Способ отсроченного определения гликемии Советский патент 1993 года по МПК G01N33/46 

Изобретение относится к области медицины, а именно к судебной медицине.

Цель изобретения - повышение точности.

Пример 1. Женщина 60 лет, смерть наступила от кровоизлияния в желудочки мозга в результате закрытой черепно-мозговой травмы. Кровь берут шприцом из бедренной вены и исследуют через 1-1,5 часа после изьятия следующим образом. Сначала определяют концентрацию общего гемоглобина методом, применяемым в клинико-диагностической лаборатории и переведенную в моль/л. Для этого в /йл трансформирующего раствора, состоящего ; из ацетоциангидрина -0,5 мл, калия желе- зистосинеродистого - 200 мг, натрия двууглекислого- 1 г и дистиллированной воды до 1 л добавляют 10 мкл цельной жидкой трупной крови, дают постоять 20 мин и затем колориметрируют на спектрофотометре СФ-26 против холостой, пробы при длине волны 540 нм. Экстинкция общего гемоглобина равна 0,350, затем по калибровочному графику находим концентрацию общего гемоглобина, она равна 13,1 г %, что соответствует при переводе в моль/л - 2,03 .

Затем определяют концентрацию гликированного гемоглобина. Для этого в пробирку наливают 0,1 мл цельной трупной крови, добавляют 0,9 мл дистиллированной воды и 0,5 мл 0,2 н раствора трихлоруксусной кислоты. Пробирку закрывают резиновой проб- кой. в которую вставлена инъекционная игла. Пробу перемешивают и ставят в штатив, помещенный в кипящую водяную баню. Через 10 мин иглы вынимают. Пробу нагревают еще 50 мин (общее время нагрева 60 мин). Затем пробу вынимают и после охлаждения к ней добавляют 0,5 мл 40%-ного раствора трихлоруксусной кислоты (для осаждения белков), После перемешивания пробу центрифугируют 10 мин при 6000 об/мин, Затем в обычную пробирку аккуратно отбирают 1 мл надосадочной жидкости и добавляют 1 мл концентрированной соляной кислоты и 1 мл 0,02 м раствора тиобар- битуровой кислоты. Пробу перемешивают, пробирку закрывают стеклянной пробкой слезкой и инкубируют 6 мин на кипящей водяной бане. После инкубации измеряют величину экстинкции окрашенного комп-, лекса при длине волны 432,5 нм. Окраска стабильна в течение 1 ч. Контрольная проба

ел

с

оо

О

XI со о со

содержит 1 мл дистиллированной воды, 1 мл концентрированной соляной кислоты 1 мл 0,02 м раствора тиобарбитуровой кислоты, контроль нагревают 6 минут на кипящей водяной бане.

Содержание гликировэнного гемоглобина в крови выражают в процентах от сум- марного гемоглобина. Определение концентрации гликированного гемоглобина проводят по калибровочному графику, построенному по стандартным растворам ке- тоаминного соединения - фруктозоглицина величина экстинкции которого соответствует величине экстинкции гликированного гемоглобина.

Величина экстинкции гликированного гемоглобина равна 0,085, что по калибровочному графику соответствует концентрации 3,25 1СГ4 моль/л. Далее подставляем-в формулу:

(%) Ю0%

1л25 1° .0% 2,203 10 3 2

Параллельно определяют количественное содержание глюкозы в крови глюкозо- оксидазным методом, для чего в центрифужную пробирку наливают 0,2 мл 5%-ного раствора сернокислого цинка, 0,2 мл 0,3 н раствора едкого натра, 0,5 мл дистиллированной воды и 50 мкл крови. Центрифугируют 5 мин при 4000 об/мин, отбирают 0,5 мл надосадочной жидкости и добавляют 2,0 мл рабочего раствора, состоящего из I H ацетатного буфера с ,8, глюкозооксидазы, пероксидазы и 1%-ного раствора ортотолидина в абсолютном спирте. Осторожно перемешивают и проводят исследование через 15 мин. Колориметри- руют при длине волны 620 нм против холостой пробы. Результат смотрят по калибровочному графику в мг%. В данном случае содержание глюкозы в крови равно - 0,0 мг%.

Затем высушивают данный образец крови в чашке Петри в эксикаторе, распределив его тонким слоем, в течение суток. После этого приступают к определению гликированного гемоглобина и глюкозы в сухом пятне. Для этого навеску сухой крови массой 120 мг помещают в пробирку.растирают стеклянной палочкой и заливают 0,8 мл раствора. Оставляют стоять 50-60 мин;постоян- но перемешивая палочкой.

Определение общего гемоглобина проводят по выше указанной методике с добав- лением 20 мкл раствора крови. Концентрация его по калибровочному графику и переведенная в моль/л равна 1,57 КГ3.

Для определения концентрации гликированного гемоглобина в пробирку набирают

0,2 мл раствора крови, добавляют 0,8 мл дистиллированной воды и 0,5 мл 0,2 н раствора трихлоруксусной кислоты. Далее исследование идет по выше указанной методике. Содержание гликированного гемоглобина в

крови выражают в процентах от суммарного гемоглобина. Величина гликированного гемоглобина по калибровочному графику соответствует концентрации 2,52 моль/л. Далее подставляют в формулу, параллельно

определяют количественное содержание глюкозы в растворе крови глюкозооксидаз- ным методом, для чего в центрифужную пробирку наливаем 0,2 мл 5%-ного раствора сернокислого цинка, 0,2 мл 0,3 н раствора

едкого натра, 0,5 мл дистиллированной воды и 100 мкл раствора крови.

Результат смотрят по калибровочному графику в мг%, В данном случае содержание глюкозы в сухом пятне крови равно - 0,0

мг%.

Пример 2. Мужчина 60 лет, смерть наступила от интоксикации в результате рака желудка с прорастанием в поджелудочную железу, Кровь взята шприцом из

бедренной вены. Исследования проводят соответственно вышеописанным методикам; сначала в жидкой цельной крови, затем через трое суток в сухом пятне крови. Содержа ние гликированного гемоглобина и глюкозы

в жидкой цельной крови, соответственно, было равно: 4,23% и 0,00 мг%.

Содержание гликированного гемоглобина и глюкозы в сухом пятне крови, спустя трое суток после высушивания, соответственно, было равно: 4,3% и 0,00 мг%.

Пример 3. Мужчина 41 года, смерть наступила в результате разрушения головного мозга при огнестрельном ранении в голову. Кровь взята шприцом из бедренной

вены. Содержание гликированного гемоглобина и глюкозы в жидкой цельной крови, соответственно, было равно: 4,5% и 0,00 мг%. Содержание гликированного гемоглобина и глюкозы в сухом пятне крови, спустя

сутки после высушивания, соответственно, было равно: 4,59% и 0,00 мг%.

Использование изобретения позволит определить уровень глюкозы за истекшие 3-4 месяца жизни.

Формула изобретения Способ отсроченного определения глике-- мии путем биохимического исследования сухого пятна трупной крови, отличающий51807393 6

с я тем, что, с целью повышения точности, его в 2-3 раза по сравнению с нормой опре- определяют содержание гликированного деляют гликемию, гемоглобина и при увеличении содержания

Использование: относится к медицине, а именно к судебной медицине. Цель изобретения - повышение точности. Сущность изобретения: в сухом пятне крови трупа определяют содержание гликированного гемоглобина и при увеличении его содержания в 2-3 раза по сравнению с нормой определяют гликемию. Положительный эффект: изобретение позволит определить уровень гликемии за истекшие 3-4 месяца жизни..