при следующих условиях: температура 28-30°С, аэрация в первые 3 ч роста 0,1 л/л/мин, в последующие часы роста 0,2 л/л/мин, непрерывное перемешивание, давление в ферментере 0,4- 0,5 ати. Время культивирования 30-34 ч.

После окончания ферментации осуществляют концентрирование культуральной жидкости и сушку.

Биологическая активность заявляемого штамма В-5351 выше, чем у прототипа, в 4-5 раз.

Формула изобретения Штамм бактерий Bacillus thuringtensis

var, kurstaki ВКПМ В-5351 для получения

лепидоцида.

Использование: микробиологическая промышленность и биотехнология, производство препарата лепидоцида для борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур и лесных насаждений. Сущность изоЬре- тения штамм бактерий Bacillus thuringiensis var Kurstaki получен методом направленного мутагенеза на основе штамма Baathunngiensis vackurstaki Б-85. Депонирован в коллекции ВКПМ под номером В-5351 При культивировании на среде, содержащей мае %: дрожжи 2,8; мука кукурузная 2,0 мука соевая 0,8; аммоний фосфорнокислый 0,1; калий хлористый 0,1, в течение 30-34 ч получают культуральную жидкость с титром спор 4,9-5,3 млрд сп/мл Культуральную жидкость затем концентрируют и сушат. Получают препарат с биологической активностью 22316 ЕА 1 табл