ИНДУКТОР ИНТЕРФЕРОНА Российский патент 1998 года по МПК A61K31/245 

Изобретение относится к экспериментальным областям медицины и биологии, связанным с веществами, введение которых в клеточные культуры и организмы обусловливает выработку факторов неспецифического иммунитета, в частности интерферона. С той же целью оно может быть использовано в экспериментальной ветеринарии.

Известны индукторы интерферона, относящиеся к различным химическим классам - полифосфаты, поликарбоксилаты, полирибонуклеотиды и др. [1]. Недостатком подавляющего большинства известных индукторов интерферона является отсутствие у них официальных форм, т.е. препаратов, пригодных для практического использования в медицине и ветеринарии.

Наиболее близким к заявленному изобретению по химической природе является официальный препарат N-(2,3-диметилфенил)-антрониловая кислота, или мефенамовая (мефенаминовая) кислота [2, с. 174]. Это средство относится к группе наркотических аналгетиков, действующих на центральную нервную систему. У него, кроме того, обнаружены интерфероногенные свойства [3].

К недостаткам данного вещества как индуктора интерферона прежде всего относится относительно низкая интерфероногенная активность (средний титр на наиболее чувствительной клеточной культуре ФЭЧ 1:44,5, табл. 1) и узкий спектр интерфероногенной активности (из трехклеточных культур две - ФЭК и L₉₂₉ являются низкочувствительными, табл. 1).

Кроме того, мефенамовая кислота имеет серьезные противопоказания - язвенную болезнь желудка и 12-перстной кишки, воспалительные заболевания желудочно-кишечного тракта [2, с.174].

Цель изобретения - поиск среди безвредных официальных препаратов индуктора интерферона с повышенной интерфероногенной активностью и широким спектром активности на клеточных культурах.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве индуктора интерферона используют гидрохлорид β -диэтиламиноэтилового эфира пара-аминобензойной кислоты или новокаин.

Новокаин является местноанастезирующим препаратом из группы средств, действующих на чувствительные нервные окончания [2, с.287].

Заявляемое решение является новым, так как применение новокаина направлено на выполнение новой для этого препарата функции - индуцировать интерферон, что не вытекает их известных свойств новокаина и является неочевидным.

Заявляемый индуктор соответствует также критерию "существенные отличия", так как он химически отличается от прототипа - мефенамовой кислоты, превосходит прототип по интерферониндуцирующей активности, по спектру чувствительных клеточных культур.

Ниже приводятся примеры конкретного выполнения изобретения с использованием нетоксичных для клеток (25-1000 мкг/мл) и разрешенных для приема людям (25-50 мл 0,5%-ного раствора) доз новокаина.

Пример 1. В пробирку с культурой клеток фибробластов эмбрионов кур (ФЭК) с 1 мл питательной среды 199 вносят 1000 мкг новокаина, оставляют на контакт в течение 4 ч при 37^oC, сливают жидкую фазу, отмывают клетки раствором Хенкса, заливают свежей порцией питательной среды, инкубируют 24 ч при 37^oC, собирают культуральную жидкость и по стандартной методике [4] определяют в ней титр интерферона, который равен 1:160.

Пример 2. По методике, описанной в примере 1, проводят испытание с использованием клеток фибробластов эмбриона человека (ФЭЧ) и 25 мкг новокаина и получают титр 1:320.

Пример 3. По методике, описанной в примере 1, проводят испытание с использованием клеток L₉₂₉ и 500 мкг новокаина и получают титр 1:80.

Всего на культурах клеток ФЭК, ФЭЧ и L₉₂₉ в 11 опытах испытана интерфероногенная активность 60 единичных доз новокаина в диапазоне 25-1000 мкг/мл. Параллельно с этим в семи опытах испытано 26 отдельных доз мефенамовой кислоты (в тех же диапазонах). Результаты этих испытаний приведены в табл. 1.

Они позволяют сделать следующие выводы: 1) новокаин обладает более широким, чем прототип, спектром индукторной активности, так как он индуцирует интерферон на всех трех испытанных культурах клеток а прототип (мефенамовая кислота) - лишь на двух из них (ФЭЧ и L₉₂₉); 2) новокаин превосходит мефенамовую кислоту и по уровню интерфеногенности, так как средние показатели обусловленного им интерферонообразования - 1:22 (ФЭК), 1:85,6 (ФЭЧ), 1:24,3 (L₉₂₉) достоверно превосходит (P<0,05) соответствующие показатели у прототипа (1:5, 1:44,5, 1:8,9).

Пример 4. Доброволец РЛА принимает однократно перорально 50 мл 0,5%-ного раствора новокаина (ампульный аптечный препарат). У него до приема через 8 ч и 24 ч после приема берут кровь, получают сыворотки, в которых затем по стандартной методике [4] определяют титры интерферона, которые составляют соответственно 1: 5, 1:80 и 1:320. Это свидетельствует о том, что прием 50 мл 0,5%-ного новокаина обеспечил через 8 и 24 ч соответственно 16-64-кратное повышение титров интерферона.

Результаты испытаний индукторной активности новокаина на добровольцах - авторах заявки представлены в табл. 2.

Они показывают, что все четыре добровольца на прием 25-70 мл 0,5% раствора новокаина в пределах 8-24 ч реагировали подъемом уровня интерферона в сыворотках крови. Кратность подъема титров при этом колебалась от 4 до 64, что свидетельствует о высокой интерферониндуцирующей активности заявляемого вещества в организме людей.

Приведенные материалы показывают, что новокаин является высокоактивным индуктором интерферона в культуре клеток и организме людей. По спектру чувствительных клеток и по инторфероногенной активности он превосходит прототипный индуктор - мефенамовую кислоту. Кроме того, он не имеет противопоказаний, ограничивающих применение мефенамовой кислоты (язвенная болезнь желудка и 12-перстной кишки, воспалительные заболевания желудочно-кишечного тракта) [2, с. 174]. Наличие у новокаина выраженных интерферониндуцирующих свойств в сочетании с его известными ценными качествами (хорошая переносимость, анестезирующее, спазмолитическое действие, подавление патологических рефлексов и др. [2, с.287]) могут служить основой для создания новых эффективных схем его профилактического и лечебного использования.

Источники информации
1. Ершов Ф.И., Новохатский А.С. Интерферон и его индукторы. -М.: Медицина, 1980, с. 13-14.

2. Машковский М.Д. Лекарственные средства. -Минск, 1987, т.1.

3. Тринус Е.К., Фролов А.Ф., Руденко А.А. и др. Выбор и рациональность применения интерфероностимуляторов при гриппе. В сб.: Антивирусные вещества. -Тезисы V Международного симпозиума социалистических стран. -Рига, 1982, с. 13.

4. Чижов Н.П., Ершов Ф.И., Индулен М.К. Основы экспериментальной химиотерапии вирусных инфекций. -Рига, Зинатне, 1988, с.52.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной медицине, и может быть в дальнейшем использовано в фармакологии. Цель изобретения - повышение интерфероногенной активности индуктора и расширение спектра его активности на клеточных структурах. Для этого в качестве индуктора интерферона используют новокаин. 2 табл.

Применение новокаина в качестве индуктора интерферона.