Штамм гриба АSновYа GoSSYpII-продуцент эфирного масла Советский патент 1993 года по МПК C12N1/14 C12P7/64 

. Изобретение относится к биотехнологии, эфиромасличному производству и может быть использовано при комплексном получении ароматических продуктов с запахом розового направления и препаратов рибофлавина.

Известны штаммы грибов родов.;. Ceratocystls, Eremotheclum, синтезирующие ароматообразующие вещества, являющиеся основными компонентами эфирного масла из цветков розы (1,2). Однако, эти культуры грибов характеризуются относительно низкими показателями продуктивности и скорости роста.

Известен также штамм Cremotheclum ashbyl В КМ Р3009Д, синтезирующий эфирное масло, в состав которого входит герани- ол, цитронеллол, нерол - фениаэтанол и др. . и достигающий максимума продуктивности через 2 суток. При этом выход ароматических продуктов составляет на основной ферментационной среде 155,1-190,3 мг/л и .соевой среде 201,,1 мг/л (3).

Недостатком этого штамма является невысокая активность образования монотерпеновых и ароматических спиртов как наиболее ценных компонентов эфирных масел розового направления.

Цель изобретения - получение нового штамма-продуцента эфирного масла, обладающего повышенной биосинтетической активностью и композиционным соотношением монотерпеновых и ароматических спиртов, приближенных к составу розового эфирного масла.

Цель изобретения достигается тем, что в качестве продуцента эфирного масла ис- поль зуют штамм гриба Ashbya gossypli BKM Р3276Д.

Предлагаемыйштамм- получен многократным ступенчатым отбором и характеризуется следующими культураль- но-морфологическими и физиолого-биохи- мическими признаками.

Культурзльно-морфологические признаки.

Колонии на 3-х стандартных средах: сусло-агаре, картофельном агаре, среде Чапека с кукурузным экстрактом через 3 суток роста при температуре 27±1°С достигают 6 мм,

ел

с

v| О

ю -N

СО

пигментированы, желтого цвета с четким краем. Форма колоний округлая, они плоские, матовые, плотные, с агара легко снимаются петлей а виде пленки. Спустя 10 суток светло-желтые, слегка выпуклые в середине, с поверхностно-разбросанным бесцветным краем. Пигмент (рибофлавин) окрашивает среды в желто-коричневатые тона,

Рост по штриху на среде Чапека - скуд- ный, сусло-агаре, картофельном агаре-уме- р енный, на среде Чапека с кукурузным экстрактом, питательном агаре-хороший.

При культивировании на твердых агари- зованных средах и в аналогичных жидких средах существенных отличий микроморфологических показателей (форма, размеры клеток и т.п.) и в характере роста не наблюдалось.

Аски интеркалярно, а почкующиеся клетки терминально или латерально образуются при старении культуры, не ранее стационарной фазы роста.

Физиолого-биохимические признаки.

В качестве источников углерода, кроме описанных в материалах заявки, может использовать мальтозу, рафинозу.целлюлозу, этанол; не утилизирует галактозу, эрабино- зу, ксилозу, рамнозу, глюкозамин, дульцит. маннит, сорбит, инозит, цитрат.

В качестве источников азота могут служить белки, пептиды и продукты их гидролиза в виде пептона, дрожжевого экстракта, соевой муки, казеина и т.д., восстановление нитратов отрицательное, возможна ассимиляция аммонитного азота.

Область рН для роста 3,2-7,5, оптимум рН 5,5-6,5.

Растет в диапазоне температур 20- 35°С, оптимальная область - 26-28 С (при 37°С не растет).

Выделенный стабильный штамм превосходит исходный по указанным свойствам. Хранение осуществляют на косяках сусло-агара и КДС-агара (картофельный экстракт - 2,0%. дрожжевой экстракт - 0,5%, сахароза - 2,0%, рН 5,5) при температуре +5-8°С в холодильнике.

Штамм синтезирует смесь душистых веществ, состоящую из цитронеллола (2,5- 4,6%), нерола (1,9-6,8%), гераниола

(31,5-58,8%), Р -фенилэтанола (44,0-57,4%) и др.

В таблице представлена биосинтетиче- екая активность штамма в сравнении с тако- вой известного штамма.

Табличные данные показывают, что уровень синтеза ароматообразующих соединений штаммом ВКМ Р3276Д выше, чем штаммом ВКМ Р3009Д при прочих равных условиях.

Пример. Однрсуточной культурой штамма Ashbya gosslpil ВКМ Р326Д, выращенной на среде. %: глюкоза 2,0 пептон 1,0, дрожжевой экстракт 0.1 вода - остальное, рН 6,5. засевали в количестве 10 об.% основную ферментационную среду следующе го состава, г/л: глюкоза 7,5 пептон 4,0 сукцинат натрия 2,0 , гидроортофосфат ка- лия 0,5, вода дистиллированная - остальное, Инкубировали при 28°С на качалке в течение 45 часов. Ароматический продукт извлекали методом экстракции, выход составил 212,0 мг/л. Состав душистых ве- ществ Г %: цитронеллол3,8, нерол 1,9, гераниол 50,2,/ -фенилэтанол 44,1. : П р и м е р 2. Штамм Ashbya gossypil ВКМ Р3276ДДЛЯ получения инокулята выращивали аналогично примеру 1, затем засе- вали ферментационную среду (Фа) следующего состава, г/л: глюкоза 10,0, пептон 3,0, дрожжевой экстракт 0,5, сукцинат . натрия 1,5, гидроортофосфат калия 0,5, ино- зитО,14, вода остальное. Культивировали на ; качалке в течение 54 часов при 27±1°С. Количество эфирного масла, полученного методом гидродистилляции, составило 188,6 мг/л.

Соотношение ароматообразующих соединений было следующим. %: цитронеллол 4,2, нерол 6,8, гераниол 32,6, у -фенилэта- , нол 56,4.

За счет использования нового штамма

выход ароматических продуктов возрастает 310,3-30.3%.

Формула изобретения

Штамм гриба Ashbya gossypil ВКМ 50 Р3276Д - продуцент эфирного масла.

Состав сред приведен в примерах.

Количество синтезированных монотерпеновых спиртов по данным ГЖХ в параллельных опытах.

Использование: биотехнология, эфиро- масличное производство. Штамм Ashbya gossypli BKMF 3276Д получен многократным ступенчатым отбором и продуцирует на различных жидких питательных средах. Смесь душистых веществ, состоящую (%) из цитронеллола 2,5-4,6%; нерола 1,9-6,8%; гераниола 31,5-58,5%, / -фенилэтанола 44,0-57,4% и др. Продуктивность на 29- 32% выше, чему известного штамма. 1 табл.