Способ оценки биологической активности пептидов Советский патент 1993 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицинской промышленности, а именно к способам оценки биологической активности препаратов.

Цель изобретения - упрощение методики.-

Цель достигается тем, что при оценке биологической активности пептидов, выделенных из сердца, в качестве препарата ткани используют гомогенат сердечной мышцы, активность сукцинатдегидрогена- эы регистрируют спектрофотометрически и при снижении оптической плотности на 60% и более по сравнению с контролем пеп- тиды сердца считают биологически активными.

Пример 1. Белых беспородных крыс- самцов весов 180-200 г под легким эфирным наркозом забивали и извлекали сердце в охлаждаемый на ледяной бане 0,1%-ный раствор KCI. Крупные сосуды удаляли, ткань сердца измельчали ножницами на фрагменты 2-3 мм. несколько раз промывали свежей

порцией охлажденного раствора KCI от крови. Кусочки промытой ткани просушивали бумажным фильтром, быстро взвешивали и гомогенизировали в фарфоровой ступе с кварцевым песком на ледяной бане, суспен- зиррвали в среде определенного состава (120мМ NaCI; 5,8 мМ 4,3 мМ№НСОЗ;1,4 мМ N32P04; 1,5 мМ MgS04; 3 мМ CaCte) из расчета на 1 г гомогената - 10 мм среды, фильтровали через капроновый фильтр. Одновременно готовили раствор кардиалина /в концентрации 10 мг/мл.

В две пробирки наливали по 0,9 мл суспензии гомогената, в одну из пробирок (опытную) добавляли 0,1 мл раствора кардиалина, в другую (контрольную) - 0,1 мл воды. Инкубировали пробы в течение 1 часа на водяной бане при температуре 37°С, затем добавляли в каждую по 0,1 мл 2%-ного раствора тритона ХНОО, энергично встряхивали и Центрифугировали при 1200 g в течение 10 мин температуре 4°С.

ел

С

00

о VI

со ю

4D

Для определения сукцинатдегидроге- назной (СДГ) активности гомогената готовили реакционную смесь следующего состава: 0,28 мМ нитросиний тетразолий, 0,70 мМ ЭДТА (натриевая соль) 40 мМ сукцинат натрия, 0,1 М Na-Na фосфатный буфер рН 7,2. В две пробирки наливали по 1,5 мл реакционной смеси и добавляли по 0,2 мл суперна- танта из опытной и контрольной проб. Реакцию проводили в течение десяти минут на водяной бане при 37°С, останавливали реакцию охлаждением проб на льду, измеряли оптическую плотность против воды при длине волны 540 нм. Значение оптической плотности контрольной пробы должно находиться в интервале 0,6-0,8 о. е. Инкуби- рование гомогената с кардиалином приводило к снижению измеряемой СДГ-активности. Активность кардиалина выражали в процентах снижения активности СДГ, определяя ее по следующей формуле:

ДА, % 100--- 100

DK

где D° - оптическая плотность опытной пробы при длине волны 540 нм;

DK - оптическая плотность контрольной пробы при длине волны 540 нм;

Л А % - снижение активности СДГ, выраженное в процентах.

Из данных табл.1 видно, что при инку- бировании гомогената сердечной ткани с кардиалином в концентрации 10 мг/мл происходит статистически достоверное

снижение активности СДГ более, чем на 50%, что говорит о биологической активности препарата.

П р и м е р 2. Для оценки специфичности действия кардиалина нами исследовано также действие на СДГ - активность сердечного гомогената пептидных биорегуляторов, выделенных из других тканей: тимуса (тималина), простаты (простатилена) и головного мозга (кортексина). Действие всех препаратов исследовали в соответствии с описанной выше методикой.

Как видно из данных, представленных в табл. 2, кардиалин обладает наибольшей 5 способностью снижать уровень СДГ-активности в гомогенате сердечной ткани по сравнению с остальными препаратами.

Формул а изо бретени я

Способ оценки биологической активности пептидов, включающий получение препарата ткани, инкубацию его с исследуемыми пептидами и регистрацию активности сукцинатдегидрогеназы rio НСТ-тесту в сравнении с контролем, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, при оценке биологической активности пептидов, выделенных из сердца, в качестве препарата ткани используют гомо- генат сердечной мышцы, активность сукци- натдегидрогеназырегистрируют спектрофотометрически и при снижении оптической плотности на 60% и более по сравнению с контролем пептиды сердца считают биологически активными. 5

0

5

0

Использование: в области медицинской промышленности для оценки биологической активности препарата. Сущность изобретения: получают гомогенат ткани сердца крысы, вносят препарат пептидов, выделенный из сердца в опытную пробу гомогената, инкубируют с препаратом, определяют активность сукцинатдегидроге- назы спектрофотометрическим методом в опытной и контрольной пробах и при снижении активности сукцинатдегидрогеназы в опытной пробе на 60% и более исходной активности в контроле препарат считают биологически активным. Способ позволяет упростить анализ биологической активности препарата пептидов, выделенных из сердца. 2 табл.

40Таблица Влияние кардиалина различных партий на активность СДГ гомогената сердечной ткани

Примечание: Для Р 0,05.

Влияние пептидов, выделенных из разных тканей, на активность СДГ гомогензта сердечной ткани

Т а б л и ц а 2