Способ дифференциальной диагностики рака легкого Советский патент 1993 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть использовано для биохимического определения ферментативной активности крови человека при верификации патологического процесса.

Цель изобретения - повышение точности и ускорение способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Для исследования 4-6 мл венозной крови брали из локтевой вены в стерильную пробирку с гепарином (10 единиц гепарина на 1 мл крови). Пробирка помещалась на 1 ч в термостат при 37°С.

Полученную плазму использовали для выделения лимфоцитов, которые доводили до концентрации 2 106 клеток на миллилитр.

Лимфоциты из периферической крови выделяют в градиенте плотности фиколл-ве- .рографин (1,077 г/мк)по методу Бейюма. Определение активности ГТ основано на

скорости образования коньюгата с 1 -Хлор- 2, 4-динитробензолом, характеризующегося максимумом поглощения при 340 нм. К суспензии лимфоцитов добавляли тритон Х-100 в конечной концентрации 0,1%, инкубировали 30 мин при 37°С, центрифугировали 10 мин при ЗОООд.и полученный лизат использовали для исследований.

Реактивы:

а) К-фосфатный буфер 0,1 М, рН 6,5;

б) глутатион восстановленный - 10 мМ раствор 0,1 М К-фосфатном буфере рН 6,5

в) 1-хлор-2,4-нитррбензол (ХДНБ) - 100 мМ раствор в спирте.

Смесь для определения активности ГТ (на 1 пробу):

а) К-фосфатный буфер 0,1 М, рН 6,5 - 1,78мл

б) глутатион восстановленный 10 мМ раствор - 0,2 мл

в) ХДНБ, 10 мМ спиртовый раствор - 0,02 мл.

ел

с

XI

ю

х|

О х|

О

Ход определения;

В день проведения готовят общую смесь из компонентов а-в на всю серию проб. В контрольную и опытные кюветы вносят по 2,8 мл смеси и при А 340 нм регистрируют 2-3 мин неферментативную реакцию. Затем в опытную кювету вносят от 0,1 до 0,2 мл лизата лимфоцитов и регистрируют ферментативную реакцию. Результаты выражают в пмоль образовавшегося продукта реакции/мин/10 клеток. Коэффициент молярной экстинции конъюгата глутатионаиХДНБ-9,6 -103 . .

Предложенным способом было обследовано 138 человек. Из них рак легкого выявлен у 112 человек, хроническая бронхопневмония у 18 человек, туберкулез у8 человек. Кроме того, были обследованы доноры-курильщики - 47 человек.

Конкретные клинические примеры иллюстрируются выписками из историй болезни и табл.1.

1. Больной Солдатенко Ф.М., 53 лет, ист. болезни №12396/т. Поступил в тораль- ное отделение Ростовского научно-исследовательского онкологического института 27.10,87 с жалобами на боли в грудной клетке, периодический кашель с кровянистой мокротой, одышкой, слабость, повышенную температуру. В результате проведенного клинико-лабораторнр-рентгенологического обследования поставлен диагноз: центральный рак правого легкого ст. Ш, гр. II.

04,11.87 - тест с определением активно- .сти ГТ в лимфоцитах периферической крови дал активность 18,2/мин/10 клеток.

10.11.87 произведена операция - пнев- моэктомия справа. Гистоанализ № 222487- 491 - плоскоклеточный рак с ороговением. Послеоперационный период протекал гладко. Больной выписан 8,12.87 в удовлетворительном состоянии.

2. Больной Дубовсков А.А., 49 лет, история бол, N° 14/ф. Поступил в торакальное отделение Ростовского научно-исследовательского онкологического института 05.01,88 с жалобами на периодический сухой кашель, субфебрильную температуру по вечерам, потливость, слабость. Проведено клинико-рентгенологическое обследование. Поставлен предположительный диагноз: периферическая опухоль верхней доли правого легкого.

07.01.88 - тест определение активности fT. Она составила 84,6 пмоль/мин/10 клеток.

15.01.88 проведена операция - клиновидная резекция верхней доли правого легкого. Гистологический анализ - № 226266 - туберкулома. Больному проведено специфическое лечение. Выписан 29.01.88 в удовлетворительном состоянии для дальнейшего лечения у туболога.

3. Больной Ткалин Н.Г., 50 лет, история бол. № 2043/ф, поступил в торакальное отделение РНИОИ 12.01.88 с жалобами на боли, в грудной клетке, кашель с гнойной

мокротой, одышку, слабость, повышенную температуру. В результате проведенного обследования поставлен предварительный диагноз: полостная форма опухоли верхней доли левого легкого.

19,02.88 тест дал активность ГТ 128,3 пмоль/мин/10 клеток,

24.02.88 проведена операция - верхняя лобэктомия слева. Гистоанализ № 228877- 879 - хроническая пневмония с образованием абсцесса. Проводилось противовоспалительное лечение.

Выписан 1.03.88 в удовлетворительном состоянии.

Из таблицы видно, что низкий уровень

активности ГТ указывает на наличие у больного опухолевого заболевания, а средние и высокие показатели активности свидетельствуют о заболевании неонкологического характера, либо вообще об отсутствии заболевания легких.

Для сравнения с прототипом (способ Хаберера и соав.) приводится табл. 2, в которой сравниваются предлагаемые параметры у онкологических и неонкологинеских

больных в способе-прототипе.

Из представленных в табл. 2 данных следует, что предлагаемый способ имеет следующие преимущества:

- позволяет получать достоверную диф- ференциальную диагностику рака легкого, тогда как прототип не дает такой возможности;

- дает возможность за 15 мин определить уровень активности глутатион-5-транс- ферэзы вместо 60 мин по способу- прототипу.

Таким образом, предлагаемый способ дает высокий положительный эффект.

Использование: определение ферментативной активности крови человека при верификации патологического процесса. Цель изобретения - повышение точности и ускорение способа. Сущность изобретения: в лимфоцитах периферической крови , ляют активность глутатион-З-трансфераэм и при активности ГТ меньше 34 пмоль/мин/10 диагностируют рак легкого. 2 табл.

Формула и зо бретения Способ дифференциальной диагностики рака легкого путем определения активности фермента в крови, отличающийся

тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, из венозной крови выделяют лимфоциты, доводят концентрацию клеток до 2 -106 в мл, клетки лизируют, в

5 1797070 6

супернатанте определяют активность глута- меньше 34 пмоль/мин/10 клеток диагнос- тион-5-трансферазы и при ее активности цируют рак легких.

Уровни активности ГТ в лимфоцитах крови в зависимости от патологического процесса в легких

Сравнительный анализ изучаемых параметров у онкологических и неонкологических больных

В способе-прототипе изучаемым параметром являлась специфическая активность, выраженная в имп/мин/103 клеток, а в предлагаемом способе - удельная активность ГТ, выраженная в пмоль/мин/107 клеток.

Таблица 1

Таблица 2