Изобретение относится к органической химии.
(Диметиламино)гексил окси}-2-фе- нилацетофенон формулы I
О
СН
6н,
з
н-(снг)б- К с-сн2-@
и его фармацевтически приемлемые соли с кислотами можно использовать для подавления или предупреждения грибковых инфекций, в частности локальных инфекций или инфекций всего организма, которые вызываются патогенными грибками, а также для приготовления средств, обладающих антигрибковым; действием. Соединение I обладает не только ярко выраженным антигрибковым действием, но и показывает си- нергетические эффекты в комбинации с другими известными веществами, обладающими антигрибковым действием, которые тормозят биосинтез стеролов, как кетокона- зол и тербинафин.
Целью изобретения является разработка способа получения нового соединения
формулы I, обладающего повышенным антигрибковым действием.
Соединение I и его фармацевтически приемлемые соли с кислотами получают взаимодействием 4-окси-2-фенилацетофе- нона с №,М-диметил-6-амино-1-гексанолом в присутствии трифенилфосфина и сложного диэтилового эфира азодикарбоновой кислоты, а продукт реакции выделяют в чистом виде или в виде соли.
В случае проводимой согласно изобретению реакции речь идет об известном методе, а именно о так называемом связывании Мицунобу. Реакция проводится преимущественно в инертном органическом растворителе и в температурном диапазоне от приблизительно 0°С до температуры кипения реакционной смеси. Подходящим растворителем являются, например, хлорированные низшие углеводороды, как метиленхлорид и хлороформ, и простые эфиры - с открытой цепью и циклические -, как диэтиловый эфир, метил-трет, бутиловый эфир и тетрагидрофуран, а также их смеси.
(Л
VI
ю
ю
Приготовление фармацевтически приемлемых солей с кислотами соединения I можно осуществлять известным и привычным каждому специалисту методом. При этом имеются в виду соли с. фармацевтически приемлемыми неорганическими и органическими кислотами. Предпочтительными солями с кислотами я вляются гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, нитраты, цитраты, ацетаты, сукцинаты, фумараты, метансульфонаты и п-толуолсульфонаты.
П р и м е р 1. Смесь из 2,5 г Ы,Ы-Диме- тил-6-амино-1-гексанола, $3,4 г 4-окси-2-фе- нилацетофенона, 4,5 г трифенилфосфина и 140 мл тетрагидрофурана при 20° медленно смешивают с раствором 2,7 мл диэтилового эфира азодикарбоновой кислоты в 15 мл тетрагидрофурана. После окончания смешивания (прикалывания) смесь еще в течение 1 ч перемешивают при комнатной температуре. Затем реакционную смесь упаривают на роторном испарителе, а остаток хроматографируют на оксиде алюминия. Получают 4-{(6-диметиламино)гексил -ок- си}-2-фенилацетофенон в виде бесцветного твердого вещества с температурой плавления 69-71° (выход 25%).
П р и м е р 2 Соединение 4-{(6-Димети- ламино)гексил окси}-2-фенилацетофенона может следующим образом использоваться для приготовления таблеток в качестве биологически активного вещества:
Составные частимг/таблетка
Биологически ; активное вещество200
Молочный сахар.
порошок100
Повидон К 3015
Na-карбоксиме- тил-крахмал .10
Тальк3
Стеарат магния2
Вес таблетки330
Биологически активное вещество и молочный сахар (пульверизованный) интенсивно перемешивают. Полученную смесь затем смачивают раствором Повидона К 30 и месят, после чего полученную массу гранулируют, высушивают и просеивают. Гра- нулят смешивают с остальными составными частями и прессуют в таблетки требуемого размера.
Соединение I и его фармацевтически приемлемые соли с кислотами обладают весьма ценными антигрибковыми свойствами. Они являются действенными против большого числа патогенных грибков, которые обуславливают локальные инфекции и инфекции всего организма, как Candida albicans и Histoplasma capsulatum 2,3-Эпоксисквален-ланостерол-циклэза, энзим, участвующий в биосинтезе стеролов эвкарио- тических клеток, является существенным энзимом для грибков. Так например,
S.cerevisiaR stamm, в котором этот энзим отсутствует, является нежизнеспособным. Тормозящее (подавляющее) действие соединения I на названный энзим из С. albicans было принято как мера для антигрибкового
действия. Торможение может быть измере- но, например, посредством описанного метода.
Определение ICso-значения для подавления 2,3-Эпоксискваленланостерол-циклазы Candida albicans.
Клетки культуры Candida albicans в конце логарифмической фазы роста были собраны и промывались 100 мМ фосфатным буфером (,9), пищеварительным буфером и 50 мМ фосфатным буфером (,4), который содержал 1 М маннитола и 5 мМ ДТТ.
1 г этих клеток взвешиваются в 5 мл пищеварительного буфера, смешиваются с
1 мгЦимолазы ЮОТи 12,5мкл /J-меркапто- этанола и инкубируются в течение 30 минут при 30°С. Образующиеся протопласты изолируются посредством центрифугирования (10 мин при 2500 г) и, в заключение, посредством добавления 2 мл 100 мМ фосфатного буфера (рН б,9)обрабатываются до растрескивания. Посредством нового центрифугирования (10 мин при 10000 г) получают свободный от клеток экстракт (CFE). Он будет разбавляться 10 мг протеина/мл, и рН будет устанавливаться 6,9.
Активность 2,3-Эпоксисквален-лано- стерол-циклазы в CFE измеряется посредством превращения С-Сквален-эпоксида в
присутствии н-децилпентаоксиэтиленя как детергента. Титрование с подходящим количеством тестового вещества позволяет определить ICso-значение (концентрация тестового вещества, ксяхэрая снижает актичность энзима наполовину).
Опыт проводится следующим образом. Посредством обработки УФ-излучени- ем подготавливают 250 мкм раствор 14С- Сквален-эпоксида в 100 мМ фосфатном
буфере (рН 6.9) при добавлении 1% н-де- цилпентаоксиэтилена.100 мкл этого раствора смешиваются с 20 мкл раствора тестового вещества в диметилсульфоксиде (или же 20 мкл чистого диметилсульфоксида, в качестве контроля). После добавления 880 мкл CFE хорошо перемешанный раствор в течение 1 ч, при 30°С, при встряхивании, инкубируется. В заключение, реакция останавливается посредством добавления
500 мкл 15%-го гидроксида калия в 90%-м этаноле.
Смесь дважды экстрагируется 1 мл и- гексана, гексан упаривается и липидный остаток вносится в 200 мкл дизтилового эфира. После тонкослойной хроматографии на силикагеле с метиленхлоридом в качестве растворителя пластины исследуются на радиоактивном тонкослойном сканирующем устройстве,
В приведенных условиях обнаружили исключительно ланостерол в качестве радиоактивного продукта. Его количество сравнивается с количеством радиоактивно- голаностерола на контроле. Таким образом, определили для соединения I 1Cso - значение, составляющее 0,065 мкг/мл.
: Уже упомянутое синергетическое действие соединения . и его фармацевтически приемлемых кислых солей в комбинации с другими веществами, тормозящими (подавливающими) биосинтез стеролов, такими как кетоконззол и тербинафин, может быть показано, например, посредством метода агар-разбавления. Для этого используют ка- зитонагар и привитку (10 клеток/мл) культуры Candida albicans, возраст которой составляет 48 ч. Тестовые вещества (TS, соединения I) используются в концентрациях 80-1,25 мкг/мл, а вещества, подавляющие биосинтез стеролов (SBH)- в концентрациях 20-0,001 мкг/мл, причем шаг разбавления составляет каждый раз 1:2. Культуры каждый раз инкубируются в течение 2 дней при 37°С. Затем устанавливают минимальные подавляющие концентрации (MlС) различных биологически активных веществ при их индивидуальном и комбинированном применении, и из установленных MIC-зна- чений рассчитывают подавляющие концентрации (FIC) по следующей формуле:
FIC
MiC (TS индивидуальное) MIC(TS в комбинации )
MIC (S ВН индивидуальное ) MIC(S BH в комбинации)
Синергетический эффект существует, когда ,5. Содержащиеся в приведенной ниже таблице данные для соединения ), в комбинации , кетоконазолом или тер- бинзфином, представляющими вещества, подавляющие стерол-биосинтез, подтверждают синергетическое действие (см. табл,1 и 2).
Пригодными для комбинации с соединением веществами, подавляющими (тормозящими) биосинтез стеролов, являются,
например, обладающие системным, антигрибковым действием азолы типа миконазо- лэ, например, кетоконазол, итраконззол и флюконазол, а также обладающие систем- 5 ным, антигрибковым действием аллилами типа нафтифинов, например, нафтифин и тербинафин.
Соединение I и.его фармацевтически приемлемые кислые соли могут найти при0 менение в качестве лекарств, например, в форме фармацевтических препаратов, для энтерального, парэнтерального или топического применения. Они могут применяться, например, через рот - в форме таблеток,
5 драже, твердых и мягких (желатиновых) капсюль, растворов, эмульсий или суспензий; через прямую кишку - в форме свеч; парэн- терально - например, в форме инъекционных растворов или инфузионных растворов:
0 или топически (локально)- например, в форме мазей, кремов или масел.
Приготовление фармацевтических препаратов может быть осуществлено известным каждому специалисту методом, а
5 именно тем, что 4-/(6-диметиламино)гек- сил)окси/-2-фенилацетофенон и его фармацевтически приемлемые соли с кислотами, при необходимости в комбинации с другими, терапевтически ценными веществами,
0 к примеру, упоминавшимися веществами, подавляющими биосинтез стеролов, совместно с пригодными, не токсичными, инертными, терапевтически переносимыми твердыми или жидкими материалами-носи5 телями и, при необходимости, с прочими фармацевтически вспомогательными веществами приводятся в подходящую для подачи форму.
В качестве материалов-носителей ис0 пользуются как неорганические, так и органические материалы-носителя (наполнители). Так, например, для таблеток, драже и жестких желатиновых капсюль в качестве наполнителя могут использоваться лактоза,
5 кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновая кислота или ее соли. Для мягких желатиновых капсюль в качестве наполнителя могут использоваться, например, растительные масла, воски, жиры и полу0 тзердые и жидкие полиолы (в зависимости от свойств (состояния) биологически активного вещества наполнитель, однако, может и не понадобиться в случае мягких капсюль). Для приготовления растворов м сиропов в
5 качестве наполнителя используются, например, вода, спирты, полиолы, глицерин и растительные масла. Для свеч в качестве наполнителей используются, например, натуральные или затвердевшие масла, воски. жиры и полужидкие и жидкие полиолы. Для
топических (местных) препаратов в качестве наполнителей используются глицериды, полусинтетические и синтетические глицериды, гидрированные масла, жидкие воски, жидкие парафины, жидкие жирные спирты, 5 стеролы, полиэтиленгликоли и производные целлюлозы.
В качестве фармацевтических вспомогательных веществ рассматриваются стабилизирующие, .консервирующие, сма- 10 чива ющие и эмульгирующие средства, средства для улучшения консистенции, средства для улучшения вкусовых качеств, соли для изменения осмотического давления, буфер-, ные вещества, растворители, красящие 15 средства, средства для покрытия и антиок- сиданты.
Дозирование соединения I может варьироваться, в зависимости от подлежащего подавлению патогенного грибка, возраста и 20 индивидуального состояния пациента и от способа применения, в широких пределах, и. .естественно, подбирается индивидуально в каждом отдельном случае. Для предупреждения и подавления локальных инфекций и инфекций всего организма, вызванных патогенными грибками, для взрослых пациентов, в случае монотерапии ежедневная доза составляет от, приблизительно, 0,01 г до, приблизительно 4 г, в час- 30 тности, от приблизительно 0,05 г до, приблизительно, 2 г. При этом является целесообразным распределить дневную дозу на несколько дозировок. В случае комбинированной терапии речь идет о ежедневной 35 дозе, приблизительно, от 0,01 г до 2 г, в частности, приблизительно, от 0,02 г до 1 г соединения I и, приблизительно, от 0,02 г до
25
0,2 г вещества, подавляющего биосинтез стеролов.
Фармацевтические монопрепараты содержат, в случае наибольшей целесообразности, приблизительно 10-1000 мг, преимущественно 50-500 мг, соединения I, Комбинированные препараты содержат, в случае наибольшей целесообразности, приблизительно 10-500 мг, преимущественно, 20-250 мг соединения I и, приблизительно, 50-100мг вещества, подавляющего биосинтез стеролов.
Таким образом, полученное в результате осуществления разработанного способа соединение I обладает не только ярко выраженным антигрибковым действием, но и показывает синергетические эффекты в комбинации с другими известными веществами, обладающими антигрибковым действием, которые тормозят биосинтез стеролов, как кетрконазол и термбинафин.
Формула изобретения Способ получения -(диметилами- но)гексил окси}-2-фенилацетофенона формулы
О
II
снсн
Чсн2)6-о с-сн2-О
/
а
его фармацевтически приемлемых солей с кислотами, отличающийся тем, что, 4-окси-2-фенилацетофенон подвергают взаимодействию с Ы,М-диметил-6-амино-1-гек- санолом в присутствии трифенилфосфина и сложного диэтилового эфира азодикарбоно- вой кислоты с последующим выделением продукта в чистом виде или в виде соли.
Сущность изобретения: продукт - (диметиламино)гексил окси}-2-фенилацето- фенон. т.пл. 69-71°С, выход 25% пр. Реагент 1: М,М-диметил-6-амино-1-гексанол. Реагент 2: 4-окси-2-фенилацетофенон в присутствии трифенилфосфина и сложного ди- этилового эфира азодикарбоновой кислоты при 20°С. 2 табл.
Таблица
Таблица 2
| Машковский М.Д | |||
| Лекарственные средства, т.2, М.: Медицина, с.362, 1986. |
