Способ определения метастазов при раке прямой кишки Советский патент 1993 года по МПК G01N33/68 

ел С

Изобретение относится к медицине, точнее к онкологии, и может быть использовано при раке прямой кишки с целью выбора лечения. Положительный эффект использования способа заключается в том, что активность супероксиддисмутазы выявляет операбельность больных паллиативную или радикальную операции, что позволяет снизить послеоперационные осложнения, увеличивает выживаемость боль- . ных, снижает тяжесть протекания, заболевания. Для этого определяют активность супероксиддисмутазы что позволяет выявить изменение активности супероксиддисмутазы в лизате крови. При уменьшении активности СОД в процессе облучения определяют распространенность процесса, наличие метастазов и необходимость паллиативной операции, а при увеличении актив- ; ности СОД определяют ослабление процесса и возможность проведения радикальной.операции.

Изобретение относится к медицине, точнее к онкологии, и может быть использовано при лечении рака прямой кишки, включающем облучение и оперативное вмешательство.

Целью изобретения является повышение операбельное™ больных раком прямой кишки.

Способ осуществляется следующим образом.

Кровь больных-из пальца в количестве 0,1 мл помещают в холодную среду, содержащую 0,4 мл смеси хлороформ -этанол (в соотношении 3:5) и 0,9 мл 0,05 М К K-Na фосфатного буфера рН 7,8 и после энергичного встряхивания и центрифугирования в течение 15 минут при 3000 об/мин 0,1 мл надосадочной жидкости (лизат крови) вносят в инкубационную смесь и определяют

активность СОД (кф1:15.1.1). Инкубационная смесь, содержащая 1,25х105 М нит- ротетразолиевого синего, 10 тМ феназинметасульфата, ТтМЭДТА, растворенных в 2,9 мл 0,1 М K-Na фосфатного буфера рН 7,8 не требует наличия желатина в исследуемой пробе (в отличие от метода, предложенного R.Fried, (Biochemic, 1975, v. 57, 1975, 57. p. 657-660 так как линейность реакции сохраняется в течение семи и более минут запись на ленте самописца). Запуск контрольной реакции происходит при добавлении 0,1 мМ НАД-Н. Активность СОД определяли по скорости образования нерастворенного комплекса формацина в пробе при длине волны 540 нм. Мы на каждую исследуемую пробу делали свой контроль. Можно также для увеличения производительности труда вначале определять скороС

о ел

OJ

ю о

А

N ,

сть контрольной реакции; и вносить НАД-Н в каждый исследуемый образец, заранее зная скорость реакции в контрольной пробе. Внесение 0,1 мл надосадочной жидкости, тормозит скорость образования нерастворенного комплекса в пробе. Расчет активности фермента производят по формуле:

2 -(Ек-Ео)

Ек ,

где Ек - экстинкция контрольной пробы за 1 мин;

Ео - экстинкция опытной пробы (про- давление контрольной реакции при внесении в нее опытного образца) за 1 мин;

N - разведение опытного образца.

За единицу активности СОД принимают количество фермента, необходимое для подавления образования нерастворенного комплекса на 50% в условиях определения.

Измерения проводили на спектрофотометре, снимая показания с соединенного с ним самописца. Для определения активности фермента использовали интервал подавления реакции 40-60%, что достигалось изменением концентрации образца, внесенного в инкубационную смесь. Стандартизация условий определения позволила выявить определенные закономерности в изменении активности супероксиддисмута- зы, объеме оперативного вмешательства, состоянии сольных и прогнозировании возникновения послеоперационных осложнений.

Определение активности СОД в каждой пробе при индивидуальном контроле позволило исключить ошибки, связанные с неточностью внесения НАДИ - восстановленной натриевой соли никотинамидадениндинук- леотида в пробу,и создало условия соблюдения стандартизации определения активности фермента в исследуемых образцах. Это дало возможность установить узкую границу повышения активности фермента, характерную для резектабель- ных больных при раке прямой кишки.

Определение активности СОД можно проводить на любом фотоэлектрокалори- метре (Spicol, СФ-14, СФ-26 и др.). Время определения активности фермента контрольной и опытной проб - 3-4. мин. При отсутствии самописца, показания снимаются каждые 30 сек в течение 1,5-2,0-минут.

Наблюдения, проведенные еще за 30 больными данной локализации подтвердили полученные результаты за исключением оставшейся немногочисленной группы неоперабельных больных с низкой активностью фермента. Исходная низкая активность СОД по сравнению с донорами свидетельствует о наличии отдаленных метастазов.

Примеры конкретного применения способа,

ед/мл/мин. Поставлен диагноз рак прямой кишки (среднеампулярный отдел) III стадии. Проведена предоперационная ежедневная ТГТ разовой дозой 5Гр, курсовой дозой-20 Гр, Активность СОД после каждого сеанса

облучения составила в ед./мл/мин 592, 2267, 1270, 1071. Через 2 дня (выходные) активность СОД упала до 335 ед./мл/мин. Экстремальное повышение активности СОД (более чем в 4 раза) совпадало с головокружениями, рвотами, тошнотами. 24/П- 86 больной сделана операция - экстерпация прямой кишки с выведением одноствольного ануса. Опухоль на 9-14 см от ануса, диаметром около 5 см, блюдцеобразная,

прорастающая все слои, занимает более половины полуокружности кишки. ГА № 189530-189531, а аденокарцинома с глубоким инфильтративным ростом с проявлением воспаления, участками некроза. ГА Nfc

189532-189533 метастаз железистого рака в л/у калотеральный, Послеоперационный период протекал с осложнениями. Активность фермента с 361 ед/мл/мин/40 дней п/о снизилась до 263 (.65 дней п/о). Количество послеоперационных койко-дней .- 68, общее количество койко-дней - 89. Через 6 мес на контрольном осмотре при амбулаторном обследовании выявлено нагноение. Общая активность СД составляла 221. Улучшение состояния через 1 год, активность СОД 300 ед./мил/мин, через 2 года 356 ед./мил/мин. В настоящее время находится под наблюдением врача. Признаков рецидивов и метастазов нет..

октября курсовой дозой 20 Гр 12/11-86 г, произведена операция - экстерпация прямой кишки с выведением одноствольного ануса; ГА № 262232, 202849, 202850 - умеренно дифференцированная аден окарцинома, участки слизистой с прорастанием глубоких мышечных слоев. Послеоперационный период протекал без особых осложнений. Рана затянулась первичным натяжением. Больной выписан- 17 декабря 1986 г. Общее количество койко-дней 57.

послеоперационных -35. В настоящее время находится под наблюдением врача. Активность СОД в ед./мл/мин составила: исходная - 384, после 1 с.о луч. - 402.2-450. 3-470. 4-520.

операции IV ст., IV кп. гр. Метастазы по диафрагмальной поверхности правой доли печени 4 см в диаметре. Опухоль в прямой кишке пальпируется через брюшину малого 5 таза, занимая верхний и средний отдел прямой кишки. ГА № 188483 -аденокарцинома. Считал себя больным с октября 1984 г., впервые обратился к врачу 6 ноября 1984 г. Не обследовался. Потерял в весе 8 кг. Умер

0 1990 г. прожив 4 года 12 дней после операции.

В настоящее время переведен в Ново5 шэггинск для терапии. Находится под наблюдением врача (5,5 лет). Опухоль выходит из ануса на 1 см.

Технико-экономическая эффективность способа при комбинированном лечении ра0 ка прямой кишки заключается в том, что критерий изменении активности суперок- сиддисмутазы позволяет выбрать индивидуальную для каждого больного, наиболее эффективную методику лечения, что увели5 чивает выживаемость больных, снижает тяжесть протекания заболевания, особенно при проведении облучения, выбор способа операции уменьшает послеоперационные осложнения; улучшает ближайшие и отда0 ленные результаты. Большая диагностическая значимость СОД может быть широко использована для оценки распространенности опухолевого процесса при профилактических осмотрах для. выявления групп

5 повышенного риска, так как метод прост, информативен, доступен для всех лабораторий, имеющих фотозлектроколормметры. Формула изобретения Способ определения метастазов при раке прямой кишки, включающий исследо

вание крови больного, отличающийсяисходным определяют распространенность

тем, что; с целью индивидуализации спосо-процесса и наличие метастазов, а при увеба. определяют активность- супероксиддис-личении активности супероксиддисмутазы

мутазы в процессе лечения и при-1определяют регрессию опухолевого процесуменьшении ее активности в сравнении с 5са.