Индуктор интерферона и ингибитор вируса Советский патент 1993 года по МПК A61K37/64 

Изобретение относится к экспериментальным областям медицины и биологии, связанным с использованием веществ, которые обладают способностью стимулировать неспецифические иммунологические вещества (в частности - интерферонообра- зование) и противовирусными свойствами.

Целью изобретения является поиск среди эфиров оксиэтиленгликоля биологически активных веществ с широким спектром активностей, включающим интерферонинду- цирующие и антивирусные свойства.

Поставленная цель достигается использованием лаурокса - 9 - смеси полиоксиэти- ленгликолевых эфиров лауриновой кислоты с формулой СНз(СН2)1оСо(ОСН2СР2)эОН (ГУ 6-14-882/78). которая находит применение в эамасливателях синтетических волокон (в частности, на Могилевском комбинате синтетического волокна).

Интерферониндуцирующие и антивирусные свойства у лаурокса-9 выявлены

впервые и не вытекают из ранее известных его характеристик. 0

Сущность изобретения поясняется примерами, выполненными с использованием не токсичных для клеток доз лаурокса-9.

Испытания индукторной активности.

Пример 1. В пробирку с культурой клеток фибропластов эмбриона человека (ФЕЧ)с 1 мл питательной среды 199 вносят 200 мкг лаурокса-9, оставляют на контакт в течение 4 ч при 37°С, сливают жидкую фазу, отмывают клетки раствором Хенкса, заливают свежей порцией питательной среды, инкубируют 24 ч при 37°С, собирают культураль- ную жидкость и по стандартной методике различные ее разведения тестируют на культуре клеток ФЕЧ с вирусом везикулярного стоматита и определяют в ней титр интерферона, который равен 1 ;40.

Пример 2. По методике, описанной в примере 1, проводят испытание с использованием клеток фибробластов эмбрионов

00

о

00

:ю

W

кур (ФЭК) и 25 мкг лау.рокса-9 и получают титр 1:20.

Примерз. По методике, описанной в примере 1, проводят испытание с использованием клеток Цэ29 и 50 мкг лаурокса-9 и получают титр 1 ;30.

Более полное представление о примерах испытаний лаурокса-9 в качестве индуктора интерферона дает таблица.

Современная классификация исходит из того, что активными признаются индукторы, обусловливающие титры 1:16-1:32, а высокоактивными - вещества с титрами 1:32 и выше. Это означает, что, судя по результатам опытов на ФЭЧ и Lgaa, лаурокс-9 должен классифицироваться как .высокоактивный индуктор интерферона.:

Испытания противовирусной активности. ; , -.. ; :. ...-.

Приме р 4. В 3 пенициллиновых флаконах с монослоем фйбробластов эмбриона человека вносят по 1 мл питательной . среды 199 со 100 мкг лаурокса-9. С 3 контрольными флаконами проводят аналогичные процедуры, но без внесения испытуемого вещества. Контакт препарата с клетками

осуществляют 24 ч при 37°С, после чего проводят микроскопировайие, убеждаются, что внесенная доза вещества не вызывает цито- патических изменений, и удаляют жидкую фазу. Затем клетки заражают тест-вирусом (вирус везикулярного стоматита, штамм Индиана) в предварительно подобранной дозе, вызывающей 100%-ной поражение клеток через 24 ч. После адсорбции вируса при 37°С в течение 1 часа его отмывают раствором Хенкса и во флаконы заливают по 1 мл питательной среды. Зараженные клетки инкубируют при 37°С18-24 ч, собирают культуральную жидкость, объединяя ее в опытный (3 мл) и контрольный (3 мл) образцы, по стандартной методике определяют концентрацию вируса в опыте и контроле, выражая ее в Igi бляшкообразующих единиц (БОЕ/мл), и по разнице данных по- казателей вычисляют степень ингибиции вируса в опыте. В контроле концентрация вируса составляет 6,2 lg БОЕ/мл, в опыте (с

испытуемым веществом) бляшкообразова- ние подавлено полностью (0 1д БОЕ/мл), степень ингибиции составляет 6,2-0 6,2 1д

БОЕ/мл, т.е. 100 мкг/мл лауроксэ-9 оказывает сильное антивирусное действие.

Пример 5. По методике, описанной в опыте 4, проводят испытания на клетках L.929 с использованием 4-х доз лаурокса-9 и получают следующий результат:

доза (мкг/мл) степень ингибиции (lg БОЕ/мл)

2005,8

100 3.8

503.8

253,8

Представленные в примерах 1-5 и таблице данные свидетельствуют о том, что заявляемое вещество лаурокс-9 является высокоактивным индуктором интерферона, обладающим одновременно свойством подавлять размножение вируса везикулярного стоматита. Следует также отметить 2 дополнительных положительных эффекта заявляемого вещества: 1) лаурокс-9 обладает способностью задерживать развитие экспериментальной карциномы ОЯ путем 1,6-2-кратного снижения объема накапливающейся асцитической жидкости и достоверного (Р 0,05) 1,5-кратного увеличения продолжительности жизни крыс с привитой опухолью; 2) заявляемое вещество - лау рокс-9 стоит дешевле, чем прототип- стеа- рокс СП-9, . 0.- -.--л.-; - .

Заявляемое вещество как промышлен- но выпускаемый продукт уже сейчас готово для экспериментального использования по крайней мере в 2-х целях: 1) как лабораторный реактив с известной стандартной йнтерфероногенной и антивирусной активностью, 2) как стандарт для фармакологических производств, предназначенный для оценки и контроля йнтерфероногенной активности партий лаурокса-9, используемых как вспомогательное вещество в лекарственных препаратах. Интёрферониндуциру- ющие и антивирусные свойства лаурокса-9 могут быть также использованы в экспериментальной ветеринарии.

Формул а и зобретения Применение полиоксиэтиленгликоле- вых эфиров лауриновой кислоты в качестве индуктора интерферона и ингибитора вируса.: .-

Испытание интерфёроногенной активности лэурокса-9 в культуре клеток (средние титры

2-кратмых испытаний)

Использование: предлагаемое вещество может быть использовано в экспериментальной медицине и биологии. Цель: расширение спектра биологической активности вещества из группы полиоксиэтиленглико- левых эфиров. Сущность изобретения заключается в том, что в качестве индуктора интерферона и ингибитора вируса применяются полиоксиэтиленгликолевые зфиры ла- уриновой кислоты, который обычно используют в замасливателях синтетических волокон. Положительный эффект: возможность сочетанного интерфероногенного и антивирусного воздействия в эксперименте с помощью вещества из группы полиок- сиэтиленгликолевых.