(54) СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ИНгаВИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ НА ПИРУВАТДЕГИДРОГЕНАЗУ Изобретейие относится к биологии и может быть применено для ингибировання активности пируватдегидрогеназы в тканях животных. Известно применение окситиамина пнритиамина в качестве средств, обладаю- щих ннгибирующим действием на пируват дегидрогеназу 1 . Однако их поименение приводит к угн тению активности всех тиаминдифосфатзависимых ферментов в организме животных.Ч Известно применение тиохромдифосфат имеющего антикоферментным действием, в качестве средства, обладающего ингибирующим действием на пируватдегндрогиназу 2 . Цель изобрет ния - создание избирательного ингнбирования активности пиру- ватдегидрогеназы в тканях животных, а также расщирение арсенала средств воздействия на живой организм. Цель достигаегся применением тиохро трифосфата J3 качество средства, обладаю щего ингибирующим действием на пируватдегидрогеназу. Изучение антивитаминной активности тиохромтрифосфата проводили на белых мыщах-самках массой 24-26 г. Животным подкожно вводили по О,2 мл водного растворе препарата при физиологическом значении рН в дозе 10 мг/кг в виде однократных подкожных инъекций. Для сравнительной оценки антнкоферментного действия тиохромтрифосфата в тех же условиях и дозах испытывали сильнейщие антивитаминные аналоги тиамина - окситиа мин, а также тиохром, его моно- и дифосфорные эфиры в различны дозах. Определение активности пируватдегидрогеназы в тканях животных проводили по метсщу, сущноогь котороги заключается в том, что при окислении пирувата гомо- генатами исследуемых тканей происходит восстановление ферриаианида калия в ферроцианид. Контроль вели по убыли опти- ческой плотности раствора ни Л 417 им. 993 В контрольные пробирки вносили все компоненты кроме субстрата (пирувата натрия), вместо «оторого добавляли равный объем КСВ. В опытные - все компоненты и субстрат. Реакция начиналась с момента прибавления гомогената. Состав инкубационной смеси: 75 мкмопь. Na-Kфосфатного буфера (О,5 мл), 20 мкмопь М( S QJ (0,1 мл), 6 мкмопь АТФ-натри евой соли (0,1 мл), 2 мкмоль этилендиа минтетрауксусной кислоты-(0,1 мл), 20 мкмопь пирувата натрия (0,1 мл), 255 мкмоль KCF (17 мл), 4,66 мкмол К e(CN)g (0,7 мл), гомогенат тканей (0,4 мл). Пробы хорошо перемеши вали и ставили,на 20 мин на водя11ую баню при , По истечении времени инкубации в каждую пробирку добавляли по 0,3 мл 5О% раствора трихлооуксусной кислоты для осаждения белков. Пробы центрифугировали 15 мин при 15ОО об/мин i в центрифугатах, определяли на спектрофо тометре оптическую плотность раствора. Количество восстановленного феррицианида определяли по калибровочной кривой. Активность фермента выражали в мкмопь восстановленного Кз (.Fe (CH)g на 1 г белна в течение 20 мвд при 25°С. Тиохромтрифосфат, выделенный из смеси тиохромтрифосфатов, вводили в виде однократной подкожной иньекции белым мышам в дозе 10 мг/кг при физиологическом значении рН водного раствора. Через 3 ч после инъекции в срок максимального падения активности пируватдегидрогеназы при применении различных уже известных антивитаминов В, животных забивали методом декапитации. Исследуемые ткани печени и сердца гомогенизировали ма холоду с 0,15 М раствором КСР . В приготовленных гомогенатах определяли активность пируватдегидрогеназы, степень угнетения которой является одним из принятых критериев при оценке глубины авитаминоза В. В таблице представлены абсолютные значения активвости пируватдегидрогеназы после введения тиохромтрифосфата и сртвниваемых препаратов. Символом Р,бозначена достоверность различий по отношению к контрольной группе животных. Величины ,О5 приняты за достовернью Результаты проведенного исследования показали, что тиозфомтрифосфат в отличие от семого тиохрома и его моно- и дифосфорйых эфиров значительно угнетает активность пируватдегидрогеназы печени и сердца животных и обладает гораздо более сильным антивитаминным действием в отношении названного фермента в сравнении с биологически неактивными в этой дозе окситиамином и пиритиамином. Активность транскетопазы печени, сердjua, крови при введении тиохромтрифосфата в тех же условиях опыта не изменялась. Использование предлагаемого 5 редства в качестве антогониста тиамина в от личие от широко используемых в экспериментальной витаминологической практик окситиамина и пиритиамина дает возможность избирательно ингибировать активность одного из тиаминдифосфатзависимых ферментов (пируватдегидрогеназы) в тканях животных, что имеет важное значение при постановке различных моделей авитаминоза Bf. Формула изобретения Применение тиохромтрифосфата в качестве средства, обладающего ингибируюшим действием на пируватдегидрогеназу. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Биохимия витаминов и антивитаминов, М., Колос, 1972, с. 112. 2.Scheeeenbor yer A.,Wi1iter к., Gi НоЪпег etaC . U. Ptrasid.Cliem, 1966, V 346, p. 123.
